阿托伐他汀中有机杂质检测方案(液相色谱仪)

阿托伐他汀从传统5 um 色谱柱到Agilent Poroshell 120 色谱柱的EP/USP 方法转移 应用简报 小分子药物与仿制药 作者 摘要 Rui Yu浙江美诺华制药有限公司 Rongjie Fu 根据欧洲药典或美国药典，采用传统的 5-pm 色谱柱对阿托伐他汀钙有机杂质进行分析。将该方法转移到表面多孔的 Agilent Poroshell 120 SB-C8色谱柱上，可显著缩短分析时间并节省溶剂，同时符合美国药典<621>章指南的规定。Poroshell 120 SB-C8色谱柱能满足所有系统适应性的要求。 安捷伦科技(上海)有限公司 Agilent Technologies 前言 将液夜色谱方法从5 pm粒径色谱柱转移到诸如亚 2 pm 和2.7 um表面多孔填料色谱柱等小颗粒填料的色谱柱上，得到了广泛的关注。2.7 pm 表面多孔填料与亚 2 pm 全多孔填料具有相似的高柱效。这主要归因于更短的传质距离和更窄的粒径分布。此外，更大粒径导致更低背压，因此这类色谱柱几乎能够运用到所有液相色谱系统上。将分析方法从较大颗粒填料的色谱柱转移到这种表面多孔型小颗粒填料色谱柱上，可以极大程度地节省时间和成本，因为表面多孔填料色谱柱能够在较快流速下实现最佳分离，并且可以使用更短的色谱柱，并获得相似的分离度[1]。 本应用简报描述了采用传统 5 um USP L7 色谱柱分析阿托伐他汀钙中 EP/USP 有机杂的的方法[2.3]，然后将该方法转移到较短的2.7 um 表面多孔型 Poroshell 120 色谱柱上。按照 USP色谱系统要求对分析进行对比。 材料与方法 所有试剂和溶剂均为 HPLC或分析纯级。标准品由美诺华药业提供。四氢呋喃、乙腈、乙酸铵和冰醋酸购于北京百灵威科技有限公司。 液相色谱分析采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统， 包括： Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) Agilent 1290 Infinity 自动进样器 (G4226A) Agilent 1290 Infinity 柱温箱(G1316C) ( Agilent 1290 Infinity 二极管阵列检测器 (G4212A) ) 条件 色谱柱： Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 4.6×250 mm， 5 um (部件号959990-902) Agilent Poroshell 120 EC-C18， 3.0×100mm， 2.7 um (部件号697975-302) 洗脱液： A)乙腈，无稳定剂的四氢呋喃和缓冲液(3.9g/L乙酸 铵水溶液，用冰醋酸调节至 pH 5.0±0.1) (21：12：67) B)乙腈，无稳定剂的四氢呋喃，和缓冲液(同上) (61：12：27) 4.6×250mm柱梯度： 时间 (min) %B 0 0 40 0 0 0 3.0×100mm柱梯度： 时间 (min) %B 0 0 16 0 28 0 0 流速： 1.5 mL/min (4.6×250 mm柱)， 0.64 mL/min (3.0×100 mm 柱) 柱温： 35°C 进样量： 10pL (4.6×250mm 柱)， 1.7 pL(3.0×100 mm 柱) 检测器： UV 244 nm 结果与讨论 图1显示了分析阿托伐他汀钙有机杂质的系统适应性。图1中的色谱图为采用 USP 中规定的4.6×250mm， 5 um 的L7分木柱 (本实验中即 ZORBAX XDB-C8和SB-C8色谱柱)进行分析的结果。使用 SB-C8柱可以在 115 min 内对阿托伐他汀和4种杂质进行轻松分离，阿托伐他汀和杂质B的分离度为1.69，远远优于 USP规定的分离度1.5。而XDB-C8柱无法分离这对色谱峰。SB-C8柱不封端的填料比封端的填料具有更独特的选择性。 图 1. Agilent ZORBAX XDB-C8 和 Agilent ZORBAX SB-C8色谱柱分析阿托伐他汀钙杂质的 USP 系统适应性 然后将这个方法分别转移到3.0×100 mm， 2.7 pm Poroshell120 EC-C8和 Poroshell 120 SB-C8色谱柱上，如图2所示。分析在 40 min 内完成，阿托伐他汀和杂质 B 在 Poroshell 120 EC-C8的分离度为0.97， 而在 Poroshell 120 SB-C8的分离度为 1.67，满足 USP 的要求。 图 2. Agilent Poroshell 120 EC-C8 和 Agilent Poroshell 120 SB-C8色谱柱分析阿托他汀钙杂质的 USP系统适应性 采用 Poroshell 120 色谱柱，所有杂质与阿托伐他汀均实现分离，并且分析时间减少60%(图3)。 图 3. Agilent ZORBAX SB-C8 与 Agilent Poroshell 120 SB-C8色谱柱分析 USP 阿托伐他汀钙所得的色谱图比对 采用 ZORBAX SB-C8 和 Poroshell 120 SB-C8分析阿托伐他汀实际样品，结果分别如图4和图5所示。实际样品的色谱图未显示出目标杂质的色谱峰。采用传统5 pm 色谱柱和 2.7 pm Poroshell120色谱柱的两种方法都适用于阿托伐他汀杂质的分析。 图 4. Agilent ZORBAX SB-C8色谱柱分析阿托伐他汀标样和实际样品的系统适应性 图 5. Agilent Poroshell 120 SB-C8 色谱柱分析阿托伐他汀标样和实际样品的系统适应性 根据 USP 中阿托伐他汀钙的分析方法，分别测定了基于两种色谱柱的色谱系统要求。表1显示了采用两种色谱柱所测得的数值满足 USP 色谱系统要求。 表 1. USP 色谱系统要求和阿托伐他汀的测定结果 Agilent Agilent ZORBAX Poroshell 120 USP 要求 SB-C18， 5 pm SB-C8， 2.7 pm 分离度：阿托伐他汀杂质B和阿托伐他汀的 1.69 1.67 分离度为 NLT 1.5 拖尾因子： NMT1.6 1.07 0.92 相对标准偏差： NMT 0.6% 0.11% 0.15% 结论 使用 5 pm 色谱柱分析阿托伐他汀的传统 USP/EP 方法被成功转移到了表面多孔的 Agilent Poroshell 120 色谱柱上。对较大颗粒填料色谱柱进行方法转移能够大幅节省时间和成本。采用 AgilentZORBAX SB-C8 和 Agilent Poroshell 120 SB-C8色谱柱的两种方法都满足了 USP 色谱系统要求。 ( 参考文献 ) ( 1， Anne Mack.“使用 Agilent Poroshell 120 EC-CN 色谱柱对苯海拉明和伪麻黄碱进行 USP 方法分析”，应用简报， 安捷 伦科技，出版号5991-1687CHCN (2013) ) ( 2. Anon. Atorvastatin Calcium. USP-35 USP. The United States Pharmacopeial Convention， Rockville， MD， USA (2013) ) ( 3. Anon. Atorvastatin Calcium Trihydrate. EP Monograph， 04/2011：2191 EDQM Co u ncil of Europe， Strasbourg， France (2011) ) 更多信息 这些数据仅代表典型的结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com/chem/cn www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2014 2014年7月21日，中国印刷 5991-4907CHCN Agilent Technologies 摘要根据欧洲药典或美国药典，采用传统的5-μm 色谱柱对阿托伐他汀钙有机杂质进行分析。将该方法转移到表面多孔的Agilent Poroshell 120 SB-C8 色谱柱上，可显著缩短分析时间并节省溶剂，同时符合美国药典<621> 章指南的规定。Poroshell 120 SB-C8 色谱柱能满足所有系统适应性的要求。前言将液相色谱方法从5 μm 粒径色谱柱转移到诸如亚2 μm 和2.7 μm 表面多孔填料色谱柱等小颗粒填料的色谱柱上，得到了广泛的关注。2.7 μm 表面多孔填料与亚2 μm 全多孔填料具有相似的高柱效。这主要归因于更短的传质距离和更窄的粒径分布。此外，更大粒径导致更低背压，因此这类色谱柱几乎能够运用到所有液相色谱系统上。将分析方法从较大颗粒填料的色谱柱转移到这种表面多孔型小颗粒填料色谱柱上，可以极大程度地节省时间和成本，因为表面多孔填料色谱柱能够在较快流速下实现最佳分离，并且可以使用更短的色谱柱，并获得相似的分离度。本应用简报描述了采用传统5 μm USP L7 色谱柱分析阿托伐他汀钙中EP/USP 有机杂质的方法，然后将该方法转移到较短的 2.7 μm 表面多孔型Poroshell 120 色谱柱上。按照USP 色谱系统要求对分析进行对比。结论使用5 μm 色谱柱分析阿托伐他汀的传统USP/EP 方法被成功转移到了表面多孔的 Agilent Poroshell 120 色谱柱上。对较大颗粒填料色谱柱进行方法转移能够大幅节省时间和成本。采用 Agilent ZORBAX SB-C8 和 Agilent Poroshell 120 SB-C8 色谱柱的两种方法都满足了USP 色谱系统要求。