动物性食品中磺胺类药物的残留量检测方案(液相色谱仪)

使用固相萃取-高效液相色谱法测定动物性食品中13种磺胺类药物的残留量 应用简讯 食品检测与农业 作者 前言 ( 孙锦兰 ) 安捷伦科技(中国)有限公司 磺胺类药物是一种广谱抗菌药，主要用于预防和治疗感染性疾病，因其性质稳定、品种多、价格低等优点，常作为饲料添加剂或动物疾病治疗药物得到广泛应用。但目前磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中残留，引起了生态环境污染，并对人类健康造成潜在威胁。本方法参照食品安全国家标准 GB29694-2013，建立了动物性食品中13种磺胺类药物残留分析的高效液相色谱法。该方法适用于鸡肉和猪肝中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪和磺胺苯吡唑单个或多个药物残留量的检测。 磺胺类药物的分析 对试料进行样品前处理。称取试料5±0.05 g， 于50mL具塞离心管中，加入无水硫酸钠5±0.05g，加乙酸乙酯20mL， 涡旋 2 min， 5000 rpm 离心5 min， 移取上清液于50mL离心管中，残渣中加乙酸乙酯20mL重复提取一次，合并两次提取液于40℃下氮吹至吹干。加入 0.1 mol/L 盐酸溶液 4mL 洗离心管， 转至15mL离心管中；再用 0.1 mol/L 盐酸溶液 3mL 洗离心管，转至同一15 mL 离心管中。再用正己烷3mL洗离心管，转至同车15mL离心管中，涡旋混合 30 s， 5000 rpm离心5 min， 弃正己烷。再次用正己烷3mL洗离心管，转至同一15mL离心管中，涡旋混合30s， 5000 rpm 离心5 min， 弃正己烷，取下层液备用。 所得备用液经 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱净化和富集后，使用配备了 Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱柱的高效液相色谱系统对其中的13种磺胺类药物的残留量进行快速分析，如图1所示为固相萃取操作流程，如表1所示为液相色谱分析条件。 图1.固相萃取操作流程图 表1.液相色谱条件 色谱柱： Poroshell 120 EC-C18， 4.6×100 mm， 2.7 pm 流速： 1 mL/min 柱温： 30℃ 进样体积： 10 pL 紫外-可见检测器检测波长： 270 nm 流动相： A) 0.1%甲酸 B) 乙青 梯度洗脱： 时间 16 20 9 40 9.1 12 12.5 16 25 16 如图2和图3所示，本文所述固相萃取-高效液相色谱法适用于鸡肉和猪肝中13种磺胺类药物残留的检测，基质对检测结果无明显干扰。通过计算得到此方法鸡肉定量限为10 pg/kg，猪肝定量限为25 pg/kg。 图2.采用固相萃取-高效液相色谱法分析 0.2 pg/mL 13种磺胺类药物混合标准溶液(A)、鸡肉空肉空样(B)、添加水平 40 ug/kg 的鸡肉空白添加磺胺混标试样(C)所得色谱图：其中a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、l、m分别代表磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪和磺胺苯吡唑 图3.采用固相萃取-高效液相色谱法分析1 pg/mL 13种磺胺类药物混合标准溶液(A)、猪肝空白试样(B)、添加水平200 pg/kg 的猪肝空白添加磺胺混标试样(C)所得色谱图：其中 a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、l、m分别代表磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪和磺胺苯吡唑 实验在10-2500 pg/L 浓度范围内测试了13种磺胺类药物的定量线性，所得结果表明所有化合物在此浓度范围内具有良好的线性相关性，相关系数R²均大于0.999，如表2所示为各磺胺类药物的回归方程及相关系数。 表2.13种磺胺类药物的回归方程及相关系数 磺胺类药物 回归方程 相关系数R 磺胺醋酰 (N-Sulfanilylacetamide) Y=0.048X+0.430 0.999 磺胺吡啶 (Sulfapyridine) Y=0.036X-0.114 0.999 磺胺噁唑 (Sulfamoxole) Y=0.038X-0.101 0.999 磺胺甲基嘧啶(Sulfamerazine) Y=0.038X-0.914 0.998 磺胺二甲基嘧啶 (Sulfamethazin) Y=0.036X-0.109 0.999 磺胺甲氧哒嗪 (Sulfamethoxypyridazine) Y=0.036X-0.111 0.999 苯酰磺胺 (Sulfabenzamine) Y=0.038X-0.069 1.000 磺胺间甲氧嘧啶 (Sulfamonomethoxine) Y=0.038X-0.151 0.999 磺胺氯哒嗪 (Sulfachloropyridazine) Y=0.040X-0.189 0.999 磺胺甲噁唑 (Sulfamethoxazole) Y=0.038X-0.080 0.999 磺胺异噁唑 (Sulfafurazole) Y=0.038X-0.120 0.999 磺胺二甲氧哒嗪 (Sulfadimethoxine) Y=0.038X-0.097 0.999 磺胺苯吡唑 (Sulfaphenazolum) Y=0.033X-0.090 0.999 如表3所示，在 10-80 pg/kg 添加水平下，鸡肉基质的空白白品加标回收率为 68.49%-89.92%， RSD (%)≤7.48(n=6)； 在 25-200 pg/kg 添加水平下，猪肝基质的空白样品加标回收率为65.8%-86.37%， RSD (%)≤ 7.94 (n=6)， 表明该方法的准确度和精密度完全能满足磺胺类药物残留分析的要求。 表3.鸡肉和猪肝基质的空白样品加标回收率和 RSD 值(n=6) 鸡肉 猪肝 磺胺类药物 添加水平 回收率 RSD 值 添加水平 回收率 RSD 值 (ug/kg) (%) (n=6) (ug/kg) (%) (n=6) 磺胺醋酰 10 78.54 3.19 25 72.96 5.09 40 75.26 3.72 100 72.19 4.86 80 76.52 2.68 200 66.48 4.66 磺胺吡啶 10 80.63 3.16 25 78.94 4.99 40 81.01 3.49 100 78.61 5.08 80 78.49 3.92 200 70.89 5.16 磺胺噁唑 10 84.54 4.18 25 82.18 5.24 40 85.21 4.46 100 86.37 5.15 80 80.87 3.26 200 83.14 5.32 磺胺甲基嘧啶 10 72.86 3.81 25 79.85 6.01 40 73.49 2.98 100 77.69 5.99 80 70.79 3.05 200 72.37 5.64 磺胺二甲基嘧啶 10 84.95 4.76 25 82.14 7.88 40 89.92 3.49 100 83.85 4.15 80 84.32 3.08 200 80.99 5.33 磺胺甲氧哒嗪 10 80.89 2.99 25 78.41 5.73 40 81.64 3.51 100 79.63 5.71 80 86.78 3.29 200 74.22 5.39 鸡肉 猪肝 磺胺类药物 添加水平 回收率 RSD值 添加水平 回收率 RSD 值 (ug/kg) (%) (n=6) (ug/kg) (%) (n=6) 苯酰磺胺 10 78.65 5.19 25 77.89 5.61 40 74.74 3.64 100 81.25 5.84 80 80.75 6.26 200 78.72 6.04 磺胺间甲氧嘧啶 10 79.85 3.79 25 74.82 7.19 40 80.83 3.68 100 79.09 5.76 80 74.47 4.92 200 80.45 5.35 磺胺氯哒嗪 10 72.85 3.84 25 76.92 4.71 40 73.63 3.91 100 73.19 4.95 80 72.49 7.48 200 66.79 7.06 磺胺甲恶唑 10 75.85 3.64 25 75.15 4.99 40 78.76 3.93 100 69.93 5.28 80 76.91 3.28 200 78.27 5.61 磺胺异唑 10 70.17 4.79 25 70.49 6.03 40 71.64 2.91 100 68.14 5.74 80 68.49 3.14 200 70.61 5.81 磺胺二甲氧哒嗪 10 82.79 4.93 25 78.34 4.16 40 83.97 346 100 72.99 4.87 80 86.43 3.82 200 80.63 7.94 磺胺苯吡唑 10 75.91 5.56 25 72.19 5.03 40 76.67 5.95 100 65.30 5.11 80 70.19 3.76 200 69.33 5.47 消耗品订购信息 Agilent Bond Elut Plexa PCX 固相萃取柱： 60mg， 3 mL， 部件号12108603Agilent Poroshell 120 EC C18 色谱柱：4.6×100mm， 2.7 pm，部件号695975-902 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 安捷伦科技(中国)有限公司，2016 2016年10月17日，中国印刷 5991-7521CHCN Agilent Technologies 磺胺类药物是一种广谱抗菌药，主要用于预防和治疗感染性疾病，因其性质稳定、品种多、价格低等优点，常作为饲料添加剂或动物疾病治疗药物得到广泛应用。但目前磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中残留，引起了生态环境污染，并对人类健康造成潜在威胁。本方法参照食品安全国家标准 GB 29694-2013，建立了动物性食品中 13 种磺胺类药物残留分析的高效液相色谱法。该方法适用于鸡肉和猪肝中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺二甲氧哒嗪和磺胺苯吡唑单个或多个药物残留量的检测。