面包中合成着色剂检测方案(液相色谱柱)

攻克“合成着色剂”最难检测基质----面包（GB 5009.35-2016） 在食品安全检测中，同样的目标物，存在于不同的基质中时，前处理方法是完全不同的。 月旭曾提供过饮料、红酒、硬糖中的人工合成着色剂检测方案。这一次，当常见的人工合成着色剂，存在于面包中时，由于面包基质杂质干扰大，影响目标物的前处理效果和回收率，使其前处理变成了一个全新的方法开发工作。 适用范围 适用于食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝、赤藓红等 7种着色剂的测定（本实验用面包为基质） 参考标准：《GB 5009.35-2016 食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》 溶液的配置 1）标准储备液：分别精确称取7种色素50mg，用pH为6的水溶解并定容到50mL，浓度为1000mg/L。 2）100mg/L标准使用液：精确移取7种色素1000mg/L单标5mL，用pH为6的水溶解并定容到50mL，浓度为100mg/L 3）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45µm滤膜过滤。 4）甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇 60 mL，甲酸 40 mL，混匀。 5）柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至 100 mL，溶解混匀。 6）氨水溶液：量取2mL氨水，加水至100mL 7）无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇 70mL，氨水溶液（6）20mL，水10mL，混匀。 8）pH=6 的水：水加柠檬酸溶液调节至 pH 到 6。 9）提取液：先移取100mL乙醇和50mL乙腈，混匀。再移取140mL已混匀的乙醇-乙腈+60mL水+2mL氨水，混匀 提取步骤 1) 取2.0 g样品，加入20 mL提取液，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液； 2) 取下层残留物，加入10 mL提取液，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液； 3) 将下层残留物用10mL提取液，按照步骤(2)重复提取一次，合并三次上清液； 4) 将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。 SPE净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom®PA(聚酰胺小柱)规格：1000 mg/6mL。 活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，5 mL pH=6 的水，弃去； 上样：待净化液全部上样，控制流速，不宜过快，弃去； 淋洗：10 mL pH = 4 的水，20 mL 甲醇-甲酸（6+4）洗去天然色素，10 mLpH=7 的水洗至中性，弃去 洗脱：15mL无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液，收集于蒸发皿中，抽干 将洗脱液置于80 ℃ 水浴挥干，用水定容至 5 mL，过0.45μm水膜，上机测定。 色谱条件 色谱柱：月旭Ultimate®XB-C18 4.6×250mm,5μm 流动相：A-0.02mol/L乙酸铵溶液，B-甲醇（梯度见下表1） 流速：1.0mL/min 柱温：30℃ 进样量：20μL 检测波长：245nm 表1：液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 0.02 mM 乙酸铵溶液/% 甲醇/% 0 95 5 10 80 20 18 20 80 25 20 80 25.1 95 5 6、色谱图或者加标回收率结果 图1.合成着色剂混标2mg/L图谱 图2面包样品加标5mg/kg过PA图谱 表2.过PA小柱加标回收表 PA 名称 加标水平mg/kg 平均回收率% RSD%（n=4） 1 柠檬黄 5 94% 3.68% 2 新红 5 95% 3.35% 3 苋菜红 5 95% 3.66% 4 胭脂红 5 89% 2.81% 5 日落黄 5 96% 3.93% 6 亮蓝 5 88% 2.71% 7、相关产品信息 声明:除非另有说明，此报告结果仅对该测试样品负责。本报告未经公司许可，不可复制。 Add:浙江省金华市婺城区双林南街168号Tel:400-810-6969 邮编：321000E-mail:lingyuyu@welchmat.com 在食品安全检测中，同样的目标物，存在于不同的基质中时，前处理方法是完全不同的。月旭曾提供过饮料、红酒、硬糖中的人工合成着色剂检测方案。这一次，当常见的人工合成着色剂，存在于面包中时，由于面包基质杂质干扰大，影响目标物的前处理效果和回收率，使其前处理变成了一个全新的方法开发工作。就这样，软面包变成了“硬骨头”，看看月旭能啃下来吗？1 适用范围适用于食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝、赤藓红等 7种着色剂的测定（本实验用面包为基质）参考标准：《GB 5009.35-2016 食品安全国家标准食品中合成着色剂的测定》2 溶液的配置1）标准储备液：分别精确称取7种色素50mg，用pH为6的水溶解并定容到50mL，浓度为1000mg/L。2）100mg/L标准使用液：精确移取7种色素1000mg/L单标5mL，用pH为6的水溶解并定容到50mL，浓度为100mg/L3）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。4）甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇 60 mL，甲酸 40 mL，混匀。5）柠檬酸溶液：称取 20 g 柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至 100 mL，溶解混匀。6）氨水溶液：量取2mL氨水，加水至100mL7）无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取无水乙醇 70mL，氨水溶液（6）20mL，水10mL，混匀。8）pH=6 的水：水加柠檬酸溶液调节至 pH 到 6。9）提取液：先移取100mL乙醇和50mL乙腈，混匀。再移取140mL已混匀的乙醇-乙腈+60mL水+2mL氨水，混匀3 提取步骤1)  取2.0 g样品，加入20 mL提取液，振荡2 min，40℃水浴超声提取10 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；2)  取下层残留物，加入10 mL提取液，振荡2 min，40℃水浴超声提取15 min，6000 rpm下离心2 min，收集上清液；3)  将下层残留物用10mL提取液，按照步骤(2)重复提取一次，合并三次上清液；4)  将上清液在40℃水浴条件下，减压蒸至约15 mL，再加入3 mL甲酸混匀，待净化。4 SPE净化步骤SPE柱：月旭Welchrom®PA(聚酰胺小柱)规格：1000 mg/6mL。活化：5 mL 甲醇、5 mL 水，5 mL pH=6 的水，弃去；上样：待净化液全部上样，控制流速，不宜过快，弃去；淋洗：10 mL pH = 4 的水，20 mL 甲醇-甲酸（6+4）洗去天然色素，10 mLpH=7 的水洗至中性，弃去洗脱：15mL无水乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液，收集于蒸发皿中，抽干将洗脱液置于80 ℃ 水浴挥干，用水定容至 5 mL，过0.45μm水膜，上机测定。5 色谱条件色谱柱：月旭Ultimate®XB-C18  4.6×250mm,5μm流动相：A-0.02mol/L乙酸铵溶液，B-甲醇（梯度见下表1）流速：1.0mL/min柱温：30℃进样量：20μL检测波长：245nm表1.液相色谱梯度洗脱条件6 色谱图或者加标回收率结果图1.合成着色剂混标2mg/L图谱图2.面包样品加标5mg/kg过PA图谱表2.过PA小柱加标回收表7 相关产品信息