猪肝中克伦特罗检测方案(液质联用仪)

「应用纪要WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「应用纪要 使用Xevo TQ-XS Unispray离子源检测猪肝中克伦特罗 甄云鹏，余建龙 背景 在WADA(World Anti-Doping Agency 世界反兴奋剂机构)清单和有关食用违禁药物报道中，克伦特罗(Clenbuterol)都是重点监控化合物之一。克伦特罗属于瘦肉精一种，属于β-受体激动剂，可以松弛支气管平滑肌的作用，用于治疗哮喘。当克伦特罗作为添加剂混入饲料，动物食用后会促进快速生长、提高瘦肉率，并使肉的颜色鲜艳，更能吸引消费者购买。 据相关报道，盐酸克伦特罗属于非蛋白质激素，耐热，使用后会在猪体组织中形成残留，尤其是在猪的肝脏等内脏器官残留较高，食用后直接危害人体健康。其主要危害是：出现肌肉振颤、心慌、战栗、头疼、恶心、呕吐等症状，特别是对高血压、心脏病、甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更大，严重的可导致死亡。 应用优势 通过对比不同离子源(Unispray/ESI)检测克伦特罗结果， Unispray离子源比传统ESI离子源检测克伦特罗的灵敏度有较大提高。 根据农业部235号公告，克伦特罗属于“禁止使用药物，在动物性食品中不得检出”。按照现行国家/行业检测标准主要分为酶联免疫法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法等，在SN/T1924-2011标准中使用液相色谱-质谱方法检测动物源性食品中克伦特罗检出限为0.05 pg/kg。 使用Xevo TQ-XS Unispray离子源检测猪肝基质中的克伦特罗，仪器检出限能够达到0.5fg/pL甚至更低。 关键词 ( Waters Unispray；Xevo TQ-XS；猪肝；克牛特罗 ) 仪器方法 LC Conditions Instrument： ACQUITYI-Class Column： ACQUITY BEH，50mm×2.1 mm， 1.7 um Flow rate： 0.4 mL/min Mobile phase A：0.1% FA+Water Mobile phase B：：Acetonitrile Column Temp： 40°C Sample Temp： 10°C MS conditions Instrument： Xevo TQ-XS lonization mode： Unispray Positive MS acquisition： MRM= m/z 277-m/z 203 Time (min) A% B% Curve 0.00 90 10 initial 0.50 90 10 6 1.00 50 50 6 4.00 10 90 6 4.10 90 10 6 5.00 90 10 6 UPLC Gradient， 实验设计及目的 取猪肝基质空白提取液，添加克伦特罗标准品，添加浓度为5.0 fg/uL。 分别使用1：1(甲醇：水)配制0；0.5 fg/pL；1.0 fg/pL；10 fg/pL；50 fg/pL；100 fg/pL；1000 fg/pL克伦特罗标准曲线。 使用Unispray离子源测定克伦特罗连续10针的重现性； 使用Unispray离子源检测肝肝中克伦特罗及加标样品； 分别使用Unispray/ESI离子源检测克伦特罗灵敏度； 实验结果与讨论 克伦特罗标准曲线： 图1.克伦特罗标准曲线。 克伦特罗标准品(1.0 fg/mL)连续10针重现性%RSD. 进针 峰面积 1 6465 2 6756 3 6404 4 6779 5 6494 6 6706 7 6532 8 6800 9 6654 10 6615 AVERAGE 6620.5 STDEV 141.0 %RSD 2.13 表1.浓度为1.0 fg/pL重现性%RSD=2.13(n=10)。 实验结果 标准工作曲线最低点各化合物的色谱图 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277>203.1(CLEN) 6800 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 20171117033 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277>203.1 (CLEN) 6532 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 20171117032 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277>203.1 (CLEN) 6706 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 20171117031 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277> 203.1 (CLEN) 6494 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 20171117030 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277>203.1 (CLEN) 6779 1.05 1.10 1.15 1.20 1.25 1.30 1.35 1.40 1.45 20171117029 MRM of 3 Channels TS+ 1.27 277> 203.1 (CLEN) 6404 图2.浓度为1.0 fg/puL重现性(n=10)。 使用UNISPRAY离子源检测克伦特罗仪器灵敏度 图3浓度为0.5 fg/pL 克伦特罗(5 fg on column)S/N=23(Peak/Peak)； 图4浓度为1.0 fg/pL 克伦特罗(10 fg on column)S/N=48 (Peak/Peak)。 图3.克伦特罗信噪比(0.5fg/pL)。 图4.克伦特罗信噪比(1.0 fg/uL). 样品检测结果 猪肝基质空白未检出(低于方法检出限)，猪肝基肝空白加标检出浓度3.7fg/pL(添加浓度为5.0 fg/pL)，样品加标回收率为74%。 图5. Blank(1：1MeOH：Water)提取离子流图。 图6.猪肝基质空白提取离子流图。 图7.猪肝基质空白加标提取离子流图(加标浓度5.0 fg/uL)。 使用ESI离子源检测克伦特罗结果 图8.使用ESI离子源检测克伦特罗信噪比(0.5 fg/pL)。 结论 ( 使用Xevo TQ-XS Unispray离子源检测猪肝基质中的克伦特罗，仪器检出限能够达到 0.5 fg/pL甚至更低。 ) 连续10针克伦特罗(1.0fg/pL)重现性%RSD=2.13。标准曲线良好R>0.997。猪肝基质空白中添加克伦特罗标准品(5.0fg/pL)加标回收率达到74%。 ( 通过对比不同离子源(Unispray/ESI)检测克伦特罗结果(图3，图8)， Unispray离子源 比传统ESI离子源检测克伦特罗的灵敏度有较大提高。 ) 扫一扫，关注沃特世微信 Waters 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)820 2676WWW.Waters.com 使用Xevo TQ-XS Unispray离子源检测猪肝中克伦特罗 根据农业部235号公告，克伦特罗属于“禁止使用药物，在动物性食品中不得检出”。按照现行国家/行业检测标准主要分为酶联免疫法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法等，在SN/T 1924-2011标准中使用液相色谱-质谱方法检测动物源性食品中克伦特罗检出限为0.05 μg/kg。