猪肉中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶等检测方案(固相萃取)

动物性食品中磺胺类药物多残留检测的固相萃取 实验目的 本研究利用固相萃取法作为猪肉样品中磺胺类药物残留检测的前处理方法， HPLC 法作为检测手段。MCX 固相萃取柱 60mg/3mL(20301 MC00603)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。 二、 实验目标物 磺胺醋酰(CAS：144-80-9)，磺胺吡啶(CAS：144-83-2)，磺胺对甲氧嘧啶(CAS：651-06-9)，磺胺甲基嘧啶(CAS：127-79-7)，磺胺二甲基嘧啶(CAS：57-68-1) 三、 应用范围 本方法适用于动物性食品中磺胺类药物多残留的 HPLC 检测及确证。 四、 参考标准 《GB 29694-2013食品安全国家标准动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》。 五、 实验材料 MCX 固相萃取柱60mg/3mL(20301 MC00603)； W 品牌 MCX 固相萃取柱60mg/3mL。 六、 实验方法 1、样品提取 称取猪肉试料(5±0.05)g， 于50mL离心管中，加乙酸乙酯20mL， 涡旋 2 min， 4000 r/min离心5 min， 取上清液于 100 mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20 mL， 重复提取一次，合并两次提取液。鸡心瓶中加0.1 mol/L盐酸溶液 4mL，于40℃下旋转蒸发浓缩至少于3mL，转至10 mL离心管中。用0.1 mol/L 盐酸溶液 2 mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中。再用正己烷3mL洗鸡心瓶，将正己烷转至同烷离心管中，涡旋混和30 s， 3000 r/min 离心5min，弃正己烷。再次用正己烷3mL洗鸡心瓶，转至同一离心管中，涡旋混和30 s， 3000 r/min离心5 min， 弃正己烷，取下层液备用。 2、SPE柱净化 (1)活化：MCX柱依次用甲醇2mL 和 0.1 mol/L 盐酸溶液2 mL活化。 (2)上样和洗脱：取备用液过柱，控制流速1mL/min。依次用 0.1 mol/L 盐酸溶液1mL和50%甲醇乙腈溶液2mL淋洗，弃去淋洗液。用5%氨化甲醇4mL洗脱，收集洗脱液。 (3)重新溶解：洗脱液于40℃氮气吹干，加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL 溶解残余物，滤膜过滤，供高效液相色谱测定。 3、HPLC条件 设备： Waters Alliance 2695 检测器： Waters 2487 双波长检测器；检测波长：270nm 色谱柱： Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250mm) 流动相：A：乙腈B：0.1%甲酸水溶液 洗脱方式：梯度洗脱 表1梯度洗脱条件 时间/min A% B/% 0.0 17 83 5.0 17 83 10.0 20 80 22.0 40 60 22.1 90 10 28.0 90 10 29.0 17 83 33.0 17 83 流速：1mL/min 柱温：室温 进样体积：20 pL 七、实验结果 1、0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果 表2 0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均 回收率(%) RSD(%) 1 2 3 磺胺吡啶 106.00 106.50 103.00 105.17 1.84 磺胺甲基嘧啶 102.50 104.50 105.50 104.17 1.45 磺胺二甲基嘧啶 104.50 105.00 104.50 104.67 0.28 磺胺对甲基嘧啶 103.50 102.50 102.50 102.83 0.56 表3W品牌0.2mg/kg猪肉基质中磺胺的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 磺胺吡啶 104.00 110.00 107.00 3.86 磺胺甲基嘧啶 106.50 106.50 106.50 0.00 磺胺二甲基嘧啶 107.00 106.50 106.75 0.33 磺胺对甲基嘧啶 106.50 107.00 106.75 0.33 2、添加水平为0.2mg/kg猪肉基质中磺胺检测色谱图 图1添加水平为0.2mg/kg猪肉基质中磺胺检测色谱图 00 本研究利用固相萃取法作为猪肉样品中磺胺类药物残留检测的前处理方法，HPLC法作为检测手段。MCX固相萃取柱60mg/3mL(20301 MC00603)柱净化效果良好，回收率满足测试要求，重现性好，与知名厂商同型号柱性能相当。