动物源性样品中磺胺类药物检测方案(固相萃取)

RT：0.00-15.01 动物源性样品中磺胺类药物的检测(SPE-LC/MS)使用 200mg 6mL HyperSep Retain-PEP 固相萃取柱(部件号：60107-212) 样品制备 LC/MS 方法 将猪肉、鸡肉和蛋，搅碎、混匀，精密称取5g，置于50mL离心管中，加入100pL， 1pg/mLC-磺胺甲恶唑再加入20g无水硫酸钠和20mL乙腈(蛋液样品加25g无水硫酸钠，且无水硫酸钠与乙腈均在临匀质前加入)，匀质2分钟，3000r/min离心10分钟，取上层清液于另一离心管中，加入10mL正己烷，涡流30s，弃去正己烷层，加入10mL乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层液转入100mL 旋转发瓶中，样品再用10mL 乙酸乙酯萃取1次，合并萃取液。在40℃下浓缩萃取液至0.5mL左右，用4mL超纯水溶解用于固相萃取。 色谱柱 Hypersil Gold， 5pm， 2.1×150mm 货号 25005-152130 流动相 A： 甲醇； B：0.1% 甲酸、2mM甲酸铵水溶液梯度洗脱程序 表1.流动相梯度洗脱条件 活化 6mL甲醇，6mL水 上样 时间 (min) 0 1 7 9 12 12.1 12.3 14.8 15 A 10 10 35 70 70 10 10 10 10 B 90 90 65 30 30 90 90 90 90 流速(pL/min) 250 250 250 250 250 250 300 300 250 样品 进样量 清洗 10pL 2mL水，抽干柱子 5min 流速 洗脱 250pL/min 6mL甲醇溶液，6mL乙酸乙酯， 1~2mL/min MS 条件电喷雾电离源(ESI)，正离子模式选择反应监控(SRM)扫描模式喷雾电压4500V 结果 离子传输管温度 1.典型LC/MS/MS 色谱图 350℃ NL： 1.48E3 Base Peak m/z= 91.50-92.50 F： +c ESI SRM ms2 17302081999-92001108099-106101 155.910-155.912] MS ICIS SF-080804-002 NL： 3.70E4 Base Peak m/z= 155.50-156.50 F：+cESISRM ms2 215.000 [92.120-92.122，108.025-108.027， 155.985-155.987] MS ICIS SF-080804-002 NL： 1.32E5 Base Peak m/z= 155.50-156.50F：+c ESI SRM ms2 249.960 [92.098-92.100， 155.926-155.928， 183.849-183.851] MS ICIS SF-080804-002 NL： 1.10E5 Base Peak m/z= 155.50-156.50F：+cESISRM ms2 250.960 [92.121-92.123， 108.060-108.062， 155.930-155.932] MS ICIS SF-080804-002 14 RT： 0.00-15.01 RT：9.91 NL： 1.38E5 AA：887555 磺胺甲基异恶唑 Base Peak m/z=155.50-156.50F：+c ESISRM ms2 100- 253.950 [92.103-92.105，108.080-108.082， 155.934-155.936] MS ICIS SF-080804-002 50- 0- RT：6.94 NL：1.20E5 cAA： 1004809 Base Peak m/z= 155.50-156.50 F：+cESISRM ms23c 100 磺胺噻唑 255.940 [92.098-92.100，108.056-108.058， 155.937-155.939] MS ICIS SF-080804-002 RFT：9.91AAA： 17448209 NL：2.85E6 13C6-磺胺甲恶唑 Base Peak m/z= 161.40-162.40F：+cESISRM ms2 100 260.000 [98.074-98.076，114.048-114.050， 161.952-161.954] MS ICIS SF-080804-002 50 0 RT：7.74 NL： 1.21E5 Base Peak m/z=155.50-156.50F：+cESISRM ms2 100 磺胺甲基嘧啶 AA： 1027632 264.960[92.120-92.122，155.881-155.883， 171.901-171.903] MS ICIS SF-080804-002 50- 0 2 6 8 10 12 Time (min) RT：10.16 100- 磺胺二甲异恶唑 AA：1236883 50 0 RT：9.02 100- 磺胺甲噻二唑 AA：1066044 50 0 RT：8.99 100 磺胺二甲嘧啶 AA：857786 50) 0- 磺胺甲氧哒嗪(RT8.83 min) RT：9.43 100-- 磺胺对甲氧嘧啶(RT9.43 min) AA：2002316 = 磺胺-6-甲氧嘧啶(RT10.08 min) 50 0 0 2 4 6 8 10 12 Time (min) NL：2.22E5 NL：1.39E5 14 RT：0.00-15.01 RT：9.80 NL：1.94E5 图1.17种磺胺类化合物和内标的 2pg/kg 添加到基质样品中的LC/MC/MS 色谱图 Base Peak m/z=155.50-156.50F：+c ESISRM ms2 267.970[108.052-108.054，113.049-113.051， 155.927-155.929] MS ICISSF-080804-002 Base Peak m/z=155.50-156.50 F：+C ESISRMms2 267.970[108.052-108.054，113.049-113.051， 155.927-155.929] MS ICIS SF-080804-002 NL：8.73E4Base Peak m/z=155.50-156.50 F：+CESISRM ms2278.990[124.065-124.067，155.896-155.898，185.889-185.891]MS ICIS SF-080804-002 NL：2.73E4Base Peak m/z=155.50-156.50 F：+cESISRM ms2280.971[92.094-92.096，108.015-108.017，155.944-155.946]MS ICIS SF-080804-002 将猪肉、鸡肉和蛋， 搅碎、混匀， 精密称取5g， 置于50mL 离心管中，加入100μL，1μg/mL13C- 磺胺甲恶唑再加入20g 无水硫酸钠和20mL 乙腈（蛋液样品加25g 无水硫酸钠，且无水硫酸钠与乙腈均在临匀质前加入），匀质2分钟，3000r/min 离心10 分钟，取上层清液于另一离心管中，加入10mL 正己烷，涡流30s，弃去正己烷层，加入10mL乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯层液转入100mL 旋转发瓶中，样品再用10mL 乙酸乙酯萃取1 次，合并萃取液。在40℃下浓缩萃取液至0.5mL 左右，用4mL 超纯水溶解用于固相萃取。活化6mL 甲醇，6mL 水上样样品清洗2mL 水，抽干柱子5min洗脱6mL 甲醇溶液，6mL 乙酸乙酯，1~2mL/min