血液中扑尔敏检测方案(固相萃取仪)

Preekem 全自动固相萃取-气相色谱-质谱法检测血液中的常见安眠药 编号：BIOET1401 摘要：建立血液中21种安眠药(包括巴比妥类、唑仑类、苯二氮卓类)的全自动固相萃取方法。方法 血液样品采用3mLProELUT PLS 固相萃取柱富集，乙酸乙酯洗脱，洗脱液上 GC/MS 分析。结果 21种安眠药的回收率在 76.7-107.8%之间，精密度在2.20-7.70%之间。结论采用全自动固相萃取法测定21种安眠操作简便，回收率良好，方法精密度高，能够满足实际检验的需要。 关键词：血液；安眠药；自动固相萃取法； ProELUTPLS； GC-MS 1引言 血液中药物含量的准确检测，对相关案件的认定起着至关重要的作用。当前，药物分析普遍采用液液萃取法，该方法操作繁琐，费时费力且除杂效果差；本文选用 ProELUT PLS 固相萃取柱，建立了同时测定血液中21种安眠药(包括巴比妥类、唑仑类、苯二氮卓类)的全自动固相萃取法，并用 GC/MS 进行筛选检验和定性定量。该方法具有提取过程自动化、 -次处理项目多、回收率高、重现性好、除杂效果佳等特点，特别符合刑侦化验中安眠药检测的需求。 2试剂、仪器及器材 2.1试剂 甲醇、乙酸乙酯(以上均为色谱纯)、去离子水，巴比妥、烯丙异丙基巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、苯巴比妥、卡马西平、扑尔敏、阿米替林、丙米嗪、多虑平、异丙嗪、安定、泰尔登、氯丙嗪、利眠宁、马来酸咪达唑仑、三氟拉嗪、氯氮平、舒乐安定、阿普唑仑、三唑仑标准品(均购自公安部物证鉴定中心)。 2.2仪器及器材 安捷伦7890A/5975C气质联用仪； 屹尧 EXTRA 全自动固相萃取仪配 DIKMA ProELUT PLS 固相萃取小柱； ( 德国赛多利斯十万分之一电子分析天平。 ) 3实验方法 3.1前处理方法 精确取1ml血样，经3mLProELUT PLS 固相萃取柱净化，洗脱液直接供 GC/MS测定，其中固相萃取仪方法见表1. 表1固相萃取仪方法 动作 位置 溶剂 体积 抽溶剂速度 打溶剂速度 清洗探针 外针 甲醇 5.0mL / 120 mL/min 活化 / 甲醇 3.0mL 20 mL/min 1.5mL/min 活化 / 水 3.0 mL 20 mL/min 1.5mL/min / 空气 0.5 mL / 10 mL/min 上样 / 样品 1.1 mL 20 mL/min 1.5 mL/min / 空气 0.3 mL / 10 mL/min 清洗探针 外针 甲醇 5.0 mL / 120mL/min 淋洗 / 水 1.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min / 空气 10 mL / 60 mL/min 洗脱 乙酸乙酯 2.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 空气 10 mL 60 mL/min 3.2检测方法 3.2.1GC-MS条件 色谱柱： HP-5MS；进样口温度：280℃；进样模式：不分流；进样口压力：： 11.654Psi； 流速：1.0mL/min；柱温：：120℃保持2 min， 30℃/min 升温至280℃，保持 13 min。 电子轰击源：770eV；离子源温度：230℃；扫描方式：选择离子扫描，具体参数见表2。 表221种安眠药的保留时间、定量离子和定性离子 化合物 保留时间/min 定量离子 定性离子1 定性离子2 巴比妥 5.573 156 140 112 烯丙异丙基巴比妥 6.169 167 168 124 异戊巴比妥 6.527 156 141 195 速可眠 6.808 168 167 苯巴比妥 7.505 204 117 232 卡马西平 7.565 193 192 165 扑尔敏 7.612 203 205 167 阿米替林 8.366 58 202 215 丙米嗪 8.496 234 235 195 多虑平 8.520 58 165 178 异丙嗪 8.790 72 180 284 安定 9.702 256 283 284 泰尔登 10.065 58 21 氯丙嗪 10.090 318 58 272 利眠宁 10.205 282 283 220 马来酸咪达唑仑 10.754 310 312 325 三氟拉嗪 11.415 113 407 氯氮平 14.027 243 256 舒乐安定 14.562 259 294 205 阿普唑仑 15.149 279 204 308 三唑仑 16.904 313 238 342 4结果 4.121种安眠药的 GC-MS 谱图 取空白血液样品 1mL，添加21种安眠药的混标 5 ug， 经固相萃取仪净化后上机测定， 其 GC-MS 谱图见图1。从图1可知，经固相萃取净化后，噪音信号低，基线的丰度值仅100左右，提高了被测物质的检测灵敏度。 丰度.. 图1加标回收谱图 4.2线性范围分析 线性方程如表3. 线性方程 R2 巴比妥 y=41374x-25889 0.9971 烯丙异丙基巴比妥 y=43973x-25371 异戊巴比妥 y=50054x-29774 0.994 速可眠 y=32824x-22948 苯巴比妥 y=30891x-26921 卡马西平 y=5581.7x-3958.1 扑尔敏 y=48789x-29211 阿米替林 y=157641x-83124 0.9971 丙米嗪 y=23913x-11032 0.9974 多虑平 y=161950x-85948 0.9969 异丙嗪 y=9227.1x-5942.5 0.9902 安定 y=28873x-15261 0.9927 泰尔登 y=8505.5x-3929.5 0.9943 氯丙嗪 y=12205x-6188.2 利眠宁 y=23497x-8858.4 0.9915 三氟拉嗪 y=18464x-11569 0.9939 氯氮平 y=26993x-17475 0.9899 舒乐安定 y=7013.9x-5892.5 0.9812 阿普唑仑 y=9043.6x-5738.8 0.9879 三唑仑 y=8112.1x-7365.7 0.9807 由表3可知，21种安眠药在浓度为 2-20 ug/mL 的浓度范围内具有良好的线性，故采用外标法进行定量是可行的。 4.3回收率及精密度 平行测定6次添加实验，添加量5 ug， 利用峰面积外标定量；评价方法的平均回收率及精密度；测定结果见表4。从表4的结果可以看出，本方法对21种安眠药有良好的回收率且数据重现性佳，其中回收率大于76.7%，相对标准偏差小于7.70%；可以满足实际办案过程中样品提取的需要。 表421种安眠药回收率及精密度 目标物 加标量 5 ug 测定值(ug/mL) RSD(%) 平均回收率(%) 巴比妥 4.77 4.65 4.61 4.92 4.69 5.02 3.39% 95.53 烯丙异丙基巴比妥 5.26 5.27 5.29 5.56 5.46 5.52 2.51% 107.87 异戊巴比妥 5.29 5.16 5.23 5.44 5.42 5.42 2.20% 106.53 速可眠 5.23 5.15 5.06 5.23 5.39 5.35 2.34% 104.70 苯巴比妥 5.19 4.97 4.92 4.83 4.91 5.19 3.05% 100.03 卡马西平 5.06 5.03 5.21 5.33 5.06 5.16 2.24% 102.83 扑尔敏 4.58 4.67 4.68 5.00 5.25 4.94 5.25% 97.07 阿米替林 4.00 4.02 4.08 4.31 4.67 4.03 6.30% 83.70 丙米嗪 4.02 4.04 4.09 4.27 4.77 4.16 6.68% 84.50 多虑平 4.18 4.09 4.14 4.44 4.87 4.23 6.78% 86.50 异丙嗪 4.32 4.26 4.38 4.94 5.11 4.74 7.70% 92.50 安定 4.83 4.77 4.73 5.04 5.26 4.92 4.03% 98.50 泰尔登 3.78 3.63 3.7 3.87 4.26 3.77 5.82% 76.70 氯丙嗪 3.82 3.7 3.73 3.97 4.21 3.76 5.02% 77.30 利眠宁 5.31 5.28 5.19 5.34 5.65 5.42 2.96% 107.30 马来酸咪达唑仑 5.04 5.01 4.86 5.26 5.57 5.14 4.79% 102.93 三氟拉嗪 4.07 3.96 3.92 4.09 4.42 3.98 4.47% 81.47 氯氮平 4.04 3.95 3.78 3.68 4.47 3.82 7.12% 79.13 舒乐安定 5.46 5.39 4.93 4.94 5.51 4.65 6.87% 102.93 阿普唑仑 4.68 4.65 4.32 4.38 4.98 4.12 6.81% 90.43 三唑仑 5.38 5.22 4.98 4.85 5.28 4.84 4.56% 101.83 5结论 本文采用 ProELUT PLS 固相萃取柱提取血液中的安眠药，此柱表面同时具有亲水亲脂基团，对各类极性、非极性的化合物具有均衡的吸附作用，可有效去除血液中大量蛋白质及其他水溶性杂质的干扰，提高检测灵敏度。利用 EXTRA 全自动固相萃取仪进行净化，实现了实验过程的自动化，降低了人为操作的误差，使数据的重现性得得提高。GC/MS 作为一种通用性的检测器，可一次性检测21种不同性质的安眠药，提高了检测的效率。综上所述，本文所建方法完全可以满足实际案件中安眠药的筛选检验和定性定量，为此类药物分析提供了一个科学、简便、准确的检测方法。 ( 参考文献 ) ( [1]裴茂清，陈鸿义，何思 宁 .麻醉抢劫中混合安眠药物的 GC/MS 分析[J].刑事技术， 1999(4 ) ：9-10. ) ( [2]刘耀等.固相萃取技术在毒物分析中的应用[].刑事技术， 1997(5)：1-4. ) ( [3]王松才，刑若葵等.自动固相萃取法提取血和尿中的常见安眠药成分[].广州公安科技，2002(3)：17-20. ) ( [4] Hiroyuki Inoue， et al. Screening and determination of benzodiazepines in whole blood u sing solid-phaseextraction and gas chromatography/mass spectrometry[J]. For e nsic Science International， 2000(113)：367-373. ) ( [5]冯翠玲，周永新，吴鹤松等.血浆中有机磷农药的固相萃取-气相色谱法测定[].分析测试学报，2001(3)：78- 80. )