血液中烯丙异丙基巴比妥检测方案(固相萃取仪)

完整的无机和有机样品前处理产品线提供全面的医疗卫生检测解决方案Preekem屹尧科技 ID BIOET1401 医疗卫生行业检测解决方案 一 无机样品前处理系列 微波消解仪一适用于重金属及汞、砷等有害物质元素检测 TOPEX全能型微波化学工作平台 WX-8000专家型密闭微波消解仪 COOLPEXK灵动型微波化学反应仪 有机样品前处理系列 适用于农药残留、兽药残留、食品添加剂、药物及司法检测 EXTRA全自动固相萃取仪 N1全自动氮吹浓缩仪 NS-10圆盘氮吹浓缩仪 从无到有开启样品前处理智能化时代 血液中常见21种安眠药检测 一全自动固相萃取法 1引言 血液中药物含量的准确检测，对相关案件的认定起着至关重要的作用。当前，药物分析普遍采用液液萃取法，该方法操作繁琐，费时费力且除杂效果差；本文选用 ProELUT PLS 固相萃取柱，建立了同时测定血液中21种安眠药(包括巴比妥类、唑仑类、苯二氮卓类)的全自动固相萃取法，并用 GC/MS 进行筛选检验和定性定量。该方法具有提取过程自动化、一次处理项目多、回收率高、重现性好、除杂效果佳等特点，特别符合刑侦化验中安眠药检测的需求。 2试剂、仪器及器材 2.1试剂 甲醇、乙酸乙酯(以上均为色谱纯)、去离子水，巴比妥、烯丙异丙基巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、苯巴比妥、卡马西平、扑尔敏、阿米替林、丙米嗪、多虑平、异丙嗪、安定、泰尔登、氯丙嗪、利眠宁、马来酸咪达唑仑、三氟拉嗪、氯氮平、舒乐安定、阿普唑仑、三唑仑标准品(均购自公安部物证鉴定中心)。 2.2仪器及器材 安捷伦7890A/5975C 气质联用仪； 屹尧 EXTRA 全自动固相萃取仪(图1)；DIKMA ProELUT PLS 固相萃取小柱； 德国赛多利斯十万分之一电子分析天平。 3实验方法 3.1前处理方法 精确取1ml血样，经3mLProELUT PLS 固相萃取柱净化，洗脱液直接供 GC/MS 测定，其中固相萃取仪方法见表1。 图1 EXTRA 全自动固相萃取仪 动作 位置 溶剂 体积 抽溶剂速度 打溶剂速度 清洗探针 外针 甲醇 5.0mL 120 mL/min 活化 1 甲醇 3.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 活化 水 3.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 活化 空气 0.5 mL 10 mL/min 上样 1 样品 1.1mL 20 mL/min 1.5 mL/min 上样 空气 0.3mL 10 mL/min 清洗探针 外针 甲醇 5.0mL 120 mL/min 淋洗 1 水 1.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 淋洗 空气 10 mL 60 mL/min 洗脱 乙酸乙酯 2.0mL 20 mL/min 1.5 mL/min 洗脱 空气 10 mL 60 mL/min 3.2检测方法 3.2.1 GC-MS 条件 色谱柱： HP-5MS；进样口温度：280℃；进样模式：不分流；进样口压力：11.654 Psi；流速：1.0mL min；柱温：120℃保持2 min， 30℃ min 升温至280℃，保持13 min。 电子轰击源：70eV；离子源温度：230℃；扫描方式：选择离子扫描，具体参数见表2。 4结果 4.121种安眠药的 GC-MS谱图(图2) 取空白血液样品 1mL，添加21种安眠药的混标5ug，经固相萃取仪净化后上机测定， 其 GC-MS谱图见图1。从图1可知，经固相萃取净化后，噪音信号低，基线的丰度值仅100左右，提高了被测物质的检测灵敏度。 化合物 保留时间/min 定量离子 定性离子1 定性离子 巴比妥 5.573 156 140 112 烯丙异丙基巴比妥 6.169 167 168 124 异戊巴比妥 6.527 156 141 157 速可眠 6.808 168 167 195 苯巴比妥 7.505 204 117 232 卡马西平 7.565 193 192 165 扑尔敏 7.612 203 205 167 阿米替林 8.366 58 202 215 丙米嗪 8.496 234 235 195 多虑平 8.520 58 165 178 异丙嗪 8.790 72 180 284 安定 9.702 256 283 284 泰尔登 10.065 58 21 氯丙嗪 10.090 318 58 272 利眠宁 10.205 282 283 220 马来酸咪达唑仑 10.754 310 312 325 三氟拉嗪 11.415 113 407 141 氯氮平 14.027 243 256 192 舒乐安定 14.562 259 294 205 阿普唑仑 15.149 279 204 308 三唑仑 16.904 313 238 342 4.2线性范围分析 对浓度为2、5、：10、、.15、20u g/mL 的21种安眠药的混合系列标准样品进行定量分析，得出化合物的线性方程如表3。 表3 21种安眠药的线性方程/ 化合物 线性方程 R² 巴比妥 y=41374x-25889 0.9971 烯丙异丙基巴比妥 y=43973x-25371 0.9963 异戊巴比妥 y=50054x-29774 0.994 速可眠 y=32824x-22948 0.9938 苯巴比妥 y=30891x-26921 0.9856 卡马西平 y=5581.7x-3958.1 0.9868 扑尔敏 y=48789x-29211 0.9962 阿米替林 y=157641x-83124 0.9971 丙米嗪 y=23913x-11032 0.9974 多虑平 y=161950x-85948 0.9969 异丙嗪 y=9227.1x-5942.5 0.9902 安定 y=28873x-15261 0.9927 泰尔登 y=8505.5x-3929.5 0.9943 氯丙嗪 y=12205x-6188.2 0.9933 利眠宁 y=23497x-8858.4 0.9939 马来酸咪达唑仑 y=32098x-21971 0.9915 三氟拉嗪 y=18464x-11569 0.9939 氯氮平 y=26993x-17475 0.9899 舒乐安定 y=7013.9x-5892.5 0.9812 阿普唑仑 y=9043.6x-5738.8 0.9879 三唑仑 v=8112.1x-7365.7 0.9807 由表3可知，21种安眠药在浓度为2-20u g/mL的浓度范围内具有良好的线性，故采用外标法进行定量是可行的。 4.3回收率及精密度 平行测定6次添加实验，添加量5ug，利用峰面积 外标定量；评价方法的平均回收率及精密度；测定结果见表4。从表4的结果可以看出，本方法对21种安眠药有良好的回收率且数据重现性佳，其中回收率大于76.7%，相对标准偏差小于7.70%；6；可以满足实际办案过程中样品提取的需要。 5结论 本文采用 ProELUT PLS 固相萃取柱提取血液中的安眠药，此柱表面同时具有亲水亲脂基团，对各类极性、非极性的化合物具有均衡的吸附作用，可有效去除血液中大量蛋白质及其他水溶性杂质的干扰，提高检测灵敏度。利用EXTRA全自动固相萃取仪进行净化，实现了实验过程的自动化，降低了人为操作的误差，使数据的重现性得到提高。 GC/MS作为一种通用性的检测器，可一次性检测21种不同性质的安眠药，提高了检测的效率。 综上所述，本文所建方法，使得21种安眠药的回收率在76.7-107.8%之间，精密度在2.20-7.70%之间，具有操作简便、、回收率良好、方法精密度高等优点，完全可以满足实际案件中安眠药的筛选检验和定性定量，为此类药物分析提供了一个科学、简便、准确的检测方法。 表4 21种安眠药回收率及精密度 (加标量5ug) 目标物 测定值(ug/mL) RSD (%) 平均回收率(%) 巴巴比妥 4.77 4.65 4.61 4.92 4.69 5.02 3.39% 95.53% 烯丙异丙基巴比妥 5.26 5.27 5.29 5.56 5.46 5.52 2.51% 107.87% 异戊巴比妥 5.29 5.16 5.23 5.44 5.42 5.42 2.20% 106.53% 速可眠 5.23 5.15 5.06 5.23 5.39 5.35 2.34% 104.70% 苯巴比妥 5.19 4.97 4.92 4.83 4.91 5.19 3.05% 100.03% 卡马西平 5.06 5.03 5.21 5.33 5.06 5.16 2.24% 102.83% 扑尔敏 4.58 4.67 4.68 5.00 5.25 4.94 5.25% 97.07% 阿米替林 4.00 4.02 4.08 4.31 4.67 4.03 6.30% 83.70% 丙米嗪 4.02 4.04 4.09 4.27 4.77 4.16 6.68% 84.50% 多虑平 4.18 4.09 4.14 4.44 4.87 4.23 6.78% 86.50% 异丙嗪 4.32 4.26 4.38 4.94 5.11 4.74 7.70% 92.50% 安定 4.83 4.77 4.73 5.04 5.26 4.92 4.03% 98.50% 泰尔登 3.78 3.63 3.7 3.87 4.26 3.77 5.82% 76.70% 氯丙嗪 3.82 3.7 3.73 3.97 4.21 3.76 5.02% 77.30% 利眠宁 5.31 5.28 5.19 5.34 5.65 5.42 2.96% 107.30% 马来酸咪达唑仑 5.04 5.01 4.86 5.26 5.57 5.14 4.79% 102.93% 三氟拉嗪 4.07 3.96 3.92 4.09 4.42 3.98 4.47% 81.47% 氯氮平 4.04 3.95 3.78 3.68 4.47 3.82 7.12% 79.13% 舒乐安定 5.46 5.39 4.93 4.94 5.51 4.65 6.87% 102.93% 阿普唑仑 4.68 4.65 4.32 4.38 4.98 4.12 6.81% 90.43% 三唑仑 5.38 5.22 4.98 4.85 5.28 4.84 4.56% 101.83% ( [ 4] Hi r o y u ki I n o u e ， e t a l . Sc re e n i ng and de t er mi nation ofb enzodi a zepines in w hol e bl o od us i ng soli d-ph as e extractio n a n d g as chrom a t ography / mas s sp ect r om e try[J]. Fo r en s ic Sci e n c e I n t erna ti on al ， 2 0 0 0(113 ) ： 36 7- 37 3 . ) ( [ 5] 冯 翠玲 ， 周 永 新 ， 吴 鹤 松 等.血 浆中 有 机 磷 农 药 的固 相萃取 - 气相色 谱法 测 定[J ] .分 析测试 学报 ，2 0 0 1 (3)：7 8 -8 0. ) ww.preekem.com 1 引言血液中药物含量的准确检测，对相关案件的认定起着至关重要的作用。当前，药物分析普遍采用液液萃取法，该方法操作繁琐，费时费力且除杂效果差；本文选用ProELUT PLS固相萃取柱，建立了同时测定血液中21种安眠药（包括巴比妥类、唑仑类、苯二氮卓类）的全自动固相萃取法，并用GC/MS进行筛选检验和定性定量。该方法具有提取过程自动化、一次处理项目多、回收率高、重现性好、除杂效果佳等特点，特别符合刑侦化验中安眠药检测的需求。2 试剂、仪器及器材2.1 试剂甲醇、乙酸乙酯（以上均为色谱纯）、去离子水，巴比妥、烯丙异丙基巴比妥、异戊巴比妥、速可眠、苯巴比妥、卡马西平、扑尔敏、阿米替林、丙米嗪、多虑平、异丙嗪、安定、泰尔登、氯丙嗪、利眠宁、马来酸咪达唑仑、三氟拉嗪、氯氮平、舒乐安定、阿普唑仑、三唑仑标准品（均购自公安部物证鉴定中心）。2.2 仪器及器材安捷伦7890A/5975C气质联用仪；屹尧EXTRA全自动固相萃取仪配DIKMA ProELUT PLS固相萃取小柱；    德国赛多利斯十万分之一电子分析天平。