化妆品中氯普鲁卡因检测方案

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 化妆品中7种局麻药的分析方法AF10050 摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱(SPE-HPLC)，建立了化妆品中7种局麻药的检测方法。样品经1%三氯乙酸溶液提取， Cleanert PEP-2 固相萃取柱净化， Venusil XBP C18(L)色谱柱(4.6×250 mm， 5 um， 150 A) 分离， 20 mmoL/L 磷酸氢二钠和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明，7种局麻药添加量为 10 ug/g时，除苯佐卡因外其他回收率在70%~120%之间，能够满足检测要求。 关键词： SPE-HPLC；局麻药； Cleanert PCX 固相萃取柱；；Venusil XBP C18(L)色谱柱 前言 局部麻醉药 (localanaesthetics)，是一类能在用药局部可逆性的阻断感觉神经冲动发生与传递，简称“局麻药”。可卡因由于吸收后毒性大，使用受到限制。人工合成低毒性的普鲁卡因后，使用范围不断扩大。利多卡因则是酰胺类局麻药的典型。目前常用局麻药可分为酯类和酰胺类两大类，芳酸酯类如普鲁卡因，苯佐卡因，丁卡因；酰胺类如利多卡因； 普鲁卡因和利多卡因二者能够竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合，阻碍钠离子渗入及神经纤维的传导，临床上用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬外麻醉和局部封闭化，它们的用量必须适当控制，如果过量会引起皮疹、头昏、眼花、眩晕，重者还会引起震颤、恐慌、休克甚至死亡；苯佐卡因临床用做局部麻醉药，有良好的止痛、止痒作用，主要用于创面、溃疡面、粘膜表面和痔疮麻醉止痛和痒症，具有稳定性好、起效快维持时间长和副作用小等优点；丁卡因具有吸收快、作用强、毒性大等特点。目前化妆品中添加防腐剂、激素、抗生素等等，重金属超标事件时有发生，对人的身体健康造成了一定的危害，而化妆品已成为人日常生活必需品，化妆品安全日益受到关注，健全化妆品检测已迫在眉睫，故本实验建立了化妆品中7种局麻药的检测方法。 仪器、试剂与材料 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 高效液相色谱柱：VenusiL XBP C18(L) 规格 5 um， 150 A：；4.6×250mm SPE 小柱： Cleanert PCX 规格 60 mg/3 mL 1%三氯乙酸溶液 1%甲酸甲醇溶液 5%氨水甲醇溶液 尼龙针式过滤器：13 mm， 0.45 um 标准储备液：称取一定量利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、辛克卡因、苯佐卡因，分别用甲醇溶解定容，配制成 1.0 mg/mL的溶液 标准工作液：分别取250 uL 上述7种局麻药单标，用甲醇稀释定容至10 mL， 配 制成 25 ug/mL溶液 样品制备提取 霜类：称取0.5g霜样品(精确至0.01g)于离心管中，加入200 pL 25 ug/mL 局麻药标准工作液，涡旋混合1 min， 加入8 mL1%三氯乙酸和2mL乙腈，振荡提取 1 min，超声 10 min， 8000 r/min 离心5 min， 转移上层清液至另一离心管，待净化。 精油类：：称取0.5g霜样品(精确至0.01g)于离心管中，加入200 pL 25 ug/mL 局麻药标准工作液，涡旋混合1 min， 加入2 mL乙腈饱和正己烷溶液，振荡提取1 min，超声 10 min； 加入8mL1%三氯乙酸和2 mL 乙腈，振荡提取 1 min， 8000 r/min 离心5min， 转移上层清液至另一离心管，待净化。 净化 取 PCX (60 mg/3mL)小柱，依次用3mL甲醇、5mL1%三氯乙酸活化小柱，将上述待净化样品以1.0 mL/min 通过小柱，再依次用 3 mL 1%三氯乙酸、3 mL 1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，抽干，最后用10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液，40℃氮气浓缩至近干，用1mL甲醇：水(1：1，体积比)溶解残留物，过 0.45 um 尼龙针式过滤器，样品供 HPLC 检测。 注：霜类提取样品上样液、淋洗液在0.25 MPa 负压下通过小柱 液相检测条件 色谱柱：VenusiL XBP C18 (L) 规格 5 um ， 150A；：4.6×250 mm 流动相A： 20 mmoL/L 磷酸氢二纳(用磷酸调节 pH至7.0)； ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 流动相B：甲醇 A：40%流动相A， 60%流动相B； B：20%流动相A， 80%流动相B波长：220nm 进样量：20 uL 流速：1.0mL/min 柱温：30℃ 梯度： 时间 B% 0 0 6 0 7 100 15 100 16 0 30 0 结果与讨论 实验结果 表1.精油基质加加回收实验数据(添加水平10 ug/g) 物质名称 空白回收率% 平均加标回收率% RSD值% 普鲁卡因胺 0.00 102.09 0.16 苯佐卡因 0.00 72.77 0.33 普鲁卡因 0.00 98.18 0.19 氯普鲁卡因 0.00 95.96 1.60 利多卡因 0.00 105.55 10.23 丁卡因 0.00 115.66 14.77 辛可卡因 0.00 98.36 0.98 表2.霜基质加标回收实验数据(添加水平10 ug/g) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 博纳艾杰尔产品应用案例 物质名称 空白回收率% 平均加标回收率% RSD 值% 普鲁卡因胺 0.00 84.67 3.33 苯佐卡因 0.00 45.88 2.04 普鲁卡因 0.00 73.84 1.48 氯普鲁卡因 0.00 70.99 1.83 利多卡因 0.00 87.39 0.54 丁卡因 0.00 99.92 1.84 辛可卡因 0.00 95.79 2.23 液相色谱图 图1.局麻药混标溶液 5 ug/mL 液相色谱图 图2.精油基质空白液相色谱图 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 图3.10 ug/g 精油基质加标液相色谱图 图4.霜空白液相色谱图 图5.10 ug/g 霜基质加标液相色谱图 讨论 1) 对比了 Cleanert PCX 不同规格小柱150 mg/6 mL 与 60 mg/3 mL对目标物的吸附情况，发现使用 Cleanert PCX 60 mg/3 mL，可以满足实验要求； 2) 对比了洗脱溶剂不同强度5%氨水甲醇溶液与10%氨水甲醇溶液对实验的影响，发现在用10%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂时，苯佐卡因受影响较大；用5%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂，对目标物影响均较小，且满足实验要求； ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 3) 考察了7种局麻药在碱性和中性条件下的稳定性，局麻药混标溶液在5%氨水甲醇溶液放置1h后，40℃氮气吹干，检测发现除苯佐卡因外，其他物质回收率均在80%以上，局麻药混标溶液在5%氨水溶液中用甲酸调节 pH 至中性后，普鲁卡因胺和氯普鲁卡因回收率为0%，苯佐卡因回收率只有 40%；说明7种局麻药在5%氨水甲醇溶液碱性条件下较稳定。 4) 本文选择了精油和霜基质做7种局麻药加标实验，精油类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在90%以上；霜类样品除苯苯卡因外，其他回收率均在70%以上；RSD 值小于15%。 结论 本实验建立了7种局麻药的高效液相色谱检测方法，并结合固相萃取技术对化妆品中7种局麻药的含量进行了测定。对于加标量为 10 ug/g 的样品进行了检测，除苯佐卡因外其他回收率在70%~120%之间，固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好，说明本方法能够用于检测化妆中7种局麻药。 ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w.ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 订货信息 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Cleanert PCX 60 mg/3 mL 50 支/盒 CX0603 Venusil XBP C18(L) 5 um， 150A， 4.6× 250mm 1支 VX952505-L 直联式保护柱套 适用于4.6×10 mm 和2.1×10mm 1支 SH-100 Venusil XBP C18(L)直联式保护柱芯 5 um， 150 A； 4.6×10 mm 4支/包 VX950105-LS 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/pk 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫 45°Shore A： 1.0 mm 100/pk 0915-1819 针式过滤器 单膜， 13mm， 0.45 um 200个/包 AS021345 一次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 乙腈 4L/瓶，色谱纯 4×4L/箱 AH015-4 甲醇 4L/瓶，色谱纯 4×4L/箱 AH230-4 Qdaura@卓睿全自动固 相萃取仪 4通道24位 1台 SPE-40 15位氮吹仪 15位 1台 NV15-M ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) Agilent 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：