偶氮染料中禁用偶氮染料含量检测方案(超纯水器)

GB/T 17592-2011 禁用偶氮染料含量的检测 偶氮染料(azo dyes， 偶氮基两端连接芳基的一类有机化合物)是印染工艺中广泛应用的一类合成染料，用于多种天然和合成纤维的染色和印花，也用于油漆、塑料、橡胶等的着色。当纺织品、服装和皮革制品与人体直接接触后，某些偶氮染料与汗液等人体代谢物反应，生成可以致癌的芳香胺化合物并被人体吸收，对人体危害极大。偶氮染料被广泛应用，目前使用的偶氮染料达3000多种，其中大部分的偶氮染料都是安全的，只有可释放出指定的24种芳香胺类的小部分偶氮染料(大约200多种)被禁止使用。 1992 年德国颁布法令开始立法禁止使用某些偶氮染料用于长期与皮肤接触的消费品。1994-1996年德国多次颁布修正案，制定了明确的禁止可还原致癌芳香胺的偶氮染料及用其加工的商品及时间表。1999年，欧洲委员会为了保护公民的身体健康，也为了统一欧盟各国关于限制某些偶氮类染料使用的法规，提出了《关于禁止使用偶氮类染料指令》的立法建议。2002年，欧盟理事会通过了该指令的“共识文件”，并于当年9月111日，正式通过了2002/61/EC-“对欧盟委员会关于限制某些危险物质和制剂(偶氮染料)的销售和使用的76/769/EEC 指令”该指令主要禁止纺织品、服装和皮革制品生产使用禁用偶氮染料，禁止使用含有偶氮染料且直接接触人体的纺织品、服装和皮革制品在欧盟市场销售，禁止这类商品从第三国进口。 欧盟官方针对不同的材料分别指定了三种偶氮染料测试方法：a)皮革产品： CENISO/TS 17234： 2003皮革-化学测试-检验染色皮革是否含有某类偶氮染料； b)纺织品产品： EN 14362-1： 2003纺织品一检验偶释染料释出的芳族胺一第一部分：在毋须提取的情况下测试产品是否含有某类偶氮染料； c)聚酯纤维产品： EN 14362-2：2003纺织品一检验由偶氮染料释出的芳族胺一第二部分：提取纤维以测试试品是否含有某类偶氮染料。 中国在这方面同样做出了很多努力，2003版的国家纺织产品基本安全技术规范 GB18401要求禁用可分解致癌芳香染料含量。最新版的 GB 18401-2010要求其检出值不得高于20mg/kg。 RephiLe 根据中华人民共和国国家标准 GB17592-2011，特别推荐下面的禁用禺氮染料含量检测解决方案。该方案采用 HPLC 检测， 详细解决方案如下： 一、实验原理 样品在柠檬酸盐缓冲液中用连连亚硫酸钠还原生成芳香胺，提取分离后使用HPLC进行定量检测。 二、仪器和试剂 高效液相色谱仪，配有DAD Direct-Pure UP 超纯水仪 乙醚，甲醇，柠檬酸缓冲液 (RO纯水配制， 0.06 mol/L， pH=6.0)， 连二亚硫酸钠水溶液(RO纯水配制，200 mg/mL)，标准溶液，硅藻土 标准溶液配制方法：用甲醇将下述内标化合物配置成 10 pg/mL 的混合内标溶液。 萘-d8 (CAS No.：：1146-65-2) 2， 4， 5-三氯苯胺 (CAS No.： 636-30-6) 蒽-d10 (CAS No.：：个1719-06-8) 用混合内标溶液将附录A所列的芳香芳标准物质分别配成10 ug/mL的混合标准溶液。 三、试验方法 1、试样制备 将试样剪成 5X5mm 的小片，混匀。称取1.0g混合样，精确至0.01g， 置于反应器中：加入 17 mL 预热到70±2℃的柠檬酸缓冲液。将反应器密闭，用力震荡，置于70±2℃的水浴中30 min， 充分润湿所有试样。打开反应器，加入3.0mL 连二亚硫酸钠水溶液，立即密闭震荡，在置于70±2℃的水浴中 30 min， 取出后 2 min 内冷却到室温。 2、萃取和浓缩 用玻璃棒挤压反应器中试样，将反应液全部倒入硅藻土提取柱内，吸附 15min，用 4x20mL 乙醚分四次洗提反应器中的试样，每次需混合乙醚和试样，然后将乙醚洗液倒入硅藻土提取柱中，控制流速，收集乙醚提取液于圆底烧瓶中。将上述的盛有乙醚提取液夜圆底烧瓶置于真空旋转蒸发器上，于35℃左右的温度低真空下浓缩至近1mL， 再用缓氮气流驱除乙醚溶液，使其浓缩至近干。 3、检测 3.1HPLC分析条件 a)色谱柱：ODS C18 (250 mm x 4.6 mmx5pm) b) 流量：0.8mL/min -1.0 mL/min c) 柱温：40℃ d)进样量： 10 pL e)检测器： DAD f)检测波长：240nm； 280n m； 305 nm g)流动相A：甲醇 h)流动相B：磷酸缓冲液(0.575g NH4H2PO4+0.7g NaH2PO4 ， 溶于 1000 mL 超纯 水(Direct-Pure UP 生产)， pH=6.9) i)梯度：先用15%流动相A和85%流动相 B， 45 min 线性转为20%流动相A和80%流动相B， 保持 5 min 3.2准确移取 1.0mL 甲醇加入浓缩至近的的圆底烧瓶中，混匀，静置。然后分别取1pL混合标准工作溶液(10 pg/mL， 现配现用)与试样溶液注入色谱仪，按上述条件操作。 HPLC 色谱图见附录 C2 4、分析结果的计算 采用外标法计算 式中： Xi—―试样中分解出芳香胺i的含量，单位为 mg/kg Aii一一样液中芳香胺i的峰面积(或峰高) ci——标准工作溶液中芳香胺i的浓度，单位为 mg/L V—一样液最终体积，单位为 mL Ais—一标准工作溶液中芳香胺i的峰面积(或峰高) m一试样量，单位为 g 试验结果以各种芳香胺的检测结果分别表示，计算结果表示到个位数。低于测定低限(5mg/kg)时，试验结果为未检出。 附 录 A (规范性附录) 致癌芳香胺名称及其标准物的 GC/MS 定性选择特征离子 表 A.1 序号 化学名 CAS编号 特征离子 amu 1 4-氨基联苯(4-aminobiphenyl) 92-67-1 169 2 联苯胺(benzidine) 92-87-5 184 3 4-氯邻甲苯胺(4-chloro-o-toluidine) 95-69-2 141 4 2-萘胺(2-naphthylamine) 91-59-8 143 5 邻氨基偶氮甲苯(o-aminoazotoluene) 97-56-3 6 5-硝基-邻甲苯胺(5-nitro-o-toluidine) 99-55-8 7 对氯苯胺(p-chloroaniline) 106-47-8 127 8 2，4-二氨基苯甲醚(2，4-diaminoanisole) 615-05-4 138 9 4，4'-二氨基二苯甲烷(4，4'-diaminobiphenylmethane) 101-77-9 198 10 3，3'-二氯联苯胺(3，3'-dichlorobenzidine) 91-94-1 252 11 3，3'-二甲氧基联苯胺(3，3'-dimethoxybenzidine) 119-90-4 244 12 3，3'-二甲基联苯胺(3，3'-dimethylbenzidine) 119-93-7 212 13 3，3'-二甲基-4，4'-二氨基二苯甲烷 (3，3'-dimethyl-4，4'-diaminobiphenylmethane). 838-88-0 226 14 ·2-甲氧基-5-甲基苯胺(p-cresidine) 120-71-8 137 15 4，4'-亚甲基-二-(2-氯苯胺) [4，4'-methylene-bis-(2-chloroaniline)] 101-14-4 266 16 4，4'-二氨基二苯醚(4，4'-oxydianiline) 101-80-4 200 17 4，4'-二氨基二苯硫醚(4，4-thiodianiline) 139-65-1 216 18 邻甲苯胺(o-toluidine) 95-53-4 107 19 2，4-二氨基甲苯(2，4-toluylenediamine) 95-80-7 122 20 2，4，5-三甲基苯胺(2，4，5-trimethylaniline) 137-17-7 135 21 邻氨基苯甲醚(o-anisidine/2-methoxyaniline) 90-04-0 123 22 4-氨基偶氮苯(4-aminoazobenzene)" 60-09-3 23 2，4-二甲基苯胺(2，4-xylidine) 95-68-1 121 24 2，6-二甲基苯胺(2，6-xylidine) 87-62-7 121 注1：经本方法检测，邻氨基偶氮甲苯(CAS编号97-56-3)分解为邻甲苯胺，5-硝基-邻甲苯胺(CAS编号99-55-8) 分解为2，4-二氨基甲苯。 注2：苯胺(CAS编号62-53-3)特征离子为 93 amu，1，4-苯二胺(CAS编号106-50-3)特征离子为108amu. ·4氨基偶氮苯(4-aminoazobenzene)，经本方法检测分解为苯胺和/或1，4-苯二胺，如检测到苯胺和/或1，4-苯二胺，应重新按 GB/T 23344 进行测定。 1——2，4-二氨基苯甲醚； 2——2，4-二氨基甲苯； 3—--联苯胺； 4—4，4'-二氨基二苯醚； 5——邻氨基苯甲醚； 6——邻甲苯胺； 7——4，4'-二氨基二苯甲烷； 8——对氯苯胺； 9——3，3'-二甲氧基联苯胺； 10—--3，3'-二甲基联苯胺； 11——2-甲氧基-5-甲基苯胺； 12——4，4'-二氨基二苯硫醚； 13——2，6-二甲基苯胺； 14——-2，4-二甲基苯胺； 15——2-萘胺； 16——4-氯邻甲苯胺； 17——3，3'-二甲基-4，4'-二氨基二苯甲烷； 18——2，4，5-三甲基苯胺； 19——4-氨基联苯； 20——3，3-二氯联苯胺； 21——4，4'-亚甲基-二-(2-氯苯胺)。 图 C. 22致癌芳香胺标准物 HPLC色谱图 GB 17592 中对于纯水的要求为满足 GB 6682 要求的三级水。三级水适合样品前处理以及部分缓冲溶液的配制。但是对于 HPLC来说，水中的微小颗粒物可能损坏泵和注射器， 堵塞色谱柱导致回压增大。有机物可能影响色谱峰的分离度和积分，导致鬼峰，改变固定相的选则性，影响色谱基线。离子、微生物等杂质同样会缩短仪器耗材使用寿命以及影响检测结果的准确性。GB6682明确要求应该使用标准所示的一级水来进行实验。 RephiLe 的 Direct-Pure UP 超纯水仪以自来水为进水，同时生产超纯水和 RO纯水。超纯水水质达到或超过 GB6682-2008 及 ASTM、CLSI、ISO3696 的一级水的质量标准。Direct-Pure UP 的超纯化柱使用独有配方的LeFil 和 OrganiFil 的填料，选用抛光离子交换树脂及精制活性性，去除水中的离子及有机物，终端采用0.2 um 囊式过滤去除水中的颗粒物，可为多数分析仪器如 HPLC、ICP-MS 等提供进水以及配制标准溶液和空白溶液，满足分析仪器实验室整体用水需求。 试液上样前需要过滤除掉试液内的颗粒及微生物，防止色谱柱堵塞、损坏泵等情况发生。乐枫提供RephiQuikk品牌的 PTFE、Nylon 等多种针头式过滤器(RJF1345NH，RJN1345NH等)，适用于各种有机相及水相的样品过滤，保证用户安全使用仪器。 关于上海乐枫生物科技有限公司 上海乐枫专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品的研发、设计和制造，致力于，为生命科学和生物技术提供精锐品质、高附加值的创新产品。乐枫产品线包括实验室纯水系统、密理博纯水兼容耗材和实验室分离纯化产品。成立十年，乐枫创立出了自己的品牌RephiLe(瑞枫)，拥有30多项专利和多个软件著作权。产品销往全球近90个国家和地区。 更多 RephiLe产品信息，请登陆： www.rephile.cn RephiLe企业微信名：乐枫纯水 见附件