牛奶中磺胺甲噁唑检测方案(液质联用仪)

[应用纪要]THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. [应用纪要] ■ ■ Waters 使用ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-S同时测定牛奶中六种磺胺类化合物甄云鹏，李桂芳沃特世科技(上海)有限公司 ACQUITY UPLCI-Class/XevoTQ-S液关联用系统ACQUITY UPLC BEHCg，1.7 mm，2.1×50mm色谱柱 沃特世前处理负压装置 沃特世OasisMCX/MAX/WAX/WCX前处理小柱 关键词 牛奶，磺胺类化合物，液质联用，前处理 磺胺类化合物被广泛运用于畜牧业生产中，作为有效的抗生素，它在治疗细菌和原生动物感染领域占居重要地位。为了提高动物的抗病性，其也被广泛应用于动物饲养过程，从而造成了牛奶中抗生素的残留，并危害人类健康。近几年来，为进一步提高工作效率，检测者越来越注重多残留的同时检测。 在欧盟，2377/90/EEC中规定牛奶中总磺胺类药物的最大残留量为100pg/kg。现今测定牛奶中磺胺残留的方法有微生物检验法和理化检验法。 该方法可以同时检测Sulfamethoxazole(磺胺甲恶唑))， Sulfadimethoxine(磺胺二甲氧嘧啶) ，Sulfamonomethoxine(磺胺间甲氧嘧啶)Sulfaclozine(磺胺氯吡嗪). Sulfaquinoxaline (磺胺喹噁啉)和Suldimidine(磺胺嘧啶)等六种磺胺类化合物。通过比较， Oasis MCX对于六种磺胺类药物的回收率较高，该方法可以同时检测牛奶中这六种磺胺类化合物。 实验 LC条件 系统： ACQUITY UPLC @I-Class/ Xevo TQ-S液质联用系统 色谱柱： ACQUITY UPLC BEHC18， 1.7 um， 2.1×50 mm P/N 186002350 流动相A1： 乙腈 流动相B1： 水+0.1% FA 样品温度： 10℃ 柱温： 40℃ 图1.ACQUITY UPLCI-Class/Xevo TQ-S液质联用系统。 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) A1 B1 曲线 1 0.45 5 95 2 0.50 0.45 5 95 6 3 5.00 0.45 95 5 6 4 5.10 0.45 5 95 6 5 6.00 0.45 5 95 6 MS条件 离子源模式： ESI+ 化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能量(M) 1 Sulfamethoxazole 254.2 92.2 30 30 156.2 30 20 2 Sulfadimethoxine 279.2 124.2 30 30 186.2 30 22 3 Sulfamonomethoxine 281.3 92.2 30 35 156.2 30 30 4 Sulfaclozine 285.2 92.3 30 40 156.3 30 25 5 Sulfaquinoxaline 301.2 92.2 30 30 156.2 30 20 6 Sulfadimidine 311.2 108.2 30 40 156.2 30 10 样品制备： 牛奶样品前处理(使用前处理SPE柱)：取5 mL牛奶样品，加入100pL六种混合标准品溶液(500 ng/mL).，加标后牛奶样品经过沉淀蛋白离心后取上清液，分别上样到四种SPE小柱上 (Oasis MCX/MAX/WAX/WCX)o 1. 在20位负压装置上放置4支Oasis小柱，分别取3mL甲醇和3mL水活化、平衡固相萃取柱。 2. 上样：取上样溶液分别上样到四种小柱上。控制样品流速使液滴不成线，以保证样品与填料间有足够的相互作用。收集上样液，并进样分析。 3. 清洗：MCX和WAX填料以3mL2%FA水溶液清青；MAX和WCX填料以3mL5%氨水水溶液清洗。收集清洗液，并进样分析。 4. 洗脱1：分别以3mL甲醇进行第一步洗脱溶液。收集洗脱液1，并进样分析。 5. 洗脱2：对于MCX和WAX第二步洗脱，分别以3mL5%氨水甲醇为洗脱液；对于WCX和MAX，分别以3mL2%甲酸甲醇为洗脱液，收集这一步洗脱液，并进样分析。 图2.前处理负压装置和SPE柱。 结果与讨论 待测物质分别为：磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪、磺胺喹啉、磺胺嘧啶。通过比较，.0Oasis MCX对于六种磺胺类药物的回收率较高，故选择Oasis MCX进行方法优化。六种化合物的回收率分别是：磺胺甲恶唑83.3%、磺胺二甲氧嘧啶 86.5%、磺胺间甲氧嘧啶86.1%、磺胺氯吡嗪85.4%、磺胺喹噁啉87.1%、磺胺嘧啶90.7%。六种化合物定量、定性离子图谱如下： 12-Nov-2013 STD 20pp2 09：29：520131112_2 3112>108.2 (Sudimidine1.43e6 八 01311122 ).25 0.500.751.001.251.501.752.002.252.502.753.003.253.503.754.004.254.504.755.005.25 5.50 5.75MRM of 12 Channels ES+31 3012>92.2 (Sulfaquinoxa1l.i7n2ee6 0.25 0.500.751.001.25 1.50 1.75 2.002.252.502.753.003.253.503.754.004.254.504.755.005.25 5.505.750131112 22.27285.2>92.3 (Sulfaclozine]9.7984 1.25 500.75100 1.251.501.75 2.002.25 2.502.75 3.003.253.503.754.004.254.504.755.005.25 5.50 5.7501311122 MRM of 12 Chaannels ES+281.3>92.2 (Sulfamonomethox1i.n2e1)e6 1650.250.500.751.001.251.50 .75 2.002.252.502.75 3.003.253.503.754.004.254.50 4.755.005.25 5.50 5.75=01311122 27 9. MR2>124 .2 (S u lf a diianmenetlhso xEiSn+e1.9Be6 1.25 500.75100 125 1.50 1.752.002.252.502.753.003.253.503.75 4.004.254.504.755.005.25 5.505.750131112_2 MRM of 12 ChannelsES+254.2>92.2 (Sulfamethoxazole1.91e6 0.250.50 0.751.00 1.251.501.75 2.002.25 2.50 2.753.003.253.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.005.25 5.505.750131112_2 MRM of 12 Channels ES+5.11e0.250500.75 1.00 1.25150 1.75 502.753.003.253.50 3.754.004.254.504.755.00 5.255.505.75一Time 图3.六种化合物定量离子。 12-Nov-2013 STD 20ppb 09：29：5220131112 2 90] 3112>156.2 (Suidimidine)3.2405 025 0.50 0.75 1.001.251.501.752.002.2552.502.753.003.253.503.754.004.254.504.755.005.25 5.5D5.752013111112_2MRM of 12 Cha301.2>156.2 (Sulfaquin90]1.92e6 -10=025 0.500.751.001.251.501.752.002.252.502.753.0033.253.503.754.004.254.504.755.0D5.25 5.505.7520131112_2 MRM of 12 Channels ES+285.2>156.3 (Sulfaclozine)90 5.37e454 -10= )25 0.50 0.751.001.251.501.75 2.002.252.50 2.75 3.00 3.25 3.503.754.00 4.254.504.755.005.25 5.505.75二20131112_2 MRM of 12 Channels ES+901.86281.3>156.2(Sulfamonometh1o.x6i0ne)5 025 0.500.751.001.251.501.752.002.252.502.753.003.253.503.754.004.254.5045500 5255.505.752013111112_2279.2>186.2 (Sulfadir90287 10 0250.500.751.00 1.251.50 1.752.002.252.50 2.753.003.253.503.754.004.254.504.755.00525 5.505.750131112_2 25 4. 2 >M1R5M6 .o2f (1Su2l fCahmaentnheolxsa zEoSl+e903 1.20m6 025 0.500.751.001.251.501.752.002.25 2.502.753.003.253.503.754.00 4.254.504.755.00525 5.505.75MRM of 12 Chi2.03 5.11e64.504.755.00 5255.50 5.75Time 图4.六种化合物定性离子。 Waters 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-61562666 广州：020-2829 6555 成都：028-65545999 免费售后服务热线：800(400)8202676WWw.Waters.com 使用ACQUITY UPLCI-Class/Xevo TQ-S同时测定牛奶中种磺胺类化合物 Waters， The Science of What’s Possible， ACQUITY UPLC和UNIFI是沃特世公司的注册商标。AutoBlend Plus和Protein-Pak是沃特世公司的商标。其他所有商标均归各自的拥有者所有。香港：沃特世公司。印制于中国。H AG-PDF