化妆品中泼尼松检测方案(固相萃取仪)

Agela Technologies Guaranteed Product QualityInnovation to Benefit Customers (GB/T24800.2-2009)化妆品中11种糖皮质激素的同时测定SPE-LC-MS/MS 法 应用编号： AF10054 1.实验材料 1.1糖皮质激素类药物标准品 表1糖皮质激素类药物标准品信息 中文名 英文名 CAS号 相对分子质量 泼尼松龙 Prednisone 50-24-8 360.1937 氢化可的松 Hydrocortisone 50-23-7 362.2093 泼尼松 Prednisone 53-03-2 358.1780 可的松 Cortisone 53-06-5 360.1937 甲基泼尼松龙 Methylprednisolone 83-43-2 374.2093 倍他米松 Betamethasone 378-44-9 392.1999 地塞米松 Dexamethasone 50-02-2 392.1999 曲安奈德 Triamcinolone acetonide 76-25-5 434.2105 氢化可的松醋酸酯 Hydrocortisone 21-acetate 50-03-3 404.2200 泼尼松醋酸酯 Prednisone 21-acetate 125-10-0 400.1886 可的松醋酸酯 Cortisone 21-acetate 50-04-4 402.2042 1.2标准储备液及混合标准工作液的配置 分别精密称取适量的11种糖皮质激素标准品，用甲醇溶解定容，分别配制成1000 ug/mL 的贮备液。-20℃以下保存。 混合标准工作液：准确量取糖皮质激素类药物标准贮备液适量，用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准工作液，现配现用。 1.3标准储备液及混合标准工作液的配置 a) 10%亚铁氰化钾溶液：称量2.3g KFe(CN)·3H，O，用水溶解定容至20 mL； b) 20%乙酸锌溶液：称量4.78gCH，OZn2H，O，用水溶解定容至20mL； c)定容液：量取70mL水 和30mL乙腈，混匀后加入100 uL 甲酸混匀。 2.样品提取 霜膏类化妆品：品取0.2g试样(精确至0.01 g)于 50mL 离心管，混匀。加入3mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混合使样品分散，加入3mL乙腈，超声提取5 min， 8000 r/min离心5 min，吸取上层清液于另一50 mL 离心管中，下层氯化钠溶液用2mL 乙腈重复提取一次，合并二次乙腈提取液，往提取液加入40 mL去离子水，混匀，加入亚铁氰化钾溶液 0.2mL， 混匀，加入乙酸锌溶液 0.2 mL， 混匀，8000 r/min 离心10 min， 作为待净化液。 精油类样品：称取0.5g试样(精确至 0.01 g)于50mL离心管，混匀。加入4mL正己烷，涡旋混合使样品分散，加入4 mL 50%乙腈水溶液，涡旋提取2 min， 8000 r/min离心5min， 吸取下层提取液，上层正己烷用4 mL 50%乙腈水溶液重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腈提取液，往提取液加入36mL去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液0.1 mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.1mL，混匀，8000 r/min 离心10min，作为待净化液。 3.固相萃取柱净化 将 Cleanert"PEP-2固相萃取小柱置于 Qdaura"卓睿全自动固相萃取仪，上样液转移至上样管中，溶剂置于相应的溶剂瓶中，设定操作程序如下：用5mL甲醇、10mL水活化。将上样管中溶液全部上样，然后以10 mL 10%乙腈水溶液淋洗小柱，通气吹干小柱中的残留液(5 min)。最后以6mL甲醇洗脱小柱，通气吹干小柱中的残留液(5 min)，以上操作流速均设定为1mL/min。取出收集瓶，于40℃氮气吹干，用1mL定容液溶解定容，过 0.22 um Nylon滤器，待测。 4.检测条件 4.1液相色谱条件 色谱柱： Venusil ASB C18， 3um， 150A， 2.1×150 mm； 柱温：30℃； 进样量：10 uL。 流动相：A相：含0.1%甲酸的水溶液； B相：含0.1%甲酸的乙腈溶液； 梯度洗脱程序见表4 表2流动相梯度洗脱条件和流速 时间(min) 流速(uL/min) A相(%) B相(%) 0 200 68 32 3.00 200 68 32 10.00 200 25 75 15.00 200 15 85 15.01 200 68 32 25.00 200 68 32 4.2液相色谱条件 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描； 检测方式：多反应监测； IS：-4500V； GS1：55Psi； GS2：55Psi； TEM： 550℃： 表3糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数 物质名称 保留时间(min) 监测离子对 DP EP CE CXP 泼尼松龙 6.22 405.1/329.1 -40 -10 -20 -9 405.1/359.2 -40 -10 -20 -9 氢化可的松 6.35 407.2/331.1 -30 -10 -22 -9 407.2/361.1 -30 -10 -22 -9 泼尼松 6.29 403.1/326.9 -50 -10 -18 -9 403.1/357.2 -50 -10 -18 -9 可的松 6.66 405.1/329.1 -40 -10 -20 -9 405.1/359.2 -40 -10 -20 -9 甲基泼尼松龙 9.02 419.2/343.0 -40 -10 -22 -9 419.2/373.0 -40 -10 -22 -9 倍他米松 9.55 437.2/361.3 -60 -10 -22 -1 437.2/391.1 -65 -10 -22 -1 地塞米松 10.04 437.2/361.3 -60 -10 -22 -1 437.2/391.1 -65 -10 -22 -1 曲安奈德 12.22 479.1/413.4 -60 -10 -24 -11 479.1/337.1 -40 -10 -24 -11 氢化可的松醋酸酯 12.9 449.2/403.0 -50 -10 -16 -11 449.2/373.0 -50 -10 -16 -11 泼尼松醋酸酯 13.42 447.2/401.1 -45 -10 -18 -9 447.2/371.2 -50 -10 -18 -9 可的松醋酸酯 12.30 445.2/339.1 -40 -10 -16 -9 445.2/369.3 -45 -10 -16 -9 注：带“ ”的监测离子为定量离子。 图111种糖皮质激素液相色谱-串联质谱图 5.结果与讨论 以市售玫瑰精油和护手霜为基质，进行添加回收实验，进行0.1 ug/g 和 0.05 ug/g 添加浓度的实验，11种糖皮质激素的回收率和重现性如下： 表4玫瑰精油0.1 pg/g 添加回收实验结果 药物名称 平行1 平行2 平行3 平均回收率 RSD 泼尼松 85.19% 85.65% 76.98% 82.61% 5.90% 泼尼松龙 91.68% 90.70% 81.07% 87.82% 6.68% 可的松 93.67% 92.11% 82.38% 89.39% 6.84% 氢化可的松 84.56% 89.38% 86.89% 86.94% 2.77% 甲基泼尼松龙 94.08% 82.90% 84.75% 87.24% 6.87% 倍他米松 89.74% 90.28% 80.51% 86.84% 6.33% 地塞米松 103.10% 93.90% 89.10% 95.37% 7.46% 可的松醋酸酯 87.19% 87.40% 92.02% 88.87% 3.07% 泼尼松醋酸酯 119.07% 119.86% 111.63% 116.85% 3.89% 氢化可的松醋酸酯 91.12% 91.69% 87.43% 90.08% 2.57% 曲安奈德 98.72% 84.57% 87.15% 90.14% 8.36% 表5玫瑰精油0.05 pg/g 添加回收实验结果 药物名称 平行1 平行2 平行3 平均回收率 RSD 泼尼松 78.32% 75.44% 86.69% 80.15% 7.29% 泼尼松龙 85.75% 85.75% 86.16% 85.88% 0.28% 可的松 86.99% 77.29% 88.46% 84.25% 7.20% 氢化可的松 72.36% 69.15% 75.04% 72.18% 4.08% 甲基泼尼松龙 84.80% 88.74% 99.95% 91.16% 8.62% 倍他米松 76.19% 85.32% 95.32% 85.61% 11.18% 地塞米松 80.38% 79.99% 90.64% 83.67% 7.22% 醋酸酯可的松 86.52% 93.17% 107.36% 95.68% 11.13% 泼尼松醋酸酯 119.39% 107.72% 111.49% 112.87% 5.28% 氢化可的松醋酸酯 94.54% 110.02% 103.75% 102.77% 7.58% 曲安奈德 94.10% 73.98% 90.74% 86.27% 12.49% 6.订货信息 药物名称 平行1 平行2 平行3 平均回收率 RSD 泼尼松 98.47% 96.35% 87.64% 94.16% 6.09% 泼尼松龙 104.71% 106.49% 100.10% 103.76% 3.18% 可的松 99.64% 93.01% 97.16% 96.60% 3.47% 氢化可的松 91.60% 90.07% 95.88% 92.51% 3.26% 甲基泼尼松龙 107.41% 102.56% 101.39% 103.79% 3.07% 倍他米松 105.77% 100.40% 105.90% 104.02% 3.02% 地塞米松 99.96% 97.00% 100.11% 99.02% 1.77% 可的松醋酸酯 124.48% 119.24% 111.62% 118.44% 5.46% 泼尼松醋酸酯 104.31% 93.72% 90.30% 96.11% 7.60% 氢化可的松醋酸酯 103.96% 114.47% 114.17% 110.86% 5.40% 曲安奈德 94.97% 111.77% 93.30% 100.01% 10.22% 实验结论：使用 CleanertPEP-2、VenusilASB C18，API 4000 PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了一种化妆品中11种糖皮质激素同时检测的分析方法，在高低添加水平下，11种糖皮质激素的平均回收率为75%-120%；相对标准偏差均小于13%。实验结果表明本方法快速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。 产品名称 规格包装 订货号 Qdaura"卓睿全自动固相萃取仪 4通道24位 SPE-40 CleanertPEP-2固相萃取柱 150 mg/6mL， 30支/pk PE1506-2 VenusilASB C18 液相色谱柱 2.1×150mm， 3 um， 150 A VS931502-0 针式过滤器(Nylon) 0.22 um， 直径13mm， 200/pk AS021320 一次性无针头注射器 5mL， 100/pk ZSQ-5ML 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写32×11.6 mm， 100/pk 1109-0519 1.5 mL样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE 隔垫，45. Shore A 1.0 mm， 100/pk 0915-1819 www.agela.com.cn— 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!