饮料中柠檬黄检测方案(固相萃取仪)

Guaranteed Product Quality Agela Technologies 食品中八种人工着色剂的测定 HPLC法 人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，再将-种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。 《食品中合成着色剂的测定》 (GB/T 5009.35-2003)，采用聚酰胺吸附食品中的人工合成着色剂，并用乙醇胺溶液进行洗脱。聚酰胺对合成色素的吸附能力会受到温度的影响，实验时需对样品和淋洗液做加热处理，而且乙醇胺浓缩所需时间过长，此方法不适合大批量样品同时处理，且不易做自动化方法移植。 大多数人工合成着色剂均具有苯磺酸钠结构，本实验选用Cleanert"PWAX 混合型弱阴离子交换柱，用以吸附食品中的合成着色剂，选用氨化甲醇洗脱，浓缩时间短，适用于大批量样品的同时检测。 表1着色剂样品信息 样品组分 结构式 样品组分 结构式 柠檬黄 胭脂红 新红 日落黄 IOJNa 苋菜红 诱惑红 靛蓝 10 S-CNa 亮蓝 赤藓红 1.样品溶液的配置 a) 乙酸铵溶液 (0.02 mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000 mL； b)甲醇/甲酸(6+4)溶液：量取甲醇60 mL， 甲酸40mL，混匀； c)柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100mL溶解，混匀； d)提取液a：.：量取无水乙醇70mL，氨水溶液20 mL、水10mL，混匀； e)水(pH为6.0)：水加柠檬酸溶液调节pH为6.0； 2.样品提取 a)饮料类样品：称取10g样品放入100mL烧杯中，含二氧化碳的样品加热去除二氧化碳； b)配制酒类：称取 10g样品放入100 mL小烧杯中，加热去除乙醇； c)液体调味料：称取10g样品放入100 mL 小烧杯中，若试样pH值偏高，用柠檬酸水溶液调节 pH至6左右； d)固体调味料：称取2g样品放入100 mL 小烧杯中，加入10 mL 1%氨水溶液，涡旋提取 1 min， 4000 r/min 离心5 min， 重复提取至提取液无色，合并上清液，用柠檬酸水溶液调节pH至6左右作为待净化液； e)酱料类：称取2g样品，加入20mL 石油醚，涡旋混合1min， 5000 r/min 离心5 min， 弃去石油醚上清液，残渣吹干，加入10 mL 1%氨水溶液，涡旋提取1 min， 4000r/min 离心5 min， 重复提取至提取液无色，合并上清液，用柠檬酸水溶液调节 pH至6左右作为待净化液； f)果冻、水果罐头：称取已均质样品2g， 装入50 mL离心管中，加入5 mL提取液a涡旋 1 min， 4000r/min 离心5min， 重复提取至提取液无色，合并上清液置于80℃水浴中浓缩至2mL， 水洗转移至 10 mL比色管中，用水定容(若试样pH偏高，用柠檬酸水溶液调节 pH至6左右)； g)肉制品：称取已均质样品2g， 装入 50 mL 离心管中，加入20 mL 石油醚，涡旋混合1 min， 4000 r/min 离心5 min， 弃去石油醚上清液。残渣吹干，加入5mL提取液a涡旋 1 min， 4000 r/min 离心 5 min， 重复提取至提取液无色，合并上清液置于80℃水浴中浓缩至2mL，水洗转移至10 mL比色管中，用水定容(若试样 pH偏高，用柠檬酸水溶液调节pH至6左右)转移至卓睿全自动固相萃取仪上样管中，待净化。 3.固相萃取柱净化 SPE小柱： Cleanert PWAX(150mg/6 mL) CleanertPA (1g/6 mL) 取以上两种固相萃取柱及上述提取液至 Qdaura卓睿全自动固相萃取仪中，完成 SPE净化过程：6mL甲醇，6mL水(pH值6~7)； 加样10 mL； 6 mL 水(pH为4)、6 mL甲醇-甲酸(6：4)、6mL水(pH值6~7)淋洗； 通入空气吹干小柱 5 min， 6 mL 2%氨化甲醇洗脱并接收，收集液于50℃氮气吹干，用1mL水定容，过 0.45 um 水系滤器过滤，待测。 4.实验条件 色谱柱： VenusilXBPC18(L) 5um 4.6×150 mm； 流 速：1.0mL/min； 进样量：20uL；波 长：254nm； 梯 度： 表2流动相及时间梯度 时间 A%(0.02mol/L乙酸铵) B%(甲醇) 0 95 5 10 80 20 18 40 60 25 40 60 25.01 95 5 40 95 5 5.实验结果 5.1 CleanertPWAX SPE 柱添加回收实验 通过对不同基质样品的加标实验，对上述检测方法进行验证，结果见下表： 表3 5 pg/g红酒基质8种着色剂加标回收率 样品组分 标样过柱1(%) 标样过柱2(%) 红酒样品 1(%) 红酒样品 2(%) 柠檬黄 100.6 99 92.5 102 新红 100.6 97.8 102 100 苋菜红 101 98.5 104 105 靛蓝 89.8 88.8 86.9 87.5 胭脂红 100.3 98.8 92.5 90.2 日落黄 101 100 90 90.6 诱惑红 100 100 106 103 亮蓝 102 100 95 95 表41 pg/g火锅蘸料基质3种着色剂加标回收率 样品组分 标样过柱(%) 添加样1(%) 添加样2(%) 添加样 3(%) 胭脂红 99.93 100.8 112.01 100.89 日落黄 98.02 100.31 99.15 101.87 诱惑红 100 89.68 90.11 88.16 5.2赤藓红净化方法优化 赤藓红为苯甲酸钠结构，相对其他苯磺酸钠结构的着色剂，在 SPE 小柱上保留较弱，国标《GB5009.35-2003》中赤藓红的前处理方法是和其他色素不一样的，采用的是液液萃取的方法。如按照2.2的净化方法操作，在淋洗阶段赤藓红将全部被洗脱下来。通过方法优化，最终淋洗方法确定为6mL水(pH值6~7)、6mL甲醇，选用 CleanertPWAX (150mg/6 mL)， 其他条件不变，可满足同时处理9种着色剂的实验要求。 注意事项 1)若提取液呈碱性，在上样之前要将其pH值调节至6左右，保证小柱对合成着色剂有良好地吸附； 2)若样品酒精度过高，建议在上样前对样品进行除醇处理； 3) SPE小柱净化过程中，要注意对流速的控制，建议控制在1mL/min左右； 4)洗脱液氮吹复溶后，应选用水系滤膜过滤，防止因滤膜吸附造成样品的损失，建议选用Hydrophilic PTFE 滤头。 5.3结论 实验结果表明， Cleanert PWAX 或者 Cleanert PA 聚酰胺柱和 Venusil"XBP C18(L)液相色谱柱可以用于食品中的合成着色剂的检测，该方法快速、准确。Cleanert"PWAXSPE 小柱可同时处理9种着色剂， CleanertPA 聚酰胺柱可同时处理8种着色剂。 6.订货信息 产品名称 规格包装 订货号 Qdaura卓睿 全自动固相萃取仪 4通道24位 SPE-40 LC-10F 高效液相色谱仪 10 mL/min，梯度系统， 200-800nm双波长检测器 FL-LC010GS CC-100 分析型色谱柱温箱 温控范围：5-70℃；可安装1-2支300 mm 液相色谱柱 CC-100 Cleanert"PWAX 150 mg/6 mL， 30/pk WA1506 甲醇 4×4L/瓶 AH230-4 VenusilXBP C18(L) 4.6×150mm， 5 um， 150 A VX951505-L 液相色谱柱 保护芯 4.6×10mm， 4/pk VX950105-0 保护柱套 适用于4.6×10 mm保护主芯 CH-100 针式过滤器(PTFE) 亲水0.45 um， 直径13 mm， 200/pk AS081345 ·次性无针头注射器 2 mL，两件式，100/pk LZSQ-2ML 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写 32×11.6mm， 100/pk 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫，45.Shore A 1.0mm，100/pk 0915-1819 www.agela.com.cn—