肉制品中喹诺酮检测方案(试剂盒)

维德维康 维德维康Www.wdwHbIo.Com www.wdwHbio.com 动物源性食品中喹诺酮类药物残留快速检测解决方案 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360 服务热线：400-860-8088 网址：： www.wdwkbio.com 目录 背景 mL.2 一.兽用喹诺酮类药物残留的危害 mm.2 二、4种农业部禁止使用的氟喹诺酮类药物的相关知识......3 三、喹诺酮类药物残留预防及对策. ...5 四、快速检测解决方案 mm.6 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 网址： www.wdwkbio.com Www.wduHbio.com 背景 中华人民共和国农业部 Ministry of Agriculture of the People's Republic of China 中华人民共和国农业部公告 第2292号 为保障动物产品质量安全和公共卫生安全，我部组织开展了部分兽药的安全性评价工作。经评价，认为洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂可能对养殖业、人体健康造成危害或者存在潜在风险。根据《兽药管理条例》第六十九条规定，我部决定在食品动物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种兽药，撤销相关兽药产品批准文号。现将有关事项公告如下。 一、自本公告发布之日起，除用于非食品动物的产品外，停止受理洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂的兽药产品批准文号的申请。 二、自2015年12月31日起，停止生产用于食品动物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂，涉及的相关企业的兽药产品批准文号同时撤销。2015年12月31日前生产的产品，可以在2016年12月31日前流通使用。 三、自2016年12月31日起，停止经营、使用用于食品动物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂。 农业部 2015年9月1日 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 服务热线：400-860-8088 网址： www.wdwkbio.com 随着生活水平的不断提高，人们对畜产品的品质和安全也越来越关注，在要求营养丰富的同时，希望享用绿色、无公害、低残留的畜产品。但由于目前抗生素在兽医临床和饲料添加剂中的大量使用，药物残留矛盾越来越突出，如果长期食用有抗微生物药物残留的动物食品，部分敏感菌群会受到抑制或杀死，从而使人体内微生物群的动态平衡遭到破坏，损害人类的健康。喹诺酮类( quinolones ) 药物是一类化学合成的抗菌药物，自1962年萘啶酸( Nalidixic Acid )问世以来，此类药物发展十分迅速，开创了合成抗菌药物的新时代。氟喹诺酮类(FQNS)药物是自1984年诺氟沙星上市以来相继涌现出的一大类含氟的氟喹诺酮类衍生物的总称，近年来已成为化学合成抗感染药物疗效最突出的药物，因其抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性、毒副作用小等特点，广泛用于国内外医学和兽医学临床，如人类和动物的多种感染性疾病治疗等。喹诺酮类药物早在80年代初开始用于水产养殖，后来又用于家禽和养猪生产上。 目前批准上市的喹诺酮和氟喹诺酮类药物包括：环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)、诺氟沙星 (NOR)、氧氟沙星(OFL) 等几十种。但随着喹诺酮类药物长期、低水平的接触方式产生各种慢性蓄积毒性，特别是在动物组织中的浓度比血液中的浓度要高，加上不合理用药和滥用药，有的甚至放大治疗剂量，从而导致细菌产生耐药性等不可逆转的副作用，造成动物体内的残留，，对人们的健康造成重大危害。同时通过动物的各种排泄物(包括粪、尿等)向周围环境排放，使周围的环境受到严重污染。 人类长期食用含较低浓度 QNs 药物的动物性食品，容易诱导耐药性的传递，从而影响该类药物的临床疗效。因此，喹诺酮类药物残留问题越来越引起人们的关注。联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家联席委员会、欧盟都已制定了多种喹诺酮类药物在动物组织中的最高残留限量。美国 FDA于2005年宣布禁止用于治疗家禽细菌感染的抗菌药物恩诺沙星的销售和使用。 我国也于2002年规定了环丙沙星、单诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、二氟沙星、恶喹酸和氟甲喹等7种QNs药物在动物肌肉组织中的最高残留限量为10~500 u g/kg。2015年9月1日，中华人民共和国农业部发布第2292号公告，公告中明确在食品动物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种兽药。 ( 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) ) 电话：010-62668360传真：010-62987854 服务热线：400-860-8088 网址： www.wdwkbio.com 二、4种农业部禁止使用的氟喹诺酮类药物的相关知识 氟喹诺酮类(fluoroquinolones)药物是喹诺酮类的第三代产品，因在母核的6位上引入氟，从而增加了本类药物的抗菌活性，故名氟喹诺酮类药物。因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、体内分布广泛、毒副作用低和半衰期相对较长等优点，在临床上被广泛和长期使用。诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、单诺沙星、洛美沙星、沙拉沙星及培氟沙星，都属于第三代喹诺酮类药物，它是目前兽医临床应用最为广泛的一类。 喹诺酮类药物与许多药物之间无交叉耐药现象，但是喹诺酮类药物之间存在交叉耐药现象，必然在兽医临床上使用的剂量越来越大，而大剂量的应用又造成畜体药物残留。病病微生物对大多数喹诺酮类药物的耐药率达10%以上，有的甚至达到40%-70%，将会产生巨大的药物残留。。耐药性产生的后果导致预防和治疗疾病的失败，除对养殖业造成损失外，对人造成潜在的威胁。 又名氟哌酸。不溶于水，常用其盐酸盐、乳酸盐、烟酸盐。临床常用于猪丹毒、猪链球菌病、金黄色葡萄球菌病、禽多杀性巴氏杆菌、禽大肠杆菌、禽沙门氏杆菌、及奶牛乳房炎治疗效果良好。 不良反应： ①胃肠道反应较为常见，可表现为腹部不适或疼痛、腹泻、恶心或呕吐。 ②中枢神经系统反应可有头昏、头痛、嗜睡或失眠。 ③过敏反应皮疹、皮肤瘙痒，偶可发生渗出性多性红斑及血管神经性水肿。少数患者有光敏反应。 ④偶可发生：癫痫发作、精神异常、烦躁不安、意识障碍、幻觉、震颤、血尿、发热、皮疹等间质性肾炎表现、静脉炎、结晶尿，多见于高剂量应用时、关节疼痛。 ⑤少数患者可发生血清氨基转移酶升高、血尿素氮增高及周围血象白细胞降低，多属轻度，并呈一过性。 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 服务热线：400-860-8088 网址： www.wdwkbio.com 00 2、氧氟沙星 又名氟嗪酸。它具有抗菌谱广、抗菌作用强、毒副作用小的特点。研究表明，其药代动力学性质优于环丙沙星。目前，本品主要用于鸡大肠杆菌感染及霉形体感染。 不良反映可致肾功能障碍(BUN升高、血肌酐值升高)、肝酶升高、血细胞和血小板减少、胃肠功能障碍，也可见过敏反应和中枢症状(失眠、头晕等)。 3、洛美沙星 本品最先由日本开发成功，近年来我国也已有生产。本药在机体内消除缓慢，生物半衰期长，属长效新药。研究表明，洛美沙星对鸡葡萄球菌的最低抑菌浓度，与恩诺沙星同，低于红霉素。对鸡葡萄球菌的疗效与环丙沙星、恩诺沙星相似，但对鸡的增重效果优于两者。 不良反映： ①恶心、呕吐、上腹不适、腹泻、纳减等消化道反应。 ②头晕、头痛、情绪不安、失眠等神经系统反应，此类反应的发生率低于消化道反应。 ③皮疹、皮肤瘙痒、血管神经性水肿、光感皮炎等过敏反应，偶可发生过敏性休克。 ④少数患者可发生肌肉疼痛、无力、关节肿痛、心悸等。 ⑤实验室检查可发生一过性白细胞减少，血清转氨酶、血尿素氮和肌酐等的轻度增高，亦为可逆性。上述不良反应多轻微，大多患者可耐受。 又名甲氟哌酸。口服吸收迅速、完全，生物利用度可达90%，1~1.5h达血药浓度高峰，血药浓度高而持久。广泛分布于机体组织及体液，可通过炎症脑膜进入脑脊液。抗菌谱广，与诺氟沙星相似，临床广泛用于畜禽的敏感的革兰阴性菌、葡萄球菌所致严重感染，如败血症、心内膜炎、细菌性脑膜炎、呼吸道感染、胆囊炎。 不良反应： ①胃肠道反应较为常见，可表现为腹部不适或疼痛、腹泻、恶心或呕吐。 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 ②中枢神经系统反应可有头昏、头痛、嗜睡或失眠。 ③过敏反应：皮疹、皮肤瘙痒，偶可发生渗出性多形性红斑及血管神经性水肿。少数患者有光敏反应。 ④偶可发生：癫痫发作、精神异常、烦躁不安、意识混乱、幻觉、震颤、血尿、发热、皮疹等间质性肾炎表现、结晶尿，多见于高剂量应用时、关节疼痛。 1建立健全兽药残留检测体系。建立由部到省、市、县(市、区)的四级兽药残留监控体系，，1配备相应的检测设备，制订药物残留监控、监督计划，对畜产品生产基地、批发市场、农贸市场和超市等进行有效监控，有力地推进从基地到市场的质量安全全程监管工作，为确保提供畜产品的安全加固防线。 2完善检测手段， 制定喹诺酮类多残留检测方法。我国加入 WTO后，由于药物残留等问题屡遭美国、、欧盟等国家和地区对我国畜产品出口的层层封锁。为此我们要根据农业部相继出台的]《动物性食品中兽药最高残留限量》、《饲料药物添加剂使用规范》、《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》以及《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》等有关文件精神，结合当前的国际形势，制定喹诺酮类多残留检测方法，，层层落实，层层把关。 3严把检疫监督关，强化动物疫病控制。。我们要加强动物疫病的全程监管，确保畜产品卫生安全。同时搞好无规定动物疫病区项目建设。加强基础设施建设，增强对动物疫病的监测、诊断和控制能力，，同时采取综合防制措施，有计划、有重点、有目标地控制、扑灭和净化一些重点疫病，降低动物发病和死亡率，保护和促进畜牧业健康发展。 4加强对生产企业的统一管理。由于市场竞争越来越激励，有些生产者为了保证自身的利益，，通常采用一种喹诺酮制剂有多个商品名、多种推荐使用剂量或有效成分标识不明的情况屡见不鲜。。因此，要从源头上抓起，统一规范商品名，，同品种喹诺酮制剂要统一使用剂量。 5加大喹诺酮类药物残留危害的宣传力度，指导养殖户科学用药。利用各种媒体和技术培训进行广泛的宣传，使全社会充分认识到兽药残留对人类健康和生态环境的危害，根据不同的使用对象和需要科学选用合理的喹诺酮类药物。 ( 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) ) ( 电话：010-62668360传真：010-62987854 ) 北京维德维康生物技术有限公司(简称“维德维康”)是一家专注于食品中有害化合物(农兽药、微生物、重金属、非法添加物等)残留快速检测技术、动物疫病快速诊断技术的研究及相关产品开发的中关村高新技术企业、国家高新技术企业、国家火炬计划重点高新技术企业和北京市专利示范单位。 维德维康与来自中国兽医药品监察所、国家食品安全风险评估中心、国家兽药安全评价中心、中国农业大学、商务部流通产业促进中心、中国疾病预防控制中心、中国食品科学技术学会、中国农业科学院、国家食品质量监督检验中心等国内权威机构合作，形成了强大的食品安全专家团队。为生产、加工、流通领域的企业及政府监管部门提供先进的检测技术、检测产品及综合解决方案。 喹诺酮类药物在动物组织中的残留分析方法主要有酶联免疫吸附测定法(ELISA)、胶体金免疫层析法、高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱2质谱分析法(LC2MS)。相对于高效液相色谱法(HPLC) 和液相色谱2质谱分析法(LC2MS)，酶联免疫方法及胶体金免疫层析方法更快捷、方便、成本更低，适用于大批量快速定性筛查。 一.胶体金免疫层析法 北京维德维康生物技术有限公司 原理：喹诺酮类(Quinolones， QNS) 快速检测卡具有方便、快速、灵敏等特点，适用于现场大批量样品检测。检测卡含有被事先固定于硝酸纤维素膜测试区(T)的抗原和控制区(C)的Ⅱ抗以及固定于结合垫上的金标抗体。若样品为阴性，加样后在T区出现一条紫红色条带；若样品为阳性，贝T区不会出现紫红色条带。无论样品中有无喹诺酮类存在，C区都会出现一条紫红色条带。 检测样本 检测药物 检测限 鸡蛋 恩诺沙星、氟甲喹、洛美沙星、环丙沙星、诺氟沙星 100ppb 达氟沙星 120 ppb 氧氟沙星、噁喹酸、依诺沙星、培氟沙星、麻保沙星 150ppb 原奶、纯牛奶、奶粉 恩诺沙星、噁喹酸、环丙沙星、诺氟沙星、达氟沙星、氟甲喹、洛美沙星、依诺沙星、培氟沙星、麻保沙星 20 ppb 氧氟沙星 50ppb 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 服务热线：400-860-8088 网址： www.wdwkbio.com 1.将待检样本充分摇匀 2.充分混匀样本与稀释液 3.将样品管放入80℃温浴器中加热 1-2 min 4.用附带的滴管吸取稀释后的奶样，加入6-8滴于样品孔中 5.加样后5-8 min 后观察显色区，判定结果 C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性C线显色，T线不显色，判为阳性 C线不显色，无论T线是否显色，该试纸条均判为无效 ( 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) ) 电话：010-62668360传真：010-62987854 网址： www.wdwkbio.com 000 原理：样品中的喹诺酮类药物与酶标板上固定的抗原特异性竞争抗体，加入酶标记物，催化底物显色，根据显色的深浅来判断样品中喹诺酮类药物的含量。显色深，含量少；显色浅，含量多。 特点：喹诺酮类酶联免疫试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品筛查。 特异性：喹诺酮类酶联免疫试剂盒的特异性是通过与相应的物质进行交叉反应试验来确定的，结果如下： 环丙沙星…… .…100% 噁喹酸、依诺沙星、氟甲喹、洛美沙星、达氟沙星、诺氟沙星…… ·.........>100% 培氟沙星、奥比沙星、氧氟沙星、恩诺沙星………50%-100% 麻保沙星、司帕沙星……10%-50% 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 服务热线：400-860-8088 网址： www.wdwkbio.com oo Elisa 检测步骤——(鸡肉、鸭肉组织为例) 样本前处理 工作液准备 洗涤工作液 均质 取具有代表性的样品适量，使用均质器进行均质，待二次取样 称样、提取 使用精度为 0.01g的天平称取均质后样本+去离子水+浓缩样本稀释液，充分涡动 离心、分离 离心(4000g：10min)→(喹诺酮取50uL进行检测) 喹诺酮 Elisa 检测步骤 加标准品/样品 使用微量移液器添加标准品/样品 酶标记物工作液 添加喹诺酮酶标记物工作液 抗体工作液 添加喹诺酮抗体工作液 避光孵育 加盖板膜，室温下(25±2℃)避光反应 清洗 每孔260 pL洗涤工作液，充分洗涤4次 加底物 每孔添加A、B混合液 避光孵育 室温下(25±2℃)避光反应 加终止液 每孔添加5终止液，终止完成后请在5分钟之内读取数据 数据分析 在双波长450nm 和 630nm 下读取酶标板吸光度值，并使用配套分析软件分析数据 喹诺酮类药物最低检测限： 组织(鸡肉、鸭肉、猪肉、牛肉).、蜂蜜…·...............约2 ppb 组织(猪肝、鸡肝))......约4 ppb 水产(鱼肉、虾肉)….....约3ppb 纯牛奶、熟食(肉制品)、、牛血清、鸡蛋……约 10 ppb 猪尿…… .....约30 ppb 饲料(牛饲料).............….....…..约 100 ppb 水产(罗非鱼)...….....约1 ppb 水产(南美对虾)……约 1 ppb 鸡全血…… …..…..约 5 ppb ( 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) ) ( 电话：010-62668360传真：010-62987854 ) 00o 动物源性食品中喹诺酮类药物残留快速检测产品 产品类型 检测样本 检测限 规格 酶联免疫试剂盒 猪肉、牛肉、鸡肉、鸭肉 2ppb 96孔/盒 猪肝、鸡肝 4ppb 鸡全血 5ppb 熟食(肉制品)、牛血清、鸡蛋 10ppb 猪尿 30ppb 纯牛奶 10ppb 牛饲料 100ppb 胶体金检测卡 原奶、奶粉 20ppb/50ppb 40条/盒 猪尿、猪肉、鸡蛋 100ppb 胶体金试纸条 原奶、奶粉 20ppb 96条/盒 羊奶 20-100ppb 北京维德维康生物技术有限公司 地址：北京市海淀区地锦路9号院3号楼(100095) 电话：010-62668360传真：010-62987854 为食品安全提供领先的技术服务 X联免疫试制 eiu 测试剂 北京维德维康生物技术有限公司是一家专注于食品中有害化合物(农兽药、微生物、重金属、非法添加物等)残留快速检测技术、动物疫病快速诊断技术的研究及相关产品开发的中关村高新技术企业、国家高新技术企业、国家火炬计划重点高新技术企业和北京市专利示范单位。 乳及乳制品检测畜禽产品检测维德维康作为中国农业大学、国家兽药安全评价中心的产业化基地，结合自身雄厚的科研力量，形成了一系列具有自主 饲料检测知识产权的关键技术、重点产品和创新工艺，拥有食品安全检测抗原抗体资源近千种，供应检测试剂及设备千余种。与来自 水产品检测中国兽医药品监察所、国家食品安全风险评估中心、中国疾病检测仪器及实验耗材预防控制中心、中国农业科学院、国家食品质量监督检验中心等国内权威机构合作，形成了强大的食品安全专家团队。为生 检测箱及监测车产、加工、流通领域的企业及政府监管部门提供先进的检测技术、检测产品及综合解决方案。 北京市海淀区地地路9号院3号楼1-4层 食品安全监控解决方案 北京维德维康生物技术有限公司服务热线： 服务热线：址：www.wdwkbio.com 喹诺酮类药物在动物组织中的残留分析方法主要有酶联免疫吸附测定法( EL ISA)、胶体金免疫层析法、高效液相色谱法(HPLC) 和液相色谱2 质谱分析法(LC2MS)。相对于高效液相色谱法(HPLC) 和液相色谱2 质谱分析法(LC2MS)，酶联免疫方法及胶体金免疫层析方法更快捷、方便、成本更低，适用于大批量快速定性筛查。