白酒中邻苯二甲酸酯检测方案(气质联用仪)

H：ADEHP\BG_5PPBBackground subtracted file2012/12/5 9：46：55 三重四极杆气质联用法 (TSQ 8000 )测定白酒中16种邻苯二甲酸酯类残留物 李春丽李杰明红赛默飞世尔科技(中国)有限公司 1.前言 邻苯二甲酸酯类增塑剂是一类增加聚合物树脂的可塑性、增强制品柔软性的助剂，也是迄今为止产量和消费量最大的助剂种类，其中邻苯二甲酸酯类的使用最为广泛。邻苯二甲酸盐由于未聚合到塑料基质中，随着使用时间的推移，可由塑料中转移到环境中，造成污染。也可通过呼吸、饮食和皮肤接触直接进入人体，导致肝肾功能下降，具有致突变性、致癌性。全球已有很多国家通过立法限制使用邻苯二甲酸酯类增塑剂，包括欧盟REACH 法规和美国的《消费品安全改进法》等。 增塑剂在食品安全引起关注，首先是2011年5月起台湾食品中先后检出 DEHP、DINP、DNOP、DBP、DMP、DEP等6种邻苯二甲酸酯类塑化剂成分，药品中检出 DIDP。截至6月8日，台湾被检测出含塑化剂食品已达961项。6月1日卫生部紧急发布公告，将邻苯二甲酸酯(也叫酞酸酯)类物质，列入食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食食添加剂名单。 近段时间，白酒中检测出塑化剂的风波再次引起大家的关注，白酒添加塑化剂则有可能是为了让年份不够的酒液看起来好看，增加各种增粘剂可固化伪造粮食酒内的糖分，产生粘杯挂杯的效果。但同时也有可能是白酒产品中的塑化剂属于特定迁移，主要是生产或包装过程中与塑料制品接触，塑化剂被酒精溶出所造成的。 目前国内颁布了 GB/T 21911-2008《食品中邻苯二甲酸酯的测定》的检测方法。本实验在此标准基础上，进行优化，采用水浴加热去除乙醇后，正己烷提取，采用赛默飞世尔科技全新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪 (TSQ 8000 )分析检测白酒中16种邻苯二甲酸酯的方法。通过二级质谱扫描充分减少了在复杂基质样品中的背景干扰影响，提高了目标化合物的检测灵敏度。 2.1仪器和试剂 质谱仪： TSQ 8000质谱仪(赛默飞世尔科技，美国)； 气相色谱仪： Trace1310 GC 配 AII310 自动进样器(赛默飞世尔科技，美国)； 色谱柱： TR-Pesticidell 30 m* 0.25 mm* 0.25 pm 毛细管色谱柱(带5m预柱)； 试剂：正己烷，农残级； 白酒：自购于超市。 2.2仪器方法 气相方法： 柱温箱：60℃保持1 min， 以20°C/min 升至220°℃， 保持1 min， 再以5℃/min的速率升至280℃，保持3min； 进样口：不分流进样，不分流时间：1min，衬管：惰性不分流(货号：453A1925)，进样口温度为250℃；载气：恒流，1ml/min； 传输线：280℃ 质谱方法： 离子源温度为250℃， 采用 Acquisition-Timed 方法， SRM 扫描，具体检测离子对如表1所示： 14 DP 邻苯二甲酸二苯酯 225 77(20)， 197(10) 18.72 0.6 0.6 15 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 149 65(20)， 93(15) 21.13 0.6 77(20)，135(10) 8.29 0.6 0.6 16 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 149 65(20)，93(15) 23.85 0.6 65(20)，93(15) 9.17 0.6 0.6 9 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 149 65(20)，93(15) 65(20)， 93(15) 16.07 0.6 10 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 149 65(20)， 93(15) 11.90 16.21 0.6 11 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 149 65(20)，93(15) 17.68 0.6 12 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 167 121(20)，149(10) 18.40 0.6 白酒样品前处理方法： 用玻璃移液管准确移取5.0mL白酒样品于 10 mL具塞玻璃离心管中，在沸水浴中加热除去样品中的乙醇，冷却至室温后加入2.0mL正己烷，振荡提取5 min， 3000 转/min 离心 3 min后，取上清液上机分析。 注：整个处理过程必须在玻璃容器中进行，严禁使用塑料制品，防止处理样品过程中混入非样品中的邻苯二甲酸酯类物质。 3.1全自动二级质谱条件的优化(Auto-SRM) 在气相色谱-三重串联四极杆质谱联用检测过程中，为了保证定性和定量的准确，必须对待测物的离子对(母离子和子离子)、碰撞能量、扫描时间、驻留时间及监测反应离子的数目等一系列质谱参数进行优化，以期达到最佳的灵敏度。使用TSQ 8000气质联用仪，可采用特有的 Auto-SRM 模式，可全自动完成所有化合物的二级质谱参数优化，并自动给出碰撞能量优化结果，简单直观，如图1所示，大大节省了分析时间。 图1： DIBP 全自动碰撞能量优化曲线图 本实验在固定色谱条件下，通过优化后的仪器参数，样品色谱图与标准物质色谱图比较，保留时间相对偏差不超过标准物质±2.5%；采用多离子对定性，相对离子丰度最大允许偏差不超过±20%，确保了定性的准确度。 3.2色谱分离结果 由于溶剂中可能含有邻苯二甲酸酯类物质，所以每次做样前我们都做了溶剂对照，以便排除溶剂中的干扰效应，摒除假阳性结果。由于16种邻苯二甲酸酯的离子对信息有一些比较相似，所以我们选择了分离度比较好的弱极性色谱柱，从而保证了16种邻苯二甲酸酯在色谱上得以分离，使定性定量更加准确。16种邻苯二甲酸酯色谱分离情况如图2所示： 图2：5pg/L16种邻苯二甲酸酯扣去溶剂背景的色谱图 3.3标准曲线及最低定量限 以正己烷为溶剂，分别配制1 pg/L， 5 pg/L， 10 pg/L， 50 pg/L， 100 ug/L， 500 pg/L的混标溶液，建立标准曲线，各化合物的标准曲线如表2所示，相关系数R²均大于0.991， 表明这16种化合物的标准曲线线性良好。由于溶剂本底中部分邻苯二甲酸酯是存在干扰的。所以需要将标准溶液扣除本底后再计算 标准曲线，以使标准曲线更加准确。本次实验中16种邻苯二钾酸酯类化合物的最低定量限均为1 pg/L， 见图3。其中溶剂中的 DEP、DIBP、DBP 和 DEHP含量估计是1 pg/L标准品的20-30%，所以最低定量限设定为 1 pg/L。 ly peienqns puno6yoeg 8ddl98dH30八H (uiw)ow (uw) wi 97L aly peienqnspuno6yoeg 8ddl 98\dH30H 表2：16种邻苯二甲酸酯的方法线性关系 No. Name 中文名称 线性方程 B2 1 DMP 邻苯二甲酸二甲酯 Y=3.81132e+006+219317*X 0.995 2 DEP 邻苯二甲酸二乙酯 Y=610642+142510*X 0.994 3 DIBP 邻苯二甲酸二异丁酯 Y=1.52614e+007+172550*X 0.993 4 DBP 邻苯二甲酸二丁酯 Y=8.37475e+006+167031*X 0.994 5 DMEP 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 Y=-9744.8+8860.63*X 0.993 6 BMPP 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Y=-85098.8+22225.9*X 0.994 7 DEEP 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 Y=-43092+9841.64*X 0.995 8 DPP 邻苯二甲酸二戊酯 Y=-465261+111714*X 0.993 9 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 Y=-458572+100739*X 0.995 10 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 Y=-160028+36761.8*X 0.993 11 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 Y=-36482.9+8128.98*X 0.992 12 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 Y=-269331+66049.9*X 0.993 13 DEHP 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 Y=184509+59288*X 0.994 14 DP 邻苯二甲酸二苯酯 Y=-624753+138550*X 0.993 15 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 Y=-189360+41914.7*X 0.994 16 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 Y=-136875+29423*X 0.993 3.4方法精密度和回收率的测定 称取白酒样品，分别添添2个水平浓度的标准品，选取其中低浓度水平平行测定6次。结果表明，平均回收率为81.5-115%，相对标准偏差(RSD，n=6)为 1.74-4.95%。回收率和精 密度数据结果见表3。 表3：方法的精密度和回收率 1 DMP 邻苯二甲酸二甲酯 92.7 115 1.74 2 DEP 邻苯二甲酸二乙酯 81.5 112.5 4.07 3 DIBP 邻苯二甲酸二异丁酯 107 103 4.51 4 DBP 邻苯二甲酸二丁酯 114 118 4.45 5 DMEP 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 92.3 87.5 4.14 6 BMPP 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 87.7 101.5 4.95 7 DEEP 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 81.5 103.5 4.47 8 DPP 邻苯二甲酸二戊酯 84.3 100.3 4.56 9 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 95.8 84 3.69 10 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 106.5 101.3 1.92 11 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 84.5 100.2 3.68 12 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 84.5 107 3.19 13 DEHP 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 92 98.9 3.57 14 DP 邻苯二甲酸二苯酯 81.7 102.5 3.55 15 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 84.1 97.5 4.50 16 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 85.4 107.5 3.68 3.5实际样品检测 按照上述前处理方法，对市售的4种不同的白酒进行邻苯二钾酸酯类残留分析检测。测试结果统计见表4。其中超过线性范围的采用二次稀释后定量。 表4：实际样品检测结果统计 No. Name 中文名称 样品1(ug/L) 样品2(ug/L) 样品3(ug/L) 样羊4(ug/L) 1 DMP 邻苯二甲酸二甲酯 10.2 NF 35.6 NF 2 DEP 邻苯二甲酸二乙酯 NF NF 12.2 NF 3 DIBP 邻苯二甲酸二异丁酯 185.6 41.8 153.2 3361.6 4 DBP 邻苯二甲酸二丁酯 154.6 129.1 114.1 2885.6 5 DMEP 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 2.10 20.1 NF 53.44 6 BMPP 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 NF NF NF NF 7 DEEP 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 NF NF NF NF 8 DPP 邻苯二甲酸二戊酯 NF NF NF NF 9 DHXP 邻苯二甲酸二己酯 NF NF NF NF 10 BBP 邻苯二甲酸丁基苄基酯 NF NF NF NF 11 DBEP 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)己酯 NF NF NF NF 12 DCHP 邻苯二甲酸二环己酯 NF NF NF NF 13 DEHP 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 23.5 0.82 86.2 11606 14 DP 邻苯二甲酸二苯酯 NF NF NF NF 15 DNOP 邻苯二甲酸二正辛酯 NF NF NF NF 16 DNP 邻苯二甲酸二壬酯 NF NF NF NF 对检出的化合物可以通过二级质谱定性离子与定量离子的离子比例进一步确证化合物，下图显示了样品1中检出的 DIBP的离子比例符合标准值，因此可以确证样品1中确实检出的是DIBP。 图4：样品1中检出的 DIBP的二级质谱离子比例确证 根据 GB9685-2008《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》的规定，邻苯二甲酸酯类物质是可用于食品包装材料的增塑剂，不是食品原料，也不是食品添加剂，严禁在食品、食品添加剂中人为添加。食品、食品添加剂中的邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)和邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)最大残留量分别为1.5 mg/kg 和0.3 mg/kg。我们的样品测定结果表明，DIBP、DBP、DEHP在白酒中普遍存在，其中1个样品中DBP， DEHP 的含量超过规定，样品4中DBP含量达 2.885mg/L即样品含量为1.154 mg/kg，超标285%； DEHP的含量高达11.606 mg/L 即样品含量为 4.64 mg/kg， 超标209%。 4.结论 本方法采用 ThermoFisher 公司全新一代三重四极杆质谱 TSQ8000测定白酒中16种邻苯二甲酸酯类物质残留，此方法具有操作方便，选择性好，线性范围宽，高灵敏度等特点，高灵敏度能够减少取样量，极大降低样品对质谱仪器的污染，节约了分析和维护成本。同时 TSQ 8000 提供的离子对扫描可以有效排除假阳性的干扰，使检测结果更加准确。在100、20 pg/L 两个添加水平下，回收率为81.5-115%， 20 ug/L浓度水平下相对标准偏差(RSD，n=6)为 1.74-4.95%。该方法最低定量限为 1 pg/L， 完全可以满足白酒中邻苯二甲酸酯类物质的检测需要。 产口 战 赛默飞官方微信 赛默飞官方网站 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 上海(中国总部) 广州 沈阳 上海浦东新金桥路27号7号楼 广州东风中路410-412号 沈阳市沈河区惠工街10号 时代地产中心2405-2406，3001-3004 卓越大厦3109室 ( 武汉 武汉东湖高新技术开发区 高新大道858号A7楼 ) 北京 成都 香港 北京市安定门东大街28号 成都市武侯区临江西路1号 雍和大厦西楼7层 锦江国际大厦1406 新城市中央广场第一座九楼911-915室 香港新界沙田，沙田乡事会路138号 Thermo BR31024CN1407YX_TCPrecisio 本方法采用Thermo全新一代三重四极杆质谱TSQ 8000测定白酒中16种邻苯二甲酸酯类物质残留，此方法具有操作方便，选择性好，线性范围宽，高灵敏度等特点，高灵敏度能够减少取样量，极大降低样品对质谱仪器污染，节约了分析和维护成本。同时TSQ 8000提供的离子对扫描可以有效排除假阳性的干扰，使检测结果更加准确。在100、20 μg/L两个添加水平下，回收率为81.5-115%，20 μg/L浓度水平下相对标准偏差（RSD, n=6）为1.74-4.95%。该方法最低定量限为1 μg/L，完全可以满足白酒中邻苯二甲酸酯类物质的检测需要。