体液中氨溴索浓度及其药代动力学参数检测方案(液相色谱仪)

www.91sepu.com ·药剂· HPLC法测定体液中氨溴索农度及其药代动力学参数 江苏舜星科技有限公司 摘要 建立了HPLC测定人血浆及尿中盐酸氨溴索含量的方法：Hypersill C 柱(4.6mm×250mm，5um)，-甲醇-0.01mol/L 磷酸盐缓冲液-四四呋喃(35：35：27.5：2.5.V/V)为流动相，流速1.5ml/min，检测波长242mm。结果表明：最低检测浓度为 5ng/ml，血药浓度度10~320ng/ml范围内线性良好，尿药浓度在0.25~8.0pg/ml范围内线性良好，氨溴索生物半衰期为(4.21±0.93)h. 关键词 盐酸氨溴索；血药浓度；尿药浓度：高效液相色谱法 中图分类号：R969.1 文献标识码：A Determination of ambroxol hydrochloride in human plasma and urineand pharmacokinetic parameter by HPLC Zhang Lichao， Hu Jinhong， Li Zhen and Song Hongjie (Changhai Hospital， Second Military Medical University.Shanghai 200433) ABSTRACTǐ An HPLC method of determmnation of ambroxol hydrochloride in human plasma and urine wasestablished. The analytical column was Hypersil Ce (4. 6mm ×250mm， 5pm). The mobile phase was themixture of acetonitrile-methanol-0.01mol/L phosphate buffer-tetrahydrofuran (35 ： 35： 27.5：2.5，V/V)，The flow rate was 1. 5ml/min. The detector set at 242nm. The linear range of plasma concentration was 10~320ng/ml， that of urine concentration was 0. 25~8.0pg/ml. A single dose of ambroxol hydrochloride cap-sule was taken orally by eight healthy volunteers. The level of anbroxol in plasma and urine was determinedwirh this method. The results showed the biological half life of ambroxol was 4.21h. KEY WORDS ambroxol hydrochloride； plasma concentration； urine concentration；HPLC 盐酸氨溴索(ambroxol hydrochloride， Amb)是溴己新的活性代谢产物，为新一代粘痰溶解剂，能促进支气管纤毛排空运动，有利于气道分泌物的排出。它毒性低，祛痰和改善肺功能作用较强，本文参考有关文献，建立了血药浓度和尿药浓度测定方法，并测定了健康志愿者口服缓释胶囊兰勃素的血药和尿药浓度，为研究其体内过程及开发新剂型提供检测手段和参考依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器LC-10AD 型泵；SPD-10Avp二极管阵列检测器；Class LC-10色谱工作站(日本岛津)。 1.2 试药 Amb 对照品(南京海光应用化究所提供，含量为99.7%)；兰勃素胶囊(法国爱的发药厂，75mg/粒，批号970511)， 2 方法与结果 2.1 色谱条件 Hypersil C柱(中科院大连化物 所，4.6mm×250mm，5um)，流动相采用乙晴-甲醇-0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)-四氢呋喃(35：35：27.5：2.5)，流速1.5ml/min，检测波长242nm。氨溴索的保留时间为4.30min。 2.2 血(尿)样预处理 取血浆 0. 7ml 置10ml 离心管中，加入 0.0lmol/L 磷酸盐缓冲液(pH 10.0)0.7ml，涡旋混合lmin，加入5ml乙醚，涡旋 2min：3000r/min 离心 6min，取醚层4ml加入0. 0lmol/L盐酸100pl，涡旋1min，3000r/min 离心 6min，醚层弃去、进样20pl。取尿样0.1ml、加入磷酸盐缓冲液0.1ml，涡旋混合 1min，加 2ml乙醚，涡旋 2min，3000r/min 离心6min，取醚层lml，同法处理。外标法峰高定量， 2.3 血浆(尿)标准曲线 取健康人空白血浆(6份)，依次加入Amb标准液使成10，20，40，80，160和320ng/ml，按 2.1方法处理后进样，以所测峰高对浓 度进行线性回归。结果表明，Amb 在10~320ng/ml范围内线性良好，回归方程为H=5.04C+40.91，r=0.9990，检测限为0. 1ng(S/N=3)，血浆中最低检测浓度为5ng/ml， 取健康人空白尿，精密加入Amb标准溶液使成0.25.0.5，1.0，2.0，4.0和 8.0pg/ml，按上法处理后进样，得标准曲线为 H= 606.9C- 24.8，r-0.9999.线性范围0.25~8.0pg/ml。 2.4 回收率试验 空白血浆加入Amb 标准溶液，使成 20，100.300ng/ml，按2.2项下处理后进样，与相应的水标准峰高相比得到绝对回收率，血浆标准曲线上求得浓度与加入量相比得到相对回收率。同法进行尿样测定时的回收率计算，结果见表1和表2. 表1 血浆氨溴索回收率测定结果(n=5) C 绝对回收率 RSD 相对回收率 RSD (ng/ml) (%) (%) (%) (%) 20 81、42±4.0 10.95 104.60±11.50 10.95 100 81、65±19 4.09 98.63±4.03 4.09 300 82.17±3.0 4.73 100.40±4、75 4、73 表2 尿中氨溴索回收率测定结果(n=5) C 绝对回收率 RSD 相对回收率 RSD (pg/ml) (%) (%) (%) (%) 0.8 83.74±439 5、24 99.15±5、19 5.24 2.0 84.55±2.48 4.77 1.03±5.16 4.77 8.0 82.91±1.08 1.31 1.01±1、32 1.31 2.5 精密度试验 同上法配制低、中、高三种浓度的血浆和尿标准品各5份，按同法测定，计算方法的日内及日间精密度，结果见表3和表4. 表3 血浆氨溴索精密度测定结果(n=5) 如入量 测得量 日内RSD 测得量 日间RSD (ug/ml) (ug/ml) (%) (pg/mlj (%) 20 20.06±2.20 5.30 17.87±1.62 9.07 100 94.56±3.87 210 97.76±6.84 7.00 300 288.7±13.7 2.70 285.9±12.5 4.36 3.37 6.81 表4 尿中氨溴索精密度测定结果(n=5) 加入量 测得量 日内RSD 测得量 日间RSD (pg/ml) (ug/ml) (%) (pg/ml) (%) 0.8 0.81±0.02 2、23 0.8I±0.01 1、15 2.0 1.93±0.07 3.59 1.90±0.03 1、84 8.0 8.05±0.11 1.31 7.74±0.27 3.54 2.37 2.18 2.6 药动学研究 男性健康志愿者8名，年龄(22.13±0.60)岁，体重(61.94±3.65)kg，身高(174.31±5.10)cm，受试前血常规、尿常规、肝肾功能、X线和心电图检查均正常。试验前一月内未服任何药品，空腹口服兰勃素胶囊1粒(75mg)，给药后0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，6.0，9.0，12，15，24h分别取静脉血 1.5ml，肝素抗凝后分离血浆。尿样分段收集0~4.4~8.8~12，12~15.15~24h尿液，量取体积后留样。样品均置置20℃保存。 结果血药浓度见图1。 Cmax=148.36±17.91ng/ml，Tmax=(4.62±1.19)h，T12=(4.21±0.93)h，AUCo-a=1294±225(h·ng/ml).0~4h，4~8h，8~12h，12~15h，15~24h 尿排率分别为0.32%，0.98%，0.51%，0.19%，0.84%，其累积尿排率为2.85%2001 图1 健康志愿者口服75mg兰勃素的血药-时间曲线 3 讨论 文献报道 HPLC-EC 和GC-ECD法2·3测定体液中Amb，样品预处理涉及提取和甲醛衍生化，费时且检测灵敏度低。本法简便，与杂质峰分离良好，最低检测浓度为 5ng/ml，适于研究其体内过程及开发各种新剂型。Amb累积尿排率较低，说明其主要通过肝脏代谢。 ( 参考文献 ) ( [1) Botterblom MH， J a nssen TJ， G u elen PJ. R a pid andsensitive determination of ambroxol in human plasmaand urine by high-performance liquid chromatography. J Chromatogr， 1987，421(1)：211 ) ( [2) Flores-Murrieta FJ ， Hoyo-Vadillo C， Hong E， e t al. Assay of ambroxol in human p lasma b y highperfor- mance liquid chromatography with amperometris detec- tion . J Chromatogr Biomed App，1989，490(2)：464 ) ( Schmid J . A s say of am b roxol in biological fluids by capillary gas-liquid chromatography. J Chromatogrs 1987 ， 414(1)：65 (收稿：1999-12-09) )