河水中甲萘威检测方案(液相色谱仪)

2 39001woThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.SCIENTIFICPart of Thermo Fisher Scientific 溴氰菊酯；苯并(a)芘 Key words： online solid-phase extraction； HPLC； riverwater， Microcystin-LR， Carbaryl， Decamethrin， Benzo (a) pyrene 引言 微囊藻毒素为有害的蓝藻水华释放的一类具有强烈促癌作用的肝毒素。世界卫生组织(WHO)及许多发达国家制定的饮用水标准和规范中规定，MC-LR的含量标准不得超过1.0pg/L，我国2006年颁布的《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)中规定MC-LR控制限值为1.0pg/L。 甲萘威是一种氨基甲酸酯农药，由于杀虫谱广和毒性较低，在农业上应用颇广。研究表明其有一定的蓄积作用，对皮肤粘膜有损害。并可导致心脏毒性。虽然在《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)中对甲萘威没有限值规定； EPA《饮用水标准》2006版也没有规定饮用水中甲萘威的限值，但在其健康指南中建议儿童每天饮用一升水中甲萘威不得高于1ppm；成人每天每千克甲萘威不得高于0.01mg。 溴氰菊酯，又名敌杀死，高效杀虫剂，主要用于防治棉花等大田、果树、蔬菜以及其他一些特用作物上的主要害虫，对人体有中等毒性。国家《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)中规定其限值为0.02mg/L。 苯并(a)芘是一种很强的环境致癌物，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，是环境污染主要监测项目之一，国家《生活生用水卫生标准》(GB 5749-2006)规定饮用水中苯并(a)芘的限值是不高于0.00001mg/L。 目前测定水体中这四种化合物的方法除气相色谱法、气质联用、液质联用、酶联免疫吸附法等之外，高效液相色谱法也是一个常用的方法。但是对于水体的分析，由于含量比较低，一般都需要将样品进行离线的浓缩富集，操作比较繁琐。本文利用在线前处理小柱可以对目标化合物有效地纯化、富集，大大提高检测灵敏度。 仪器型号： Ultimate DGP 3600 系统，包括有带在线脱气单元的双三元梯度泵；配有2.5mL半制备进样组件的自动进样器；带一个二位六通阀的柱温箱； DAD检测器。连接图见图1； 分析柱： Acclaim PA ll， 3um， 3.0×150mm； 富集柱： Acclaim PA Il， 3pm， 3.0×33mm； 柱温：40℃； 检测波长：微囊藻毒素238nm；甲萘威 280mm；溴氰菊酯238nm；苯并(a)芘荧光检Ex290nm， Em410nm； 进样量：2.5mL； 图1.双梯度泵连接示意图 表1.梯度及阀切换条件 时间 (min) 富集泵(B%) 时间(min) 分析泵(B%) 时间 (min) 阀位置 0 5 0 20 0 1-2 6 5 8 20 5 6-1 6.1 100 24 100 28 1-2 25 100 28 100 — 28 5 28.1 35 5 35 — 淋洗液组成及流速：0.7mL/min SPE流路：A-水，B-乙腈； 分析流路： A-0.05%(v/v)HPO4(0.6mL of 85%HPO溶解于1L水中)，B-乙腈； 梯度淋洗：见表1 水样在高速离心机上以10 000rpm离心10min， 取上清液，待测。 标准品适量以甲醇溶解(适当超声以加速溶解)作为储备液，以水稀释至适当浓度进行测试。 混标中各组分浓度如下： 微囊藻毒素-LR： 40pg/L； 甲萘威： 100pg/L； 溴氰菊酯： 200pg/L； 苯并(a)芘： 10ug/L。 (1)选取254mm波长的检测谱图可同时展示四个组分，实际测定时不同组分选择不同波长用于定量。 图2.254nm波长下的检测谱图 (2)280nm波长下色谱图(甲萘威于此波长下测定)： 图3.280mm波长下色谱图 (3)238nm波长下谱图(微囊藻毒素-LR、溴氰菊酯以此波长测定) 图4.238nm波长下谱图 (4)荧光(激发波长290nm， 发射波长410nm，检测苯并(a)芘)图5.荧光下色谱图 用于做标准工作曲线的不同组分浓度度间分别为：微囊藻毒素-LR 0.16-40pg/L；甲萘威0.4-100pg/L；溴氰菊酯： 0.8-200pg/L；苯并(a)芘0.02-10pg/L。标准工作曲线如下，其中微囊藻毒素-LR和溴氰菊酯的测定波长238mm；甲萘威测定波长280nm；苯并(a)芘用荧光检测，Ex 290nm， Em 410nm。线性数据见表2。 以3倍噪音峰高为检出限，10倍噪音峰高为定量限。本方法检出限定量限为见表3。 实际样品分析及加标回收 对样品进行在线加标，用于加标的混合标样浓度分别为：微囊藻毒素-LR： 40pg/L；甲萘威： 100pg/L；溴氰菊酯： 200pg/L； 苯并(a)芘： 10pg/L。选取三个加标量(不同体积)进行回收率研究，以峰面积对浓度做工作曲线，实验结果见表4。 本方法利用戴安公司双三元液相色谱系统在线固相萃取技术，实现样品在线富集及基体去除，避免了繁琐的手工样品前处理过程，能够对甲萘威、氰菊酯、苯并(a)芘和微囊藻毒素-LR四种组分同时检测，大大节省了样品用量及时间，且线性范围宽，回收率好，灵敏度高。 本实验使用的进样组件为半制备进样组件，一次最大进样量可达2.5mL，结合SPE柱的富集功能，，可以实现对低浓度样品的测定。 使用戴安公司Acclaim PAII 短柱做SPE柱，此柱可兼容100%水相上样，耐受pH值范围宽， pH1.5-10。 表2.线性数据 Ret.Time min Peak Name Cal.Type Points Coeff.Det.% Offset Slope 14.24 微囊藻毒素-LR LOff 8 99.9975 -0.0019 0.0899 15.44 甲萘威 LOff 8 99.9997 -0.0142 0.0831 23.09 溴氰菊酯 LOff 7 99.9079 0.0078 0.0186 24.32 苯并(a)芘 LOff 5 99.9615 -18105.7752 157801.3125 表3.检出限及定量限 Peak Name 检出限(pg/L) 定量限(ug/L) 微囊藻毒素-LR 0.040 0.140 甲萘威 0.150 0.400 溴氰菊酯 1.0 3.0 苯并(a)芘 0.001 0.003 表4.加标回收数据 Peak Name 原样含量(pg/L) 加标量(pg/L) 测得量(pg/L) 回收率(%) 微囊藻毒素-LR -- 16.0 17.40 108.7 12.0 12.27 102.2 6.4 6.79 106.1 甲萘威 1.29 40.0 42.97 104.0 溴氰菊酯 30.0 30.59 97.81 16 17.59 101.7 -- 80.0 80.31 100.4 60.0 56.70 94.5 32.0 30.14 94.2 苯并(a)芘 0.0022 4.0 3.44 86.0 3.0 2.70 90.0 1.6 1.70 106.2 附 录 表5.水质非常规指标、限值、检出限 指标 限值* 国标检出限* 戴安双三元(2.5mL水样，自动前处理)UV检测 微囊藻毒素-LR 0.001 mg/L 5L水样， 0.06pg/L 0.040pg/L(2.5mL水样) (GB/T5750.8-2006，P31) 甲萘威 0.05 mg/L 100 mL水样， 0.01 mg/L 0.15ug/L(2.5mL水样) (GB/T5750.9-2006， P17) 溴氰菊酯 0.02 mg/L 250mL水样， 0.002 mg/L (GB/T5750.9-2006， P25) 1.0pg/L(2.5mL水样) 苯并(a)芘 0.00001mg/L 500mL水样，1.4ng/L 0.001 pg/L (2.5mL水样) (GB/T5750.8-2006， P18) *参考GB 3838一2002、GB5749-2006、GB/T5750-2006 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd i ts s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your ) local sales representative for details. 上海 北京 免费服务热线：上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 800 8105118邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118电话：021-68654588 邮编：100007传真：021-64457830 电话：010-84193588传专：010-88370548      微囊藻毒素为有害的蓝藻水华释放的一类具有强烈促癌作用的肝毒素。世界卫生组（WHO）及许多发达国家制定的饮用水标准和规范中规定，MC-LR的含量标准不得超过1.0 μg /L，我国2006年颁布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749- 2006）中规定MC- LR控制限值为1.0 μg /L。甲萘威是一种氨基甲酸酯农药，由于杀虫谱广和毒性较低，在农业上应用颇广。研究表明其有一定的蓄积作用，对皮肤粘膜有损害。并可导致心脏毒性。虽然在《生活饮用水卫生标准》（GB 5749- 2006）中对甲萘威没有限值规定；EPA《饮用水标准》2006版也没有规定饮用水中甲萘威的限值，但在其健康指南中建议儿童每天饮用一升水中甲萘威不得高于1 ppm；成人每天每千克甲萘威不得高于0.01 mg。     溴氰菊酯，又名敌杀死，高效杀虫剂，主要用于防治棉花等大田、果树、蔬菜以及其他一些特用作物上的主要害虫，对人体有中等毒性。国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749 -2006）中规定其限值为0.02 mg/L。苯并（a）芘是一种很强的环境致癌物，可诱发皮肤、肺和消化道癌症，是环境污染主要监测项目之一，国家《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）规定饮用水中苯并（a）芘的限值是不高于0.00001 mg/L。     目前测定水体中这四种化合物的方法除气相色谱法、气质联用、液质联用、酶联免疫吸附法等之外，高效液相色谱法也是一个常用的方法。但是对于水体的分析，由于含量比较低，一般都需要将样品进行离线的浓缩富集，操作比较繁琐。本文利用在线前处理小柱可以对目标化合物有效地纯化、富集，大大提高检测灵敏度。