辣椒酱中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ检测方案(氮吹仪)

上海安谱科学仪器有限公司Tel：021-54890099Fax： 021-54248311Shanghai ANPEL Scientific Instrument Co.， Ltd. 网站： www.anpel.com.cn 标 题：辣椒酱中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的高效液相色谱检测 方法概要：苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的高效液相色谱测定。 关键词：苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ、CNW中性氧化铝小柱(CA1808，1G/3ML)、Cnwsil C18 柱(LAEQ-1815004605) 参考方法：GB/T 19681-2005 SN/T 1590-2005 所需要溶剂： 农残级甲苯(CBEQ-4-108085-2500) 农残级丙酮(CBEQ-4-109328-4000) HPLC级甲醇(CAEQ-4-003302-4000) HPLC级乙腈 (CBEQ-4-003306-4000) 农残级无水硫酸 (CAEQ-4-103502-0500)以上试剂均为 CNW Technologies GmbH 另需要离心机和超声波清洗器 方法步骤： 1. 溶液的制备： 1)、标准溶液的制备： 分别精确称取苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(德国DR公司)标准品各10mg，用甲苯充分溶解后，丙酮定容。然后用甲醇稀释成 1ppm、0.5ppm、0.25ppm、0.125ppm， 准备进样。 2)、样品处理： ①各称取5g某品牌辣椒酱于4各样品瓶中，其中，3、4号瓶加入1m入的5ppm的标液，混匀，加入10ml的正己烷：丙丙=3：1的溶液(对于含水量很少的样品，可以直接用正己烷提取，其他步骤一样)，超声15min，离心分层，然后吸出正己烷层，，下层再加入5ml×2次正己烷匀浆，超声，离心分层。合并3次的正己烷层，加入适量无水硫酸钠脱水。过滤后于氮吹仪上吹干，用正己烷溶解残渣定容至5ml。 ②将上述5ml正己烷溶液，加入到 CNW中性氧化铝小柱(CA1808，1G/3ML)中，用5ml×3次的正己烷淋洗3次(去除油类)，再用5m²的含5%丙酮的正己烷溶液洗脱，收集，浓浓，用甲醇定容至5ml待测。 2.imHPLC测定方法：色谱柱： CNWSIL C18 150mm*4.6mm5um ( (LAEQ-1815004605) 流动相：乙腈：水=95： 流速： 1.0ml/min 柱温：35度 检测波长：500nm 3.结果分析 ：74 苏丹红Ⅰ标准曲线 苏丹红Ⅱ标准曲线 苏丹红III标准曲线 苏丹红Ⅳ标准曲线 在本实验条件下，苏丹红Ⅰ、Ⅱ、I、Ⅳ的回归方程分别为： Y=75235.8102X+0.000；Y=111926.2374X+165.1702；Y=99167.0284X+999.4638；Y=78488.9043X+436.2435.相关系数分别为：1.000；1.000；0.9999；0.9999.苏丹红Ⅰ、I、Ⅲ、Ⅳ的出峰时间分别为3.5；5.3；6.7；10.8左右，都有较大的色谱峰和较好的分离度。苏丹红Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ色谱峰理论塔板数分别为10129、12350、12710、12228，拖尾因子分别为1.4、1.1、 1.0、、1.1，分离度分别为10.5、10.5、6.7、112.9。经计算，苏丹红Ⅰ的回收率为：85.9%、苏丹红I的回收率为88.1%、苏丹红III的回收率为82.2%、苏丹红Ⅳ的回收率为 81.7%。 讨论： 采用 GB/T 19681-2005的方法，特别对于油脂的去除非常干净，加标以后对苏丹红的检测没有任任干扰。本实验采用 CNW Technologies GmbH 的一款专门针对苏丹红的中性氧化铝柱(CA1808， 1G/3ML)，效果非常理想。 本实验也同时用S公司，W公司和A公司的中性氧化铝来处理苏丹红样品，结果比较难控制，用5%的丙酮正己烷溶液洗脱不下来，如果加大洗脱溶剂的极性，则干扰物比较严重，影响检测限。