烤肉中5种杂环胺类物质检测方案(液相色谱仪)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 烤肉中5种杂环胺类物质的分析方法 AF10164 应用及技术服务部 要：本实验重现了 GB5009.243-2016烤肉中杂环胺类物质的测定，采用Cleanert PS 小柱结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)对烤肉中的5种杂环胺类物质进行了测定。样品经40 g/L 氢氧化钠：甲醇=70：30(V/V)溶液均质提取，Cleanert PS 小柱净化，以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱， LC-MS/MS 进行检测，外标法定量。结果表明，当加标量为 0.01 mg/kg时，回收率在80%~110%之间，能够满足检测要求。 关键词：杂环胺类物质； Cleanert@PS； LC-MS/MS； 烤肉 前言 70年代末，人们发现从烤肉或烤肉提取的化合物具有致突变性，对烤肉中主要致突变物的研究表明，这类物质主要是复杂的杂环胺类化合物(Heterocyclic amine)。长期实验表明，杂环胺在代谢活化系统中具有较强致突变性，并能引发啮齿动物以及灵长类动物肝脏、乳腺、结肠等多种靶器官产生肿瘤。与其他致癌物相比，杂环胺的毒性较强。 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 AB SCEIX API 4000*液相色谱串联质谱仪。 试剂材料 甲醇、乙腈、乙醇、正己烷、、二氯甲烷均为色谱纯；；氢氧化钠为分析纯；实验用水为超纯水； 5种杂环胺类物质混合标准工作溶液：MeIQ、MeIQx、4，8-DiMeIQx、7，8-DiMeIQx、PhIP：：乙腈溶解； 基质混合标准工作溶液 ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 取高浓度5种杂环胺类混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成0.01 ug/mL的基质混合标准工作溶液。 Cleanert@ PS固相萃取小柱：200 mg/3 mL。 样品制备 样品提取 称取烤肉试样2g置于 50 mL 离心管中，加入10 mL 40 g/L氢氧化钠：甲醇=70：30(V/V)混合溶液，均质1 min。均质器刀头分别用5 mL上溶溶液各洗涤两次，洗涤液合并至样品提取离心管中。提取液在10000 r/min 条件下离心 10 min， 待净化。 样品净化 将 Cleanert@ PS 小柱依次用 2 mL 甲醇、3 mL 4 g/L 氢氧化钠溶液活化平衡。量取10 mL提取液加入固相萃取主中，弃去流出液后，依次用3 mL 4 g/L氢氧化钠：甲醇=45：55(V/V)混合溶液、2 mL 正己烷淋洗，每次淋洗完后都需将柱体内淋洗溶液抽干，最后用3mL乙醇：二氯甲烷=10：90(V/V)混合溶液洗脱，洗脱流速小于1 mL/min。洗脱液于氮气浓缩至近干后，加入1mL的10%乙腈水溶液复溶，涡旋混匀，过 0.22 umNylon 针式过滤器，待检测。 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。 实验条件 色谱条件 色谱柱：Venusil MP C18， 3 um， 100 A， 3.0×50 mm； 流动相A：0.1%甲酸水溶液； 流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液； 柱温：40℃； 进样量：5uL。 梯度洗脱条件(见表1) 表1.液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 流速/(mL/min) A% B% 0.0 0.2 90 10 0.5 0.2 90 10 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e rvice@agela . com.cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 5 0.2 95 5 7 0.2 95 5 7.01 0.2 90 10 17 0.2 90 10 质谱条件 离子源： ESI+；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；气帘气压力：25 psi；辅助气压力：50psi；离子源温度：500℃；采集方式：多反应监测(MRM)。 表2.5种杂环胺类物质质谱参数 物质名称 Q1 Q3 DP/V CE/V MeQ 213.1 197.9 103 36.9 198.7 36.3 MeIQx 214.0 98 198.8 37.0 130.8 52.3 4，8-DiMeIQx 228.0 109 213.0 35.2 159.6 40.2 7， 8-DiMeIQx 228.0 97 213.1 36.2 130.9 52.2 PhIP 225.2 102 210.0 40.1 182.9 51.6 注：“下划线”为定量离子。 结果与讨论 由表3可知，采用SPE 结合LC-MS/MS 的方法检测烤肉中5种杂环胺类物质，加标回收率在 80%~110%之间，且变异系数小于16%，能够满足检测要求。由图1~图4可知，用VenusilMP C18色谱柱检测5种杂环胺类，峰形良好，且保留时间稳定。 表3.烤肉中5种杂环胺类物质加标回收实验结果(添加水平 0.01 mg/kg) 物质名称 保留时间/min 平均回收率/% CV% MeIQ 1.90 109.3 8.9 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w.agela.com.cn 客服：400-606-8099 ) MeIQx 4.63 89.9 14.6 4，8-DiMeIQx 6.27 101.6 8.3 7， 8-DiMeIQx 6.28 101.9 8.9 PhIP 6.71 81.9 15.9 图1.0.01 ug/mL 杂环胺类混合标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 图2.烤肉样品空白 LC-MS/MS 色谱图 ( Email： s s e e rvice@agela . com.cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 图3.0.01 pg/mL烤肉基质混合标准溶液 LC-MS/MS 色谱图 图4.0.01 mg/kg 烤肉基质加标 LC-MS/MS 色谱图 结论 本实验重现了 GB5009.243-2016 烤肉中杂环胺类物质的前处理方法，并结合LC-MS/MS 对样品进行了检测。结果表明，对于加标量为 0.01 mg/kg 的烤肉样品，加标回收率在 80%~110%之间，满足检测要求，且变异系数小于16%，稳定性良好。说明该方法适用于烤肉中5种杂环胺类物质的同时检测。 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 CleanertPS 200 mg/3 mL 30支/包 PS2003 12位固相萃取真空装置 12位 1台 VM12 卓睿全自动固相萃取仪 4通道，24位 1台 SPE-40 Venusil MP C18 3 pm， 100 A， 3.0×50 mm 1支 VA930503-0 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/pk 1109-0519 氮吹仪 15位 1台 NV15-G 1.5 mL 样品瓶盖 9 mm中心孔蓝盖，红色 橡胶/米色PTFE 隔垫45° Shore A； 1.0 mm 100/pk 0915-1819 尼龙针式过滤器 单膜， 13mm， 0.22 um 200个/包 AS021320 一次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编： 博纳艾杰尔官方网站推出：烤肉中5种杂环胺类物质的分析方法——详情请见官方网站：http://www.agela.com.cn/application/detail/562