食品样品中净化检测方案(固相萃取)

SAMPLE EXTRACTION PRODUCTS 「应用纪要1THE SCIENCE OF WHATIS POSSIBLE. 科学家简介 Michael S. Young博士首席应用化学家沃特世公司 Young博士是沃特世公司科学运营首席化学家兼应用经理。他和他的化学家团队致力于为食品安全和环境应用开发样品制备方法以及LC-MS和GC-MS分析方法。他最近开发研究的应用包括食品中兽药、真菌毒素、农药及相关污染物的分析方法。Young博士在马萨诸塞大学阿默斯特分校取得了化学理学学士和博士学位。在1994年加入沃特世之前， Young博士曾在多家私人环境测试与咨询机构担任GC-MS应用专家、项目经理和实验室经理。他曾发表多篇技术出版物，而且经常以演讲嘉宾身份出席各种技术会议和专题研讨会。 Jeremy Shia博士高级产品营销经理 沃特世公司 Jeremy Shia博士是负责Sep-Pak°和DisQuE"样品制备产品的产品经理，此外，他还是食品与环境市场耗材团队的负责人。在此之前，他是沃特世的高级应用化学家，负责开发食品中污染物的分析测定方法，重点开发样品制备方法。Shia博士发表了多篇关于食品分析的应用纪要，内容涵盖各种食品基质中糖类和维生素的分析，兽药、农药和真菌毒素的多残留分析等等。 Jeremy Shia博士在马萨诸塞大学洛厄尔分校取得了化学博士学位。在加入沃特世之前，他曾是千禧制药公司(Millennium Pharmaceuticals)分析开发部门的科学家。在进入制药行业以前， Jeremy Shia博士在环境实验室任化学家和有机实验室经理。 科学家简介 Dimple Shah高级科学家 沃特世公司 Dimple Shah拥有印度古吉拉特邦大学圣杰维亚学院的有机化学硕士学位，以及马萨诸塞大学洛厄尔分校的化学硕士学位。目前，她在沃特世公司米尔福德总部工作，担任食品与环境市场的高级科学家，负责开发食品和水污染物的LC和质谱分析测定方法。Dimple Shah擅长的专业领域是LC、串联四极杆质谱、高分辨率质谱以及各种色谱和质谱分析软件。她先后发表了多篇有关农药、兽药、真菌毒素、糖类、甜味剂、维生素和染料分析的应用纪要。 Kim Tran 次席应用化学家 沃特世公司 Tran女士于1999年加入沃特世公司，目前是科学运营次席应用化学家。她致力于为食品安全和环境应用开发样品制备方法以及LC-MS和GC-MS分析方法。Tran女士在栗树山学院取得了生物学理学学士学位。之后，她在一家生物技术公司的实验室工作了10年，主要设计实验方案、实施实验并解析实验结果，用以开发PGG-葡聚糖药物。此外，她还负责开发标准操作流程以及培训质量控制部门的人员。她为产品开发、评估表征、方法转换、验证以及产品质量控制测试提供技术支持，并在临床和临床前研究中使用LC-MS开展和验证生物分析，以测定生物样品中药物及其代谢物的浓度。 科学家简介 黄德凤 高级应用专员 沃特世公司AHQ团队 黄先生于2013年加入沃特世，专注于食品与环境应用，他将大多数时间都花在了技术支持和应用开发上。黄先生毕业于上海海洋大学食品科学与工程专业，拥有丰富的理论与实践经验，在食品与环境分析、样品制备、SPE知识与应用，尤其是LC-MS/MS应用方面积累了十余年的专业经验。业余时间里，他热爱阅读、游泳，同时还是一名曼联队的球迷。 为了检测不同种类的污染物，食品安全与检测实验室必须开发出灵敏且稳定的分析方法来应对各种复杂的食品基质。过去，科学家们使用传统固相萃取(SPE)吸附剂(例如硅胶C18)去除提取物中的质质、磷脂和色素等干扰物，以此降低基质效应。虽然传统SPE产品能够成功去除脂肪，但是要利用这些产品去除复杂样品基质中的多种主要干扰物却十分困难。 近来， Oasis PRiME HLB简单快速的通过式净化方案被用于快速有效地去除食品基质中的各种主要干扰物，包括脂肪、磷脂以及色素等。这使得Oasis PRiME HLB成为了在多残留分析中去除基质干扰物的一款强大工具。食品污染物(如兽药、农药、真菌毒素或其它化合物)可顺利通过Oasis PRiME HLB小柱而不被保留，与此同时吸附剂会滞留干扰物，从而减小基质效应。本手册汇集了相关应用纪要，展示如何利用Oasis PRiME HLB净化棘手的食品样品，进而提高结果准性性、延长系统正常运行时间以及改善方法稳定性。 目录 在UPLC-MS对肉中兽药多残留分析之前采用Oasis PRiME HLB小柱进行有效净化............8 基于新型SPE产品的简单净化方案 对牛奶中多兽药残留进行UPLC-MS/MS分析...... . . . . . ...11 快速、简单、有效的水产样品净化流程用于UPLC-MS/MS多兽药残留分析. .21 应用Oasis PRiME HLB净化小柱及UPLC-MS/MS测定婴儿配方奶粉中的多兽药残留... .. .. 27 应用简单有效的净化方案进行鸡蛋中兽药蛋留的UPLC-MS/MS测定...... ，，32 .应用Oasis PRiME HLB小柱快速有效地净化高脂肪基质的鱼梨样品后进行APGC-MS/MS分析......... . . . A M .......38 Oasis PRiME HLB-DisQuE QuEChERS-UPLC-MS/MS测定谷物中真菌毒素... ..43 快速、简单、有效地净化牛肝样品 用于多兽药残留UPLC-MS/MS分析.......... ...46 使用Oasis PRiME HLB小柱快速有效地去除QuEChERS菠菜提取物中的叶绿素. .. .51 在UPLC-MS对肉中兽药多残留分析之前采用Oasis PRiME HLB小柱进行有效净化 Michael S. Young和Kim Tran 目的 展示在UPLC-MS分析之前采用Oasis° PRiMEHLB小柱净化肉类提取物的效率。 背景 沃特世(Waters@)为肉中兽药多残留LC-MS/MS筛查开发了优化的样品前处理和分析方案。典型肉类样品的主要成分是水(高达70%)、蛋白质(15-25%)、脂肪(5-25%)和磷脂(1-3%)。在提取过程中，蛋白质可以通过沉淀和离心去除。然而，大量脂肪和磷脂会随着目标物化合物一起提取出来。这些共提取物质的存在可能会干扰LC-MS分析，污染UPLC系统的分析柱和其它组件，并且还会污染质谱仪。在过去，分析人员采用繁琐的正己烷脱脂步骤或使用反相吸附剂(如硅胶C18)从肉类提取物中去除脂肪。虽然这些技术可以有效去除脂肪，但均不能去除磷粦。 脂肪和磷脂对仪器和色谱柱而言是非常棘手的潜在污染物。 Oasis PRiME HLB小柱提供了一种在LC-MS分析前对肉类提取物进行快速净化以去除这些物质的方法。 解决方案 使用Oasis PRiME HLB小柱通过式净化可以从肉类提取物中高效地去除脂肪和磷脂。同样重要的是， Oasis PRiME HLB小柱净化不会影响兽药的回收率。该方法的回收率与使用正己烷脱脂法或硅胶C18净化法得到的回收率相当，但使用Oasis PRiME HLB小柱时的净化效率更高。 实验 ( 初步提取。从兽药中选择具有代表性的化合物，称取5g猪肉样 品(含15%脂肪)并匀浆，加入10 mL含0.2%甲酸的乙腈/水(80：20) 进行提取。将样品涡旋混合30秒、振摇30分钟，然后在12000rpm下离心5分钟。 ) ( Oasis PRiMEHLB小柱净化。将O a sis PRiME HLB小柱(3 cc， 60mg)安装在预先清洁过的真空导管上。无需执行小柱活化步 骤。取约0.5mL的上清液，使其通过Oasis PRiME HLB小柱并收 集滤液。进行UPLC-MS/MS分析之前，用10mM甲酸铵缓冲溶液(pH 4.5)将收集到的样品稀释3倍。 ) 所有被测化合物在通通式净化步骤中均无损失或损或极少。除保泰松(32%)外，其余被测化合物的绝对回收率(主要通过测量初始液相提取步骤的效率所得)的平均值超过了80%。上述回收率与使用硅胶C净化方法的结果相当，但硅胶C不能去除磷脂。UPLC-MS/MS条件和色谱图如图1所示。图2所示的色谱图展示了Oasis PRiME HLB小柱去除磷脂的效率；它比硅胶C.净争方法多去除了90%以上的磷脂。通过重量分析，我们还测得Oasis PRiME HLB小柱去除了猪肉提取物中90%以上的共提取脂肪。 化合物 母离子(m/z) 碎片离子(m/z) 锥孔电压(V) 碰撞能量(eV) 土霉素 磺胺甲基嘧啶 265.0 156.0 30 15 50 pg/kg 恩诺沙星 (部件号186005297) 30°℃ 360.2 316.1 50 25 3 4 5 6 7 min 地塞米松 393.2 355.3 30 15 保泰松 309.4 160.0 氯霉素 37 20 青霉素 335.1 160.0 20 30 氯霉素* 321.1 152.1 30 17 50 pg/kg 土霉素 461.2 426.2 30 21 3 4 5 6 7 min 检测条件： MS：TQ-S 100- 3.45 青霉素 进样体积： 5pL(3 cc和6cc小柱) 0 100- 25 pg/kg 运行时间(流速)： 7分钟(0.04 mL/min) 2 3 4 5 6 7 min 流动相A： 0.1%甲酸的水溶液 4.28 保泰松 流动相B： 0.1%甲酸的乙腈溶液 88 0 50 pg/kg 梯度： 初始15%B，2.5min升至40% 2 3 4 5 6 7 min B， 3.9 min升至95%B， 持续到 4.9 min， 在5.0 min回到15%B并 100- 3.44 地塞米松 0 50 pg/kg 针： 持续到7.0 min UPLC标准针，15 2 3 4 5 6 7 min 100- 1.09 恩诺沙星 弱清洗液： 乙腈：水(10：90) 50 pg/kg 0 强清洗液： 水：乙乙：异丙醇(50：30：20) 2 3 4 5 6 7 min 密封清洗液： 10%MeOH 100- 1.56 磺胺甲基嘧啶 0- 25 ug/kg 2 3 4 5 6 7 min *氯霉素采用ESI-模式，其它物质采用ESI+模式。 图1.UPLC-MS/MS条件以及分析猪肉样品中加入指定浓度兽药所得的色谱图。 结论 COasis PRiME HLB小柱在使用前不需要活化或平衡；其简单的一步式SPE净化非常有效。 COasis PRiME HLB小柱去除了猪肉样品的乙腈提取物中90%以上的脂肪和磷脂。 采用Oasis PRiME HLB小柱通过式的净化不会影响待测化合物的回收率，还能有效去除提取物中的脂肪和磷脂。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、The Science of W hat's Possible、 UPLC、ACQUITY UPLC和Oasis是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 @2015年沃特世公司中国印刷2015年5月 720005411ZH AW-PDF 图2. Oasis PRiME HLB净化(上图)与硅胶C净化(下图)对肉类提取物中磷脂的去除效果对比。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676WWw.waters.com 基于新型SPE产品的简单净化方案对牛奶中多兽药残留进行UPLC-MS/MS分析 黄德凤1， Kim Van Tran和Michael S. Young? 1沃特世科技(上海)有限公司(中国上海)；2沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 应用创新型固相萃取产品实现多种兽药的同时测定。 在UPLC-MS/MS分析之前进行简单、快速的通过式SPE净化。 通过一个简单通过式的SPE净化方案同时消除脂肪/非极性物质和磷脂产生的基质干扰，从而延长色谱柱寿命并降低质谱仪的维护频率。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLC°I-Class系统 XevoTQ-S质谱仪 ACQUITY UPLC BEH C 色谱柱 Oasis° PRiME HLB 3 cc 60 mg小柱 TruView"LCMS认样样品瓶 MassLynx4.1版数据系统，附带 Quanpedia"数据库 关键词 Oasis PRiME HLB， 多残留，兽药， SPE，牛奶， UPLC-MS/MS 由于没有稳定的通用样品制备方案，要将这些单一方法合并为多类别方法难度极大。此外，开发可同时分析多种类别兽药的单单LC-MS/MS仪器方法也有一定的挑战性。 实验 UPLC条件 系统： ACQUITY UPLC I-Class 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C， 1.7 pm， 2.1x100 mm 进样体积： 5pL 色谱柱温度： 45℃ 流动相A： 10mM醋酸铵水溶液(pH值 为5.0) 流动相B： 10 mM醋酸铵甲醇溶液 流速： 0.45 mL/min 梯度： 初始条件为2%B，保持至 0.25 min， 然后以线性梯 度增加流动相B，到12.25 min时增加至99%B，保持 至13.0 min， 在13.01 min时 降回2%B，保持并重新平 衡系统直至17 min。 UPLC的MS条件 仪器： Xevo TQ-S 模式： 电喷雾模式(ES+和ES-) 毛细管电压： 3.5 kV 离子源温度： 150℃ 锥孔气流速： 150 L/hr 600°℃ 脱溶剂气温度： 脱溶剂气流速： 1000 L/hr 碰撞气流速(氩气)： 0.15 mL/min 表1列出了本研究使用的UPLC-MS/MS锥孔电压(CV)和 此方法采用Waters°新亲出的创新型Oasis PRiME HLB固相萃取产品。这款全新SPE产品可保留牛奶中的大部分磷脂和脂肪，再结合蛋白质沉淀技术，可有效消除牛奶基质产生的大部分干扰。 使用Xevo TQ-S系统以及包括每种兽药分析参数的Quanpedia数据库，我们为牛奶中的多兽药残留分析建立了一套高效的完整解决方案。 样品制备 样品提取： 向1mL牛奶中加入4 mL 0.2%甲酸(FA)的乙腈(ACN)溶液，充分混合。在10，000 rpm下离心5 min。取一部分上清液进行SPE净化。 固相萃取(SPE)净化： 先用3mL0.2%甲酸的乙腈溶液通过3 cc Oasis PRiMEHLB小柱(部件号186008056)，以活化小柱。注意：此活化步骤的目的是为随后的样品仅靠重力过柱做准备，若使用负压装置在最低真空度的条件下处理样品，则无需执行此步骤。 取上清液，使其通过小柱并收集滤液。在温和的氮气流下挥干溶剂。1mL5%甲醇水溶液复溶。过微孔滤膜，然后将其转移至样品瓶中以待UPLC-MS/MS分析。 表1.每种分析物的MS参数和保留时间(RT)。 表1.每种分析物的MS参数和保留时间(RT)。 名称 离子模式 母离子(m/z) CV(V) 碎片离子(m/z) CE(V) RT (min) ESI+ 395.4 30 357.0 30 7.95 曲安奈德 ESI+ 395.4 30 375.0 10 ESI+ 348.2 40 139.9 35 3.36 头孢氨苄 ESI+ 348.2 40 158.0 20 ESI+ 456.1 30 167.0 20 3.43 头孢噻肟 ESI+ 456.1 30 396.2 10 ESI+ 524.2 35 241.1 16 5.25 头孢噻呋 ESI+ ESI+ 424.2 35 152.0 20 3.68 头孢匹林 ESI+ 424.2 35 292.2 16 头孢噻呋 ESI+ 524.2 35 241.1 16 5.25 ESI+ 头孢匹林 ESI+ 424.2 35 152.0 20 3.68 ESI+ 424.2 35 292.2 16 表1.每种分析物的MS参数和保留时间(RT)。 结果与讨论 样品制备方法优化 牛奶基质十分复杂，其中的大量蛋白质和磷脂会对目标分析物的检测产生干扰。我们必须净化复杂的牛奶基质，才能避免分析物受基质效应影响。 对于初步提取和蛋白质沉淀，分别选取了两个不同的甲酸乙腈溶液与牛奶的混合比例(3：1和4：1)，以及甲酸乙腈溶液中两种不同的甲酸含量(0.2%和1.0%)评估提取效果。结果表明，1.0%甲酸的乙腈溶液以4：1的比例与牛奶混合时，蛋白质沉淀效果最好。然而，1%甲酸的乙腈溶液会对回收率产生不良影响，对诸如磺胺类的碱性药物的影响尤为明显(见图1)。这可能是因为更偏酸性的条件提升了磺胺类药物的电离程度，导致其在高浓度有机溶剂中的溶解度降低。因此，我们选择以4：1的比例混合0.2%甲酸的乙溶溶液与牛奶作为最终的提取和蛋白质沉淀方案。 表2.牛奶中添加不同浓度抗生素的回收率和精密度(%RSD)。 结论 开发了一种测定牛奶中多兽药残留(包括9个药物类别中的72种化合物)的分析方法。 获得了较高的回收率(50%~130%)，且所有化合物的分析结果精度(RSD)均小于20%(n=5). 研究表明， Oasis PRiME HLB小柱可有效去除牛奶中的磷脂和脂肪。这种样品制备方法简单、有效，适用于在常规分析中处理大量样品。 Waters Quanpedia数据库收录了用于兽药分析的所有液相色谱方法、质谱方法和定量方法参数，对于此类方法的开发非常有用。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 Waters 北京：010-52093866 上海：021-61562666 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 广州：020-28296555 成都：028-67653588 Waters、The Science of What’s Possible、UPLC、Xevo、MassLynx、Oasis 和ACQUITY UPLC是沃特世公司的注册商标。TruView和Quanpedia是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 C2015年沃特世公司。中国印刷。2015年5月720005414ZH AG-PDF 免费售后服务热线：800 (400) 820 2676www.waters.com 快速、简单、有效的水产样品净化流程用于UPLC-MS/MS多兽药残留分析 Michael S Young和Kim Van Tran 应用优势 高高效、省时的多种类兽药残留方法 简单、快速且有效的样品净化，适用于多种分析物 心快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析 关键词 UPLC-MS/MS， Oasis PRiMEHLB小柱，兽药，虾，三文鱼 实验 样品制备 UPLC条件LC系统：ACQUITY UPLC I-Class色谱柱：ACQUITY UPLC CSHC，。，1.7 pm，100 mm x2.1mm色谱柱流动相A：0.1%甲酸水溶液流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液进样体积：5pL进样模式：部分定量环进样柱温：30°C弱洗针液：10：90乙腈/水(600 uL)强洗针液：50：30：40水/乙腈/IPA(200pL)密封清洗液：10：90乙腈/水梯度：时间 流速 (min) (mL/min) 1：%A %B 初始 0.4 2.5 0.4 6 3.9 0.4 5 6 4.9 0.4 5 6 5.0 0.4 6 7.0 0.4 6 MS条件 质谱仪： Xevo TQ-S 正离子电喷雾(氯霉素采用负离子模式) 离子源温度： 150C 脱溶剂气温度： 500°C 脱溶剂气流速： 1000 L/Hr 锥孔气体流速： 30 L/Hr 碰撞气体流速： 0.15 mL/Min 数据管理： MassLynx v4.1 表1汇总了本研究中使用的MRM通道和仪器参数。表1还显示了每种化合物的基质加标校准数据数据(采用虾肉基质加标样品的初级通道计算而得；三文鱼的数据也采用类似方法计算)和保留时间(RT)。 初步提取/沉淀 在50mL离心管中加入2.5g组织匀浆样品，然后添加一定浓度的标准品或QC样品。加入10 mL 0.2%甲酸的80：20乙晴/水溶液，漩涡混合30s，置于摇床上30 min。 在12000rpm下离心5 min。 注：提取/沉淀步骤为大多数目标化合物提供了良好的回收率，但同时还提取出了大量的脂肪和磷脂。 SPE净化 Oasis PRiME HLB小柱(3cc，60mg)安装在预先清洁过的真空提取装置上。不需要进行活化和平衡，本实验也未执行此步骤。真空设置为1-2 psi。让大约0.5mL上清液通过Oasis PRiME HLB小柱并收集滤液。取0.3mL收集液， 在UPLC-MS/MS分析之前用10mM甲酸铵缓冲溶液(pH4.5)稀释3倍。 表1.本研究使用的基质匹配校准数据、MRM通道(初级通道列在第一列)、仪器参数和保留时间(RT)。 结果 表2展示了对加标组织样品进行重复分析获得的回收率数据。虾和三文鱼的基质效应平均约为40%。图1所示的色谱图展示了Oasis PRiME HLB小柱的净化效果，该小柱可去除虾提取物中95%以上的磷脂。同时还可去除90%以上的正己烷提取的脂肪1。 化合物 低浓度 高浓度 低浓度 高浓度 回收率 RSD(%) 回收率 RSD(%) 回收率 RSD(%) 回收率 RSD(%) % n=6 % n=6 % n=6 % n=6 阿莫西林 BLOQ - 67 18 BLOQ - 59 17 卡巴氧 113 9 75 10 85 5 84 7 头孢噻呋 111 7 84 6 64 4 67 4 氯霉素 106 7 77 12 79 7 69 10 金霉素 79 7 63 17 67 5 65 7 环丙沙星 190 14 103 15 109 9 95 4 皮质醇 99 8 80 6 82 4 82 4 地塞米松 112 9 79 7 89 8 79 6 恩诺沙星 90 12 71 12 86 4 84 8 红霉素 110 7 83 8 85 9 86 7 林可霉素 104 6 99 6 90 4 92 3 洛美沙星 126 11 90 11 97 4 92 5 苯唑西林 115 5 86 2 71 2 74 5 土霉素 125 11 92 7 83 5 76 4 青霉素 112 10 86 6 70 10 71 6 保泰松 78 10 51 8 51 7 51 3 莱克多巴胺 102 9 87 8 87 3 90 4 沙丁胺醇 115 7 89 4 92 12 93 3 磺胺 BLOQ 82 17 BLOQ - 95 12 磺胺甲基嘧啶 107 7 91 7 83 3 77 12 磺胺二甲嘧啶 102 8 85 9 82 3 78 8 四环素 106 7 77 12 79 7 69 10 泰乐菌素 116 10 98 4 76 7 87 3 表2.对加标组织样品进行重复分析所得的回收率数据(BLOQ-低于定量限)。 讨论 我们综合Lehotay?提出的方法和Tran3的优化建立了本研究中采用的步骤。整个方法的回收率基本上大于70%，但是一些强极性类化合物(例如四环素)的回收率非常低。然而， Oasis PRiME HLB小柱净化几乎不会对任何方法回收率造成损失。如表3所示，通过对空白基质提取液后添加分析物，进而通过SPE净化后测定的所有分析物(除保泰松外)的回收率都非常出色，具体来讲，虾中的回收率大于80%，三文鱼中大于90%。 虾 三文鱼 化合物 回收率%(%RSD) 回收率%(%RSD) n=5 n=5 阿莫西林 81(23) 97(37) 卡巴氧 102(3) 99(3) 头孢噻呋 102(2) 99 (1) 氯霉素 84(17) 87(5) 金霉素 98(3) 95(1) 环丙沙星 93(4) 103(5) 皮质醇 89(2) 91(2) 地塞米松 84(3) 90(4) 恩诺沙星 94(1) 97(3) 红霉素 83 (11) 104(4) 林可霉素 101(4) 103(2) 洛美沙星 98(2) 93(4) 苯唑西林 100(1) 95(2) 土霉素 104(4) 101(4) 青霉素 98(3) 97(3) 保泰松 55(4) 60(1) 莱克多巴胺 98(1) 97(2) 沙丁胺醇 107(2) 99(6) 磺胺 109(9) 95(10) 磺胺甲基嘧啶 93(2) 93(2) 磺胺二甲嘧啶 93(2) 93(2) 四环素 99(3) 98(5) 泰乐菌素 84(5) 103(5) 表3.SPE回收率%(通过式净化之后，加标的虾或三文鱼提取物中回收到的化合物的百分比)。 ( 结论 ) 本实验在虾和三文鱼组织的分析中应用了简便有效的提取/蛋白沉淀步骤。 通过简单的Oasis PRiME HLB小柱通过式净化方案去除了初始提取物中90%以上的脂肪和磷脂。 通过本文的样品制备方法获得的洗脱液较澄清，且在LC-MS分析前无需进行后续的过滤操作。 通过使用简单的Oasis PRiME HLB小柱通过式净化方案，多种兽药均表现出一致的高回收率。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. ( 参考文献 ) ( 1. M. Young and K. Tran， Oasis PRiME HLB Cartridge for Effective Cleanup of Meat Extracts Prior to Multi-Residue Veterinary Drug UPLC-MS Analysis， Waters Application B r ief， 2015. ) 2. ( S.Lehotay， High-Throughput Screening Analysis by UHPLC-MS/MS of>60 Veterinary Drugs in AnimalTissues， 125th AOAC Annual Meeting，Presentation 2303， 21 September， 2011. ) 3.M. Young and K. Tran， OptimizedExtraction and Cleanup Protocols ForLC-MS/MS Multiresidue Determinationof Veterinary Drugs in Edible MuscleTissues， Waters Application Note 2011. Waters、 The Science of What’s Possible、UPLC、Oasis、 Xevo、MassLynx和ACQUITY UPLC是沃特世公司的注册商标。CSH是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 C2015年沃特世公司中国印刷2015年9月720005488ZH AG-PDF Michael S. Young和Kim Van Tran 应用优势 高效、省时的多种类/多残留分析方法。 简单、快速且有效的样品净化方案，适用于多种分析物。 快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析。 UPLC条件 LC系统：ACQUITY UPLC I-Class色谱柱：ACQUITY UPLC CSHMC，1.7um， 100mm x2.1 mm ID流动相A：0.1%甲酸水溶液流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液进样体积：5pL进样模式：部分定量环进样柱温：30℃弱洗针液：乙乙：水(10：90)(600 pL)强洗针液：水：乙腈：异丙醇(50：30：40)(200 pL)密封清洗液：乙乙：水(10：90) 梯度： 时间 (min) (mL/min) %A %B 曲线 初始 0.4 初始 2.5 0.4 6 3.9 0.4 5 6 4.9 0.4 5 6 5.0 0.4 6 7.0 0.4 6 MS条件 质谱仪： Xevo TQ-S 阳离子电喷雾离子源温度：150℃ 脱溶剂气温度：500°℃脱溶剂气流速：1000 L/Hr锥孔气流速：30 L/Hr碰撞气流速：0.15 mL/Min 数据管理系统： MassLynx°v4.1 初步提取/沉淀 准确称取0.5g婴儿配方奶粉样品加入到50mL离心管中。对于标准样品或QC样品，通过在样品中加入适量的目标分析物完成。加入3mL提取溶剂(0.2%甲酸的70：30乙腈/水溶液)。漩涡混合30s，置于摇床上振摇30 min。在3220 rcf离心力下离心5 min。 注：经过提取/沉淀步骤，大多数目标化合物都能获得良好的回收率，但同时也提取出了大量脂肪和磷脂。 SPE净化： 将Oasis PRiME HLB小柱 (3cc， 60 mg)安装到预先清洁过的真空固相萃取装置上。不需要活化小柱，本实验也未执行此步骤。真空设置为1-2 psi。让大约0.5mL上清液通过Oasis PRiME小柱并收集滤液。取0.3mL通过式净化后的样品，用10mM甲酸铵缓冲液(pH4.5)稀释3倍后进行UPLC-MS/MS分析。 化合物 MRM 锥孔电压 碰撞能量 加标浓度(低、高) 校准范围 相关系数 RT (V) (eV) ug/kg ug/kg (R2) 卡巴氧 263.0>231.0263.0>145.0 2525 1520 25，100 12.5-200 0.9990 1.37 头孢噻呋 524.3>241.1 524.3>285.0 30 30 16 16 250，1000 125-2000 0.9980 2.79 金霉素 479.3>444.2 479.3>462.2 30 30 21 18 25，100 12.5-200 0.9977 1.53 环丙沙星 332.1>288.1 332.1>231.1 30 30 18 40 25，100 12.5-200 0.9929 0.84 皮质醇 363.2>121.0 363.2>91.03 42 30 52 22 50，200 25-400 0.9961 2.93 地塞米松 393.2>373.2 393.2>355.3 30 30 10 15 25，100 12.5-200 0.9917 3.39 恩诺沙星 360.4>245.0 360.4>316.1 50 50 25 25 50，200 25-400 0.9991 0.98 红霉素 734.4>158.1 734.4>576.5 30 30 32 20 2.5，10 1.25-20 0.9978 2.16 林可霉素 407.2>126.1 407.2>359.3 36 36 34 20 12.5，50 6.25-100 0.9962 0.57 洛美沙星 352.1>265.1 352.1>308.1 31 31 22 16 50，200 25-400 0.9991 0.90 苯唑西林 402.2>160.0 402.2>243.1 30 30 12 15 25，100 12.5-200 0.9990 3.75 土霉素 461.2>426.2 461.2>408.11 30 30 21 13 25，100 12.5-200 0.9971 0.96 青霉素 335.16>160.1 335.15>176.1 20 20 30 30 12.5，50 6.25-100 0.9956 3.41 保泰松 309.4>160.0 309.4>103.9 37 37 20 20 25，100 12.5-200 0.9962 4.22 莱克多巴胺 302.2.164.1 302.2>107.0 30 30 15 27 75，300 37.5-600 0.9990 0.90 沙丁胺醇 240.2>148.1 240.2>222.1 30 30 20 12 25，100 12.5-200 0.9941 0.55 磺胺甲基嘧啶 265>92.0 265>156.0 30 30 28 15 25，100 12.5-200 0.9998 1.50 磺胺二甲嘧啶 279.1>186.0 279.1>92.0 30 30 16 28 25，100 12.5-200 0.9996 1.67 磺胺 156>92.0 156>65.0 30 30 15 25 25，100 12.5-200 0.9964 0.86 四环素 445.3>154.0 445.3.410.2 30 30 26 21 25，100 12.5-200 0.9964 1.05 泰乐菌素 916.5>174.1916.5>101.1 5757 4045 5，20 2.5-40 0.9920 2.38 表1.本研究使用的基质匹配校准数据、MRM通道(初级通道列在第一列)、仪器参数和保留时间(RT)。 表2展示了对加标样品进行重复分析获得的回收率数据。婴儿配方奶粉的基质效应平均值约为40%。图1所示的色谱图展示了Oasis PRiME HLB小柱的净化效果，该小柱可去除婴儿配方奶粉中95%以上的磷脂。 图1.LC-MS/MS色谱图，显示了有效去除婴儿配方奶粉中95%以上的磷脂。 化合物 低浓度 高浓度 回收率 RSD(%) 回收率 RSD(%) % n=6 % n=6 卡巴氧 110 5 115 3 头孢噻呋 84 4 71 10 金霉素 47 9 46 9 环丙沙星 107 8 102 6 皮质醇 111 8 117 5 地塞米松 113 14 121 5 恩诺沙星 113 4 110 5 红霉素 126 6 125 6 林可霉素 50 7 52 5 洛美沙星 120 2 111 2 苯唑西林 117 6 114 4 土霉素 29 13 27 13 青霉素 120 10 116 7 保泰松 105 13 94 6 莱克多巴胺 115 2 117 5 沙丁胺醇 82 7 83 4 磺胺甲基嘧啶 130 4 126 4 磺胺二甲嘧啶 128 2 129 3 磺胺 105 12 120 5 四环素 41 13 40 17 泰乐菌素 110 13 116 7 卡巴氧 110 5 115 3 头孢噻呋 84 4 71 10 表2.重复分析加标婴儿配方奶粉样品(n=6)获得的回收率数据。 讨论 本研究方法基于以前的方法1.2开发，该方法的整体回收率在70%以上，但对于某些强极性化合物(如四环素)，回收率结果偏低。通过如图2所示，测得的SPE净化步骤对每种化合物的回收率在80%以上， 说明Oasis PRiME HLB小柱净化几乎未对方法回收率造成任何损失。 图2.样品经初步提取后，在Oasis PRiME HLB通过式净化前加标后再过柱得到的兽药化合物回收率。 结论 本实验在婴儿配方奶粉分析中应用了简单有效的提取/蛋白质沉淀方法。 采用Oasis PRiME HLB小柱的简单一步通过式净化方案去除了初始提取物中90%以上的脂肪和磷脂。 本实验所用的样品制备方法可得到不含颗粒的净化液，因此在LC-MS分析前无需进行过滤操作。 使用Oasis PRiME HLB小柱的一步通过式净化方案，多种兽药均得出一致的高回收率。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. ( 参考文献 ) 1. M. Youngand K. Tran， Oasis PRiME HLBCartridge for Effective Cleanup of MeatExtracts Prior to Multi-Residue Veterinary DrugUPLC-MS Analysis， Waters Technology Brief720005411EN，2015. 2. M. Young and K. Tran， Rapid，Simple， andEffective Cleanup of Seafood Extracts Priorto UPLC-MS/MS Multiresidue VeterinaryDrugs Analysis， Waters Application Note720005488EN，2015. ( Waters、The Science of What’s Possible、UPLC、Oasis、ACQUITY UPLC、Xevo和MassLynx是 沃特世公司的注册商标。CSH是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 ) 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成戈：028-67653588 香港：852-2964 1800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676www.waters.com 应用简单有效的净化方案进行鸡蛋中兽药残留的UPLC-MS/MS测定 Sujie Xia， Kim Van Tran，Dimple Shah， Jeremy C. Shia， Michael S. Young?和 Jennifer Burgess? 1上海市食品药品监督管理局(中国上海201203)；2沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 ■高高效、省时的多种类/多残留方法。 简单、快速且有效的样品净化方案，适用于多种分析物。 ■心快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析。 特世解决方案 ACQUITY UPLCI-Class系统 ACQUITY UPLC色谱柱 Xevo°TQ-S质谱仪 用于SPE净化的Oasis°PRiME HLB小柱 关键词 UPLC-MS/MS， Oasis PRiME HLB，兽药，鸡蛋 概述为了保障公众健康和安全，人们亟需一种可靠的分析方法用于测定食品中的兽药残留。样品中的目标化合物包括强极性的水溶性化合物到完全非极性的脂溶性化合物。为了实现最高通量和最低的成本，分析人员期望能通过单一分析方法尽可能多地测定食品中的各种兽药残留。鸡蛋中含有大量蛋白质、脂肪和卵磷脂(磷脂)，它们会对仪器性能造成不利影响，因此在LC-MS分析之前应减少或去除这些成分。 简介 兽药被广泛应用于防控蛋鸡的疾病。然而，这些化合物可能会转移到鸡蛋中并积累。残留的兽药可能引起过敏反应，或者使得病原体对人用抗生素药物产生耐药性，因此鸡蛋中的兽药残留对于消费者而言是潜在的健康风险。本研究从12类兽药中选择了16种具有代表性的药物作为研究对象，其中大多数在美国或中国都有相应的最大残留量限量(MRL)1.2。图1为这些兽药的化学结构。 鸡蛋中多兽药残留检测中，能够让不同物理化学性质的兽药得到满意的回收率，样品制备具有一定的挑战性。某些目标化合物还可能与蛋白质或其它基质组分结合。鸡蛋是卵磷脂(磷脂)含量最高的食物之一，此外还含有大量的脂肪；这些共提物会在LC-MS分析中产生干扰、引发离子抑制效应、污染UPLC系统的分析柱和其它部件，还有可能污染质谱仪。 在本研究中，我们为鸡蛋中多种兽药的UPLC-MS/MS检测开发了样品提取、净化和分析方案。实验采用酸化的乙腈/水溶剂处理样品，以沉淀蛋白质、释放结合的残留物以及提取目标兽药。然后，使用新型SPE产品Oasis PRiME HLB小柱进行简单的通过式净化，去除脂肪和磷脂。 标准物质 本实验选用了属于不同种类的16种兽药。表1列出了它们的化学式、同位素质量(MW)，以及美国或中国规定的最大残留限量(MRL)。 图1.本研究中代表性化合物的结构式。 化合物 分子式 同位素质量 市场 MRL(ng/g) 氨丙啉 C14H19CIN4 278.130 美国 4000 杆菌肽A C66H103N17016S 1421.749 美国/中国 500 潮霉素B C20H37N3013 527.233 美国/中国 不允许残留 制菌霉素A1 C47H75NO17 925.503 美国 不允许残留 粘菌素B C52H98N16013 1154.750 中国 300 氟苯尼考 C12H14CIFNO4S 357.000 中国 不允许残留 氟苯哒唑 C16H12FN303 313.086 中国 400 恶喹酸 C13HLNO5 261.063 中国 50 泰妙菌素 C28H47NOS 493.323 中国 1000 金霉素 C22H23CIN，O： 478.114 美国/中国 400/200 红霉素 C37H67NO13 733.461 美国/中国 25/150 林可霉素 C18H34N20S 406.214 中国 50 土霉素 C22H24N20g9 460.148 中国 200 青霉素G C16H18N，OS 334.099 美国 不允许残留 四环素 C22H24N20： 444.153 中国 200 泰乐菌素 C46H77NO17 915.519 美国/中国 200 表1.本研究使用的兽药(杆菌肽、粘菌素和制菌霉素均含有两种以上组分，只选其中一种主要组分进行分析)。 2.50 kV) 离子源温度： 150C 脱溶剂气温度：600℃ 锥孔气流速： 150 L/hr 脱溶剂气流速：1000L/hr 碰撞气流速： 0.15 mL/min 喷雾器气流： 7.00 Bar MRM通道1 MRM通道2 母离子 碎片 锥孔 碰撞 碎片 锥孔 碰撞 化合物 (m/z) 离子 电压 能量 离子 电压 能量 (m/z) (V) (eV) (m/z) (V) (eV) 氨丙啉 243.26 94.06 20 14 150.17 20 12 杆菌肽A 712.22 199.10 68 40 110.10 68 70 潮霉素B 528.49352.20 48 22 177.14 48 32 制菌霉素A1 926.82297.24 22 28 107.13 48 60 粘菌素B 578.66101.07 64 28 86.06 64 40 氟苯尼考 356.03335.96 52 10 184.94 52 22 氟苯哒唑 314.25282.19 90 18 123.08 90 36 恶喹酸 262.20244.20 20 12 160.17 50 32 泰妙菌素 494.45)119.10 40 42 192.17 40 20 金霉素 479.27 444.19 12 18 154.06 12 26 红霉素 734.72158.08 48 26 576.52 48 18 林可霉素 407.20 126.10 40 34 359.30 40 20 土霉素 461.36 426.22 20 18 201.07 64 36 青霉素G 335.27176.05 14 20 159.99 14 16 四环素 445.30 410.20 40 21 154.00 40 26 泰乐菌素 916.88 174.13 80 36 101.10 45 45 表2.16种兽药的MRM通道参数。 化合物 RT LOD 线性范围 R2 (min) (ng/g) (ng/g) 2氨丙啉 0.61 0.5 80-40，000 0.998 9杆菌肽A 2.52 1 10-5，000 0.992 1潮霉素B 0.48 4 4-1，000 0.990 15制菌霉素A1 3.30 10 40-1，000 0.992 4粘菌素B 1.73 30 90-600 0.990 10氟苯尼考 2.69 4 4-1，000 0.991 14氟苯哒唑 3.29 0.5 8-240 0.993 11恶喹酸 2.83 1 1-500 0.993 16泰妙菌素 3.88 0.5 20-1，000 0.990 8金霉素 2.49 0.5 4-2，000 0.995 12红霉素 2.95 0.5 0.5-250 0.995 3林可霉素 1.59 0.5 1-500 0.996 5土霉素 1.89 0.5 4-2，000 0.995 6青霉素G 1.91 1 2-1，000 0.991 7四环素 2.04 0.5 4-2，000 0.994 13泰乐菌素 3.06 0.5 20-800 0.991 表3.UPLC-MS保留时间及校准数据。 提取： 称取2g匀浆后的蛋液至50mL聚丙烯离心管中。在回收样品中加入适量适标准品。样品中加入8mL含0.2%甲酸的80：20乙腈/水溶液，涡旋混合30s，置于摇床上振摇30 min， 然后在4500 rpm下离心10 min。 取上清液进行SPE净化。 通过式SPE净化： 将Oasis PRiME HLB Vac小柱(3cc， 60 mg，9部件号186008056)，安装到预先清洁过的真空萃取装置上。不需要进行小柱活化，本实验也未执行此步骤。取0.5mL上清液，使其通过小柱，然后在1~2 psi的真空条件下收集滤液。进行UPLC-MS/MS分析之前，取0.2mL收集到的提取物，用10mM甲酸铵缓冲溶液(pH4.5)稀释至1.6mL.图2为分析基质匹配标准品获得的典型色谱图。 图2.16种兽药(MRL的添加浓度的基质匹配标准品)的MRM叠加色谱图。 结果与讨论 OASIS PRIME HLB小柱通过式净化 本实验评估了Oasis PRiME HLB小柱的分析物回收率及其对鸡蛋基质中磷脂的去除效果。总体方法回收率在50%~97%范围内。不过， Oasis PRiME HLB小柱净化几乎未对方法回收率造成任何损失。如图3所示， SPE净化步骤之后测得的所有化合物的回收率均大于80%，其中大多数化合物的回收率在90%以上。 图3.使用Oasis PRiME HLB小柱净化方案获得的目标兽药回收率数据(MRL的添加浓度下)。 全蛋中含有大量的脂肪，而且是食用卵磷脂(磷脂)的最大食物来源之一。鸡蛋的总脂质含量约占其重量的11%(除去蛋壳)，磷脂含量约为0.35%4。在样品制备的初始提取步骤中，这些潜在干扰物质会随目标兽药一起被大量提取出来。使用Oasis PRiME HLB小柱进行通过式净化可以去除鸡蛋提取物中84%以上的总脂质。此净化方案对磷脂的去除效果更加出色。如图4所示，Oasis PRiME HLB小柱净化方案去除了鸡蛋提取物中95%以上的磷脂。 图4.采用Oasis PRiME HLB净化方案可有效去除鸡蛋提取物中的磷脂。 方法回收率和结果精密度 在回收率实验中，我们分析了析个浓度的样品(0.4倍MRL、1倍MRL、2倍MRL)，每个浓度六个重复样。使用基质匹配标准品校准曲线进行计算。图5为所得的结果。除制菌霉素和潮霉素外，大多数目标化合物(70%以上)的回收率均大于70%。除0.4MRL的潮霉素外(RSD=34%)，其它所有化合物的重现性均可接受(RSD<20%). 结论 开发了一种可以同时测定鸡蛋中多种兽药的分析方法. 采用Oasis PRiME HLB小柱的简单通过式净化方案可以去除鸡蛋提取物中95%以上的磷脂。 COasis PRiME HLB小柱净化方案可有效净化鸡蛋中干扰物，同时目标兽药能获得良好的回收率。 ( 本研究将ACQUITY UPLCI-Class系统与Xevo TQ-SMS联用，在兽药残留分析中获得了良好的灵敏度。 ) THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、The Science of What’s Possible、ACQUITY UPLC、Xevo、UPLC和Oasis是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 ( 参考文献 ) ( 1. Antonia Garrido Frenich， et.al. AnalyticaChimica Acta 661(2010)150-160. ) ( 2. The Ministry of Agriculture Bulletin of PRC235，2002. ) ( 3. https：// www.gl obalmrl.co m/ ) ( 4. John L. Weirauch and Young-Sun-Son. JAOCS 60 (1983) 1971-1978. ) 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-2964 1800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676www.waters.com 应用Oasis PRiME HLB小柱快速有效地净化高脂肪基质的鳄梨样样后进行APGC-MS/MS分析 Michael S. Young和Jeremy C. Shia 应用优势 高效、省时的多种类/多残留分析方法。 简单、快速且有效的样品净化方案，适用于分析脂肪基质中的多种分析物。 快速、灵敏的APGC-MS/MS分析。 概述 为了保障公众健康和安全，人们亟需一种可靠的分析方法用于测定食品中的农药残留水平。许多化合物都非常适合采用气相色谱(GC)进行分析，我们通常采用气相色谱与质谱(GC-MS)联用的方法来测定水果和蔬菜中的农药残留。本应用纪要介绍了一种高效的净化方案，其适用于对高脂肪基质的鳄梨样品进行农药分析。在改良型QuEChERS提取之后，采用Oasis PRiME HLB小柱净化样品。然后使用气相色谱与大气压电离离谱(APGC-MS/MS)联用的系统进行分析。 简介 近年来，食品安全实验室纷纷采用精简的新型样品制备方法来缩短分析时间、降低相关成本以及提高分析通量。例如，用于水果和蔬菜的QuEChERS方法只需几分钟即可完成样品制备，成功取代了以往需要耗费数小时甚至数天的方法。本研究将这种精简的样品制备方法应用于鳄梨的农药分析。鳄梨是一种脂肪含量极高的水果基质，通常含有10%~15%的脂肪和大约1%的总磷脂。在QuEChERS提取中，大量脂肪和磷脂会随着目标农药一起被提取出来。这些共提物(尤其是磷脂)可能干扰色谱分析、污染GC进样器和色谱柱，还有可能污染质谱仪。为了避免这些问题，最好在进行仪器分析之前净化样品。一般采用混合吸附剂通过分散SPE方法，而这往往涉及繁琐的多步离心操作。本研究采用Oasis PRiME HLB小柱进行简单的通过式净化，旨在有效去除脂肪和磷脂。该方法被应用于分析全球多个市场上注册用于鳄梨的多种农药，而且适用于GC-MS分析。本研究采用APGC方法进行定量分析(APGC-MS/MS)。 表1.APMC-MS化合物的MRM通初(初级通道列在第一列)、仪器参数和观察到的保留时间(RT)。(*表示有多种异构体的化合物；采用丰度最高的异构体进行定量。) AOAC QuEChERS提取： 由于鳄梨的脂肪含量极高，我们修改了AOAC QuEChERS方法，将样品量从15g减少到5g.称取5g样品加入50mL离心管中(对于加标样品，加入所需体积的加标标准溶液)。加入5 mL水和15 mL 99：1乙腈/乙酸。漩涡混合30s，然后充分振荡2 min。加入QuEChERS盐(用于AOAC的DisQuE提取盐包，.部件号186006812)。用手大力振摇离心管1 min， 然后约2500 rcf离心力下离心5 min。取一部分上清液(最上层)进行净化。 通过式SPE净化： 将Oasis PRiME HLB小柱(3cc， 60 mg，部件号186008056)安装到真空萃取装置上。设置为最低真空度(约2in汞柱)。取0.4mL的QuEChERS上清液，使其通过小柱丢弃流出液。安装收集容器。取0.6mL的QuEChERS上清液，使其通过小柱并收集滤液。在本研究中，将200uL收集到的提取物转移至Qsert样品瓶中，直接进行APGC-MS分析。或者，可取一部分收集到的提取物，挥干并复溶于甲苯中，用于不分流GC进样。 AOAC QUECHERS提取 辨别SPE净化引起的回收率损失与初始QuEChERS提取引起的回收率损失是十分重要的。因此，在进行任何SPE回收实验之前，我们评估了改良型QuEChERS方案对目标化合物的回收率。除灭菌丹(70%)、甲氰菊酯(65%)和吡丙醚(75%)之外，其所所有化合物(加标浓度为40ng/g)的回收率均大于80%。 OASIS PRIME HLB净化 使用经改良型QuEChERS方案处理得到的鳄梨空白样品确定SPE净化的回收率(见图1)。如图1所示，空白提取物中分别加标9 ug/kg和40 ug/kg (ppb)的目标化合物，然后采用通过式SPE净化方案处理。将每种化合物的响应与SPE净化之后加标的相同空白样品的响应进行比较。结果表明，经通过式净化方案处理的样品中，只有灭菌丹(一种热不稳定且pH不稳定的物质)的回收率损失大于20%。如图2所示， Oasis PRiME HLB小柱净化方案有效去除了了梨QuEChERS提取物中95%以上的磷脂。此外，该净化方案还去除了90%以上的叶绿素和大约80%的脂肪。采用此方案只需很短的时间即可完成净化，且净化效果与通常需要多个繁琐的离心步骤的传统分散SPE(dSPE)净夕相当。 图1.SPE净化的回收率结果。 图2.采用Oasis PRiME HLB净化方案可有效除除鳄梨QuEChERS提取物中的磷脂。 APGC-MS/MS 与传统的电子碰撞质谱(EI-MS)相比， APGC使用的API电离是一种“软”电离技术，通常极适用于串联MS。这种“软”电离技术可减少源内碎裂，更有可能获得分子离子用于随后碰撞池内的碎裂。图3展示了一个例子，比较了高效氯氟氰菊酯的API+和EI+质谱图。可以看到，与El谱图相比，API谱图中分子离子的丰度较高(m/z449)。在本研究中，我们通过监测两个MRM通道来测定高效氯氟氰菊酯(见表1)。这两个通道都是m/z449的分子离子碎裂产生的；如果使用EI-MS， 将无法获得这些通道。图4所示为添加9 ng/g高效氯氟氰菊酯的鳄梨样品经QuEChERS提取和Oasis PRiMEHLB净化之后，采用APGC-MS/MS测定其中的高效氯氟氰菊酯的异构体的色谱图。在本研究中，所有目标化合物都得到了相似的低ng/g (ppb)水平的检测限。 图3.高效氯氟氰菊酯的质谱图比较；El+谱图(左)中几乎没有任何分子离子，而API+谱图(右)中m/z449处分子离子的丰度极高。 图4.APGC-MS/MS色谱图，显示了加标浓度为9 ng/g(ppb)的鳄梨样品中的高效氯氟氰菊酯异构体；MRM通道通过m/z 449处的分子离子碎裂获得。 ( 结论 ) ( 在进行APGC-MS/MS分析之前，采用改良型QuEChERS方案可有效提取鳄梨样品中的农药。 ) Oasis PRiME HLB通过式净化可有效去除QuEChERS提取物中的脂肪和磷脂。 Oasis PRiME HLB小柱的净化效果和回收率与繁琐费时的多步分散SPE相相。 在APGC-MS/MS模式下运行的Xevo TQ-S质谱仪可有效测定鳄梨中低ppb水平的农药。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 Waters 北京：010-52093866 上海：021-61562666 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 广州：020-2829 6555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 Waters、The Science of What’s Possible、Oasis、 Xevo和MassLynx是沃特世公司的注册商标。DisQuE是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 C2016年沃特世公司。中国印刷。2016年10月720005816ZH AG-PDF 免费售后服务热线：800 (400)8202676Www.waters.com 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 目的 本文将介绍一种改良型QuEChERS提取方案和 简单的净化策略，适用于霉菌毒素的多残留 UPLC-MS/MS分析。 应用背景 真菌毒素是由存在于家畜、饲料和食物上的霉菌或其它真菌产生的一类有毒化合物，摄取的食物仅含ppb(ug/kg)浓度的真菌毒素就有可能引发严重疾病。因此，我们需要灵敏可靠的分析方法来测定食品和饲料中的霉菌毒素。农产品中小麦、大米和玉米等是最易受到污染的谷物，因此也是监测的重点。这些谷物中有许多天然成分都是LC-MS/MS分析的干扰物。虽然蛋白质和淀粉可通过QuEChERS提取过程中的层析、沉淀和离心步骤去除，但是大量脂肪和卵磷脂(磷脂)仍会随目标物霉菌毒素被共同提取出来。 应用Oasis PRiME HLB小柱和DisQuE QuEChERS提取方法在谷物样品UPLC-MS/MS分析时可实现简单、高效的提取和净化的前处理解决方案。 图1.小麦面粉样品中添加了相应浓度的12种真菌毒素的色谱图。 这些共提物会干扰LC-MS分析、污染色谱柱和UPLC系统、质谱仪。传统方法主要采用正己烷脱脂或使用反相吸附剂(如硅胶C，)去除提取物中的脂肪。尽管这些技术可有效去除脂肪，但它们都无法去除磷脂。 解决方案 使用Oasis° PRiME HLB小柱进行通过式净化以去除脂肪和磷脂；通过dSPE(分散SPE)净化去除残留的糖类和其它极性物质。应用上述净化方案可以得到满意的回收率。 实验步骤 QuEChERS提取：取市购小麦粉。称取2g样品，装入50mL离心管中。加入10 mL水和10mL甲酸/乙腈(10：90)溶液，将样品置于自动振荡器中振摇1h。然后加入QuEChERS盐(用于CEN方法的DisQuE提取盐包，部件号186006813)，用手大力振摇1 min。离心(3200转/分钟， 5 min)后， 取出一部分上清液进行净化。 净化：将Oasis PRiME HLB小柱(3cc， 150 mg，部件号186008717)安装在预先清洁过且设置为最小真空度(大约2 psi)的真空萃取装置上。无需执行小柱活化步骤。取取0.4mL上清液，使其通过Oasis PRiME小柱并弃去滤液。然后再取1mL上清液，再次通过小柱并收集滤液。然后将收集到的流出液转移到含有混合吸附剂的2mLdSPE管(部件号186008081)中。在13500转/分钟下离心1min， 取500pL夜清液，在温和的氮气流中挥干，然后复溶于250 uL乙腈/水(15：85)中。 仪器条件 UPLC-MS/MS仪器条件如右侧所示。表1列出了本应用的目标化合物、MRM多反应监测通道和质谱参数。每种真菌毒素使用空白基质配置标准曲线，在6个不同浓度的范围内具有良好的线性关系，相关系数R2>0.99。 UPLC条件 LC系统： ACQUITYUPLCI-Class (FTN) 色谱柱： CORTECS° UPLC T3， 1.6 um， 100x2.1 mmA：含有0.5%甲酸和5mM甲酸铵的水溶液 流动相：B： 含有0.5%甲酸和5mM甲酸铵的 甲醇/乙腈(50：50)溶液 流动相梯度洗脱程序： 时间 %A %B 起始 95 5 1 95 5 6 30 70 6.5 5 95 7.5 1 99 9.7 1 99 10 95 5 11 95 5 进样体积： 10pL 柱温： 30°℃洗针液和样品管理器冲洗液：1%甲酸，10mM柠檬酸的水溶液/甲醇/异丙醇/乙腈(1：1：1：1)密封清洗液： 甲醇/水(10：90) MS条件 质谱仪： Xevo° TQ-S micro 离子源： ESI+ 离子源温度： 150°℃ 脱溶剂气温度： 500°℃ 脱溶剂气流速： 1000 L/h 锥孔气流速： 30 L/h 数据管理系统： MassLynx4.1版 实验结果 本应用测定了12种毒素在低浓度和高浓度下的回收率。高浓度为欧盟规定的黄曲霉毒素、伏马菌素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的最高允许浓度，以及T2和HT2毒素的推荐浓度(见图1)。低浓度为高浓度的1/4(曲曲霉毒素的浓度为0.25 ng/g)。小麦面粉中在低浓度和高浓度加标样品中除玉米赤霉烯酮(回收率在73%)外，所有目标化合物的方法回收率均大于80%。大米和玉米面粉样品的结果与之相当。 应用通过式净化或dSPE净化步骤对真菌毒素的损失极小。图1显示了加标浓度为1 ng/g (ppb)黄曲霉毒素的小麦面粉样品的色谱图。图2为Oasis PRiME小柱去除磷脂的效率的比较色谱图；显示了使用Oasis PRiME小柱成功去除了95%以上的磷脂和80%以上的总脂肪。 真菌毒素 保留时间(min) MRM通道 锥孔电压(V) 碰撞电压(eV) 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 3.02 297.1>249.1 15 15 297.1>231.1 15 18 4.80 331.2>245.1 20 25 黄曲霉毒素G2 331.2>257.1 20 30 4.99 329.2>283.1 20 25 黄曲霉毒素G1 329.2>243.1 20 35 黄曲霉毒素B2 5.10 315.2>259.1 20 33 315.2>287.1 20 30 黄曲霉毒素B1 5.27 313.2>241.1 15 40 313.2>285.1 15 28 伏马菌素B1 5.70 722.4>334.2 30 40 722.4>352.2 30 35 HT-2毒素 5.72 442.2>263.1 20 15 442.2>215.2 20 15 赭曲霉毒素B 6.06 370.1>205.1 20 25 370.1>205.2 20 24 T-2毒素 6.30 484.2>305.1 25 9 484.2>245.1 25 9 伏马菌素B2 6.47 706.4>318.2 35 40 706.4>336.2 35 40 玉米赤霉烯酮 6.57 319.2>187.1 15 15 319.2>283.1 15 13 赭曲霉毒素A 6.60 404.2>239.1 20 25 404.2>358.2 20 16 表1.每种目标化合物的MRM通道和质谱条件(注： HT-2和T-2毒素的MRM监测通道采用其铵加合物；为了增强响应，流动相中添加了甲酸铵)。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、 The Science of What's Possible、 ACQUITY UPLC、CORTECS、Xevo、Oasis和MassLynx是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 图2.使用Oasis PRiME HLB进行通过式净化；几乎完全去除了小麦面粉QuEChERS提取物中的磷脂。 ( 结论 ) 实验证明，经改良的QuEChERS提取方案能够有效地从小麦、大米和玉米面粉中同时提取出12种真菌毒素。 使用Oasis PRiME HLB小柱进行通过式净化可有效去除QuEChERS提取液中80%以上的脂肪和95%以上的磷脂。 使用混合吸附剂的dSPE净化能有效去除QuEChERS提取液中的极性共提取物。 按本应用进行样品制备，并使用Xevo TQ-S micro质谱仪进行LC-MS/MS分析，可满足欧盟法规标准的定量限LOQ的要求。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 上海：021-61562666 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400)8202676www.waters.com 快速、简单、有效地净化牛肝样品用于多兽药残留UPLC-MS/MS分析 Michael S. Young和Kim Van Tran沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 概述 高效、省时的多种类/多留方法 简单、快速且有效的样品净化，适用于多种分析物 快速、灵敏的UPLC-MS/MS分析 为了保障公众健康和安全，人们亟需一种可靠的分析方法对食用组织样品(如牛肝)中的兽药残留水平进行测定。样品中的目标化合物涵盖了强极性的水溶性化合物到完全非极性的脂溶性化合物。为了实现最大化的通量和最少的成本，分析人员期望能够通过一个分析方法测定组织样品中的各种兽药残留。 简介 采用LC-MS测定兽药留留时，通常会使用乙腈溶剂对牛肉和牛肝等组织样品进行萃取。其中，最显著的共萃取物质为脂肪和极性性质，特别是磷脂(卵磷脂)。1克牛肝中通常含有约45mg脂肪，肌肉组织中脂肪含量通常为肝脏中的一半，但仍然很显著。牛肝还是优质卵磷脂(磷脂)的膳食来源；1克肝脏中含有约25mg磷脂，是肌肉中常见含量的大约匹倍。早期方法利用正正烷进行液液萃取或通过采用十八烷基硅胶(C)的SPE固相萃取可去除组织提取液(乙腈体系)中的脂肪。虽然反相吸附剂C，能够有效去除大多数非极性脂质，但无法去除磷脂。过量的磷脂会缩短液相色谱柱的使用寿命，导致离子抑制并污染质谱仪。本研究在LC-MS/MS分析前采用新型反相吸附剂Oasis PRiMEHLB实现了牛肝提取物中磷脂和脂肪的高效去除。采用该新型吸附剂所得的兽药回收率结果与通过C，净化后获得的结果相类似。但是，经简单的通过式SPE流程处理后，可有效去除组织提取物中95%以上的磷脂和85%以上的脂肪。 沃特世解决方案 ACQUITY UPLCI-Class系统 Xevo°TQ-XS质谱仪 Oasis° PRiME HLB小柱，用于SPE净化 关键词 UPLC-MS/MS， Oasis PRiME HLB小柱，兽药，牛肝 实验 表1.本研究使用化合物的MRM通道(初级通道在前)、仪器参数和保留时间(RT) 样品制备1.初步萃取/沉淀：将2g组织样品置于带陶瓷均质器球的15mL离心管中(该步骤使用的是Bertin Technologies公司Precellys° Evolution均质器)。对于标准品或QC样品，样品中应加入适量的所需分析物。向离心管中加入10 mL 0.2%甲酸的85：15乙腈/水溶液，样品匀浆/萃取1.5分钟，然后在3200 rcf的转速下离心5分钟。注：萃取/沉淀步骤使大多数目标化合物能够获得良好的回收率，但是也提取了大量脂肪和磷脂。 结果 2.通过式SPE净化：将Oasis PRiME HLB小柱(6cc， 200 mg)安装在预先清洁过的真空导管上。不需要进行小柱活化，本实验也未执行此步骤。真空设置为2 psi。取0.6mL上清液，使其通过Oasis PRiME小柱并弃去滤液。然后安装收集管，取1mL上清液通过Oasis PRiME小柱并收集滤液。取200 pL滤液， 在UPLC-MS/MS分析之前用400 pL10mM甲酸铵缓冲液(pH 4.5)进行稀释。图1为组织样品重复平行加标分析(n=6)获得的回收率数据。基质效应平均值约为40%。图2所示的色谱图展示了Oasis PRiME HLB小柱的净化效果，该小柱可去除牛肝提取物中95%以上的磷脂，同时还可去除90%以上正己烷可提取的的肪。120100010 ppb1100ppb林西素入呋啶>隆素>素莫青霉丙啉>噻沙星菌素霉磷辛素阿氨杆菌肽A>氯舒红磺达唑尼菌唑素菌唑胺啉素星氨达巴嗪多恶灵四环菌考那敏噻菌素特罗氨苄头孢金霉素氯羟吡邻氯青霉达氟芬苯氟伊维左旋咪能莫仑太尔去乙烯环丙沙星>依普醋酸美仑孕酮入莫莫昔克丁奥芬青霉素G莱克氯哒替米曲吡泰乐磺胺齐帕磺胺二甲氧嘧啶入磺胺二甲嘧啶>喹胺磺1-甲基-1，3-丙二胺素霉新生图1.牛肝样品的加标回收率数据：低浓度(10ng/g，以蓝色显示)和高浓度(100 ng/g，以红色显示)。 图2.LC-MS/MS色谱图显示该方法有效去除了牛肝提取物中95%以上的磷脂。 讨论 本研究中采用的步骤是我们综合了以前开发的方法12。整个方法的回收率平均大于70%，但一些强极性类化合物(如四环素类)的回收率较低。尽管单溶剂萃取步骤不可能对于所有目标化合物均有效，但是对于大多数回收率较低的化合物，其信号响应和重现性对于靶向筛查分析而言是可接受的。研究人员很有必要了解样品净化步骤对任何目标物的回收率损失的影响。图3所示的SPE回收率数据是牛肝样品经过溶剂萃取后，在SPE净化前进行加标后再过柱净化得到的。这些数据表明：对于大多数目标化合物， Oasis PRiME HLB净化小柱对回收率的影响很小。然而，对于伊维菌素、莫能菌素、莫昔克丁和新生霉素，萃取后净化确实会引起明显的回收率损失。有关这些分析物的更多信息将在以后的工作中予以介绍。 图3.样品经初步提取后， 在Oasis PRiME HLB通过式净化前加标后再过柱得到的兽药化合物回收率。 结论 本研究开发了一种简单且有效的萃取/蛋白质沉淀方案，适用于牛肝组织中多兽药的筛查分析。 采用Oasis PRiME HLB小柱的简单通过式净化方案能够去除初步提取液中90%以上的脂肪和磷脂。 通过本文的样品制备方法得到的净化液因不含颗粒，故在LC-MS分析前无需进行过滤操作。 使用简单的Oasis PRiME HLB小柱的一步通过式净化方案，多种兽药均表现出一致的回收率。 ( 参考文献 ) 2.S. Lehotay，"High-Throughput Screening Analysis by UHPLC-MS/MS of>60 Veterinary Drugs in Animal Tissues"， 125th AOAC Annual Meeting，Presentation 2303， 21 September， 2011. 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 Waters 北京：010-52093866 上海：021-61562666 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 广州：020-28296555 成都：028-67653588 香港：852-29641800 Waters、The Science of What’s Possible、ACQUITY UPLC、MassLynx、Xevo和Oasis是沃特世公司的注册商标。CSH是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 2017年沃特世公司。中国印刷。2017年3月720005887ZH AG-PDF 免费售后服务热线：800(400) 820 2676www.waters.com 使用Oasis PRiME HLB小柱快速有效地去除QuEChERS菠菜提取物中的叶绿素 Michael S. Young和Jeremy C. Shia 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 研究目的 在GC-MS/MS分析之前，通过简单、快速且有效的净化方案去除QuEChERS提取物中的叶绿素。 展示OasisPRiME HLB Plus短柱和Plus轻型小柱的灵活性，分析人员既可以使用也可以不使用真空(负压)或正压萃取装置来处理样品。 背景 QuEChERS方法能够高效提取水果和蔬菜中的各种农药。完成初步QuEChERS提取之后，通常先对样品进行分散固相萃取(dSPE)净化，然后进行色谱分析。将多种吸附剂的组合分散到一份基于乙腈的提取物中，从而选择性地去除潜在干扰物质。在许多蔬菜中都存在的干扰物质中，叶绿素对气相色谱尤其不利；仅几次进样含有高浓度叶绿素的提取物就会严重污染进样口和色谱柱头。 Oasis PRiME HLB小柱可快速去除余QuEChERS提取之后的菠菜样品中的叶绿素。本技术简报应用了Vac和Plus型的Oasis PRiME HLB小柱。 图1.UPLC-PDA色谱图，显示了三种净化方案对菠菜提取物中色素的去除效果。 最常用于去除叶绿素的吸附剂是石墨化碳黑(GCB)。尽管GCB可有效去除叶绿素，但它可能导致某些农药的回收率降低，尤其是具有平面几何结构的农药化合物。因此，我们需要能够替代GCB的方案。 解决方案 采用Oasis PRiME HLB小柱的通过式净化方案可有效取代采用GCB的dSPE方案，而且不会损失平面结构的农药化合物。 测试目标化合物。在之前的研究中1，我们使用OasisPRiME HLB小柱净化样品，各种农药都获得了良好的回收率。这些农药中有三种平面结构的农药化合物常用于高叶绿素含量的产品，分别是嘧菌环胺、百菌清和噻菌灵。本研究选用这三种化合物，以50 pg/kg(ppb)的浓度将其加标至菠菜样品中。 QuEChERS提取。菠菜购于当地食品杂货店。称取15g 匀浆样品至50mL离心管中，并加入测试目标化合物。加入15mL乙酸/乙腈(1：99)溶液，用手振摇样品1 min。然后加入QuEChERS盐(用于AOAC QuEChERS方法的DisQuE 提取盐包，部件号186006812)，用手大力振摇离心管1 min。在3200 rcf下离心5 min，分别取部分上清液通过以下两种技术进行净化： dSPE净化和采用OasisPRiMEHLB小柱的通过式净化。 分散固相萃取净化(dSPE)。称取150mg无水硫酸钠、50mg硅胶C18、50 mg PSA(硅基伯胺-仲胺)以及50 mgGCB， 装入2mL离心管中。称取相同的吸附剂制备第二个2mL离心管，但此次GCB只称取10 mg.每个离心管中加入1mL上清液，用手振摇1 min。在13500 rcf/min下离心1 min， 取一部分样品到自动进器器样品瓶中以待APGC-MS分析。另取一部分样品(100pL)至单独的样品瓶中，用400pL水稀释后用于UPLC-MS分析。 SPE净化(使用Oasis PRiME HLB Vac型小柱)。将Oasis PRiME HLB小柱(3cc，150mg)安装到预先清洁过且设置为最小真空度(大约2psi)的真空萃取装置上。无需执行小柱活化步骤。取0.8mL上清液，使其通过Oasis PRiME HLB小柱并弃去滤液。然后再取1.5mL上清液，再次通过小柱并收集滤液。 然后采用与dSPE方案相同的方法，分别取样进行APGS-MS和UPLC-MS分析。 ( SPE净化 (使用Oasis PRiME HLB Plus型小柱)。无需 执行小柱活化步骤。将3mL注射器连接到用于净化的Oasis PRiME HLB Plus轻型小柱上。取0.7mL上清液， 使其通过Oasis PRiME HLB小柱并弃去滤液。然后再取 0.8mL上清液，再次通过小柱并收集滤液。使用6mL注射器采用Plus短柱型小柱执行类似操作。取2mL上清液，使其通过Oasis PRiME小柱并弃去滤液。然后再取3mL上清液，再次通过小柱并收集滤液。然后采用与dSPE方案相同的方法制备用于APGS-MS和UPLC-MS分析的样品。 ) 图2.APGC-MS/MS离子色谱图显示，与采用石墨化碳黑的dSPE净化方案相比，使用Oasis PRiME HLB小柱净化样品后，平面结构的农药嘧菌环胺和百菌清的回收率得以改善。 图3.UPLC-MS/MS离子色谱图显示，与采用石墨化碳黑的dSPE净化方案相比，使用Oasis PRiME HLB小柱净化样品后，平面结构的农药噻菌灵的回收率得以改善。 仪器分析 使用UPLC与光电二极管阵列检测器(PDA)联用的系统监测提取物中叶绿素的去除情况。使用APGC-MS/MS测定嘧菌环胺和百菌清的含量，并使用UPLC-MS/MS测定噻菌灵的含量。 实验结果 三种净化方法均可有效去除QuEChERS菠菜提取物中的大部分叶绿素和胡萝卜素。相较于采用10 mg GCB进行的dSPE净化，采用Oasis PRiME HLB小柱进行的通过式净化在去除叶绿素方面略胜一筹。每毫升QuEChERS提取液使用50 mg GCB的dSPE净化是唯一有效去除提取液中所有色素的净化方案。然而，我们观察到采用50 mg GCB的dSPE净化方案损失了大量平面结构的农药化合物。相比之下，采用Oasis PRiME HLB的净化方案或每毫升提取物使用10mg GCB的dSPE净化方案对三种平面结构农药化合物极少或根本没有回收率损失。图1所示的UPLC-PDA色谱图显示了三种净化方案去除色素的效果。图2所示的APGC-MS/MS离子色谱图显示了嘧菌环胺和百菌清的回收收损失。图3所示的UPLC-MS/MS离子色谱图显示了噻菌灵的回收率损失。 Oasis PRiME HLB小柱有多种尺寸和规格。“Vac”型小柱与真空/正压萃取装置配合使用最为便捷，“Plus”型小柱则既适合与注射器(类似于注射式过滤器)配合使用，也适合与真空/正压萃取装置配合使用。分析人员可根据所需的提取物量来选择小柱尺寸。图4说明了三种小柱尺寸的选择；三种小柱在总体色素去除效果或农药回收率方面未观察到任何差异。 结论 采用QuEChERS方法提取菠菜样品时，大量叶绿素和其它色素会随着目标农药一起被提取出来。 使用Oasis PRiME HLB小柱进行通过式净化可有效去除QuEChERS提取物中99%以上的叶绿素和95%以上的叶黄素。 采用10 mg GCB(针对每毫升提取物)的dSPE净化方案对QuEChERS提取物中叶绿素和叶黄素的去除效果不及OasisPRiME HLB小柱。 采用50 mg GCB(针对每毫升提取物)的dSPE净化方案可去除QuEChERS提取物中的所有色素，但观察到平面结构的农药损失明显。 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、 The Science of What’s Possible、ACQUITY、UPLC、CORTECS、Xevo、MassLynx和Oasis是沃特世公司的注册商标。DisQuE和BEH是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 @2017年沃特世公司。中国印刷。2017年4月 720005994ZH KP-PDF 图4.Oasis PRiME HLB Plus型小柱与传统Vac型小柱的净化效果相当。 ( 参考文献 ) ( 1. Oasis PRiME HLB Cartridge for Rapid and E ffective Cleanup of Avocado，A High Fat Matrix，Prior to APGC-MS/ MS Analysis， Waters Application Note 7 20005816 EN ， 2016. ) 备注 www.waters.com/prime Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters、The Science of What’s Possible、ACQUITY UPLC、MassLynx、UPLC、Oasis、CORTECS和Xevo是沃特世公司的注册商标。TruView、DisQuE、Quanpedia和CSH是沃特世公司的商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 C2017年沃特世公司。中国印刷。2017年3月7720005932ZH KP-SIG 介 目录 本文集汇集了相关应用纪要，展示如何利用Oasis PRiME HLB净化棘手的食品样品，进而提高结果准确性、延长系统正常运行时间以及改善方法稳定性。