奶制品中黄曲霉毒素检测方案(液相色谱仪)

科捷仪器KEJIEINSTRUMENT电话：139-5161-2855网址： www.kj17.com 对固相萃取-高效液相色谱荧光法测定液态奶制品中的黄曲霉毒素M和B* 黄曲霉毒素(AFT)主要是由黄曲霉和寄生曲霉等产生的天然次生代谢产物，，日前已分离鉴定的黄曲霉毒素达20多种，主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M和Mz等。饲料的主要原料是玉米、豆粕等，它们易受到黄曲霉毒素的污染，而奶牛吃了被黄曲霉毒素B污染的饲料，在体内黄曲霉毒素B转化成Mi，进而污染产出的牛奶。由于黄曲霉毒素具有致癌、致畸及致基因突变等危害其中以B毒性最强，世界各国纷纷制定食品及奶制品中黄曲霉毒素的卫生限量标准加以控制。我国规定人类消费的乳及乳制品中黄曲霉毒素M含量不能超过0.5ng/kg， 婴幼儿配方及辅助食品中黄曲霉毒素B含量不能超过 0.5 ug/kg。由于儿童和老人是牛奶消费的重要人群，因此加强对黄霉毒素M和B的检测，对于保护人类健康具有重要意义。 牛奶样品基质复杂，黄曲霉毒素残留很低，因此在仪器分析前采用合适的样品前处理技术对黄曲霉毒素进行净化和富集是非常有必要的。常见的黄曲霉毒素分析中的前处理方法有液液萃取法、固相萃取、凝胶绳头色谱以及免疫亲和柱净化法。最初采用的前处理方法是液液萃取技术，通过黄曲霉毒素在不同极性溶剂中溶解度的差异进行富集；然而该方法有机溶剂消耗大，步骤繁琐。凝胶渗透色谱技术需要配备凝胶色谱仪，溶剂消耗大，成本较高，环境不友好。日前，同时测定乳和乳制品中的黄曲霉毒素M和B残留，国家标准(GB/T 5009.23-2006、GB/T 23212-2008)都是采用免疫亲和柱净化。免疫亲和柱利用抗原-抗体的特异性相互作用，可以去除样品中杂志的干扰，具有很好的萃取选择性。然而，免疫亲和萃取柱价格昂贵，稳定性较差，因此开发稳定性好、价格合理、萃取效率高的固相萃取方法用于黄曲霉毒素的分析具有重要的意义。 日前，关于奶制品中黄曲霉毒素检测的方法主要有波层色谱法(TLC)、酶联免疫吸附法 (ELISA)、液相色谱荧光法、液相色谱串联质质法(LC-MS/MS)、微柱筛选法、荧光光度法、电化学免疫传感器、放射免疫法、免疫胶体金法和化学发光法等。其中， TLC 的预处理和测定步骤均较复杂、提取液杂质较多，灵敏度差，且不能准确定量； ELISA 法只能测定黄曲霉毒素的总量，且易出现假阳性； LC-MS/MS 所需仪器设备昂贵，对人员的操作技术要求高；微柱筛选法、荧光光度法、电化学免疫传感器、放射免疫法、免疫胶体金法和化学发光法普及率低。而液相色谱荧光检测法由于灵敏度高、分离度好、前处理简单、定量准确等优点，成为近年来应用最广泛的黄曲霉毒素检测方法。此外，在荧光检测中结合柱后光化学衍生可以增强黄曲霉毒素的荧光强度，不需要配备衍生液和柱后衍生系统，从而排除了衍生液对系统特别是检测器的污染，成为近年来广泛应用的检测技术。 仪器准备 LC-600A 智能全控液相色谱系统由 P600高压恒流泵与 UV600 紫外检测器直接构成等度分析系统。使用 WS600 工作站可以同时控制数台 P600 高压恒流泵、UV600 紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。 广泛应用于化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析 传真：025-83738955 南京科捷分析仪器有限公司 QQ：2326515893 样品处理： 称取5.0g样品于50ml离心管中，加入20ml 乙、10ml水喝10ml正己烷。旋涡混合 2min， 超声提取20min， 加入6g氯化钠，涡旋混合2min， 干6000r/min 下离心 10min， 收集10ml乙腈层，在30℃下用减压蒸干，然后加入2.5ml二氯甲烷，我选混合2min， 待净化。 色谱条件： 进样量 20u1 柱温 40℃ 流量 0.8ml/min 谱图分析： 1 黄曲霉毒素标准溶液M，和B[a、空白牛奶样品(b(以及加标 0.5 pgikg 的黄山毒素标准溶液M，和B，的空白牛奶样品(c(的色谱图 传真：025-83738955南京科捷分析仪器有限公司 QQ：2326515893