豆制品及蛋制品中营养成分检测方案

Guaranteed Product Quality Agela Technologies 鸡蛋中三聚氰胺的检测 HPLC法 应用编号：AF10048 4.实验结果： 4.1峰型与分离度 1.三聚氰胺标准溶液配制 称取三聚氰胺标样10.0 mg， 加流动相溶解定容至100mL，即得浓度为 100 mg/L 的三聚氰胺标样溶液。将浓度为100 mg/L 的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、15 mg/L、20 mg/L 的标准品溶液，用0.45 um 滤膜过滤后进液相色谱检测。 2.样品提取 将鸡蛋打开搅匀，分别称取1.00g鸡蛋样本置于10mL具塞离心管中，分别加入100 mg/L 三聚氰胺标样溶液10 uL、20 pL、100 uL，分别得到添加浓度为 1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、10.0 mg/kg 的样本。往装有上述样本的具塞离心管中分别加入10 mL 1%三氯乙酸溶液，2mL 5%醋酸铅溶液，摇匀，超声20 min， 8000 rpm 离心 10 min， 全部上清液转入固相萃取仪上样管中。 CleanertPCX 混合型阳离子交换固相萃取柱，标记序号依次放入Qdaura 卓睿全自动固相萃取仪中，上样管中放置对应样品，设定操作程序如下：3mL甲醇，3mL水依次活化，加样，3mL水，3mL甲醇淋洗，抽干，最后用5mL5%的氨化甲醇洗脱 (V/V)，接收洗脱液(以上操作流速均为1mL/min)， 取出收集管于50℃氮气吹干，用1mL流动相定容， 0.45 um 滤器过滤后进液相色谱检测。 3.色谱条件： 色谱柱： Venusil ASB C8， 4.6×250mm， 5 um； 流动相：乙腈：10 mM/L柠檬酸+10 mM/L 庚烷磺酸钠缓冲液=7： 93(pH=3.0) 波长：240nm；流进 速：1mL/min： 分别移取浓度为 1.0 mg/L、5.0 mg/L的三聚氰胺标准溶液，分别连续进样6次，结果如表1所示。 由表1结果可见，本方法具有很好的精密度和重现性。 图1鸡蛋空白样品和鸡蛋添加 10ppm 的样品图谱 表1保留时间与峰面积的稳定性数据 浓度mg/mL 指标 1# 2# 3# 4# 5# 6# 平均值 RSD% 1.0 保留时间(min) 18.830 18.829 18.829 18.838 18.840 18.834 18.833 0.026 峰面积 89 81 84 88 84 80 84 4.286 5.0 保留时间(min) 18.949 18.952 18.947 18.949 18.950 18.946 18.949 0.011 峰面积 423 440 438 439 437 438 436 1.461 4.2标准校正曲线 根据表2数据计算线性方程为： y=87.43x-13.67，R²=0.999，相关曲线见图2。 结果显示，该方法在1~20 mg/kg 范围内线性关系良好。 表2标准校正曲线实验数据 浓度 mg/kg 峰面积 第1次进样 峰面积 第2次进样 峰面积 均值 1.0 89 79 84 5.0 423 440 431 10.0 832 844 838 15.0 1265 1299 1282 20.0 1689 1823 1756 图2浓度与峰面积的回归曲线 结果显示，该方法在1~20mg/kg范围内线性关系良好。 6.订货信息 产品名称 规格包装 订货号 三聚氰胺标准品(≥99.0%) 100 g/pk SJ-SJQA-100 庚烷磺酸钠(色谱级) 25g ION-Q7-25 LC-10F 高效液相色谱仪 10 mL/min，梯度系统，200-800nm 双波长检测器 FL-LC010GS CC-100分析型色谱柱温箱 温控范围：5~70℃；可安装1-2支300mm色谱柱 CC-100 Qdaura"卓睿全自动固相萃取仪 4通道24位 SPE-40 CleanertPCx 60 mg/3mL， 50/pk CX0603 VenusilASB C8 液相色谱柱 4.6×250mm， 5 um VS852505-0 针式过滤器(Nylon) 0.45 um， 直径13 mm， 200/pk AS021345 -次性无针头注射器 5 mL， 100/pk ZSQ-5ML 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写32×11.6 mm， 100/pk 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫， 45. Shore A 1.0mm， 100/pk 0915-1819 甲醇 4×4L/瓶 AH230-4 4.3添加回收率 由表3可见，本方法检测鸡蛋中三聚氰胺回收率较好 表3添加浓度与回收率数据 添加浓度 (mg/kg) 峰面积 计算含量 回收率(%) 1.0 19.9 1.158892 115.89 1.0 21.0 1.214532 121.45 2.0 41.7 2.261587 113.08 2.0 40.8 2.216062 110.80 10.0 188.8 9.702247 97.02 10.0 219.6 11.26018 112.60 5.结论 通过上述实验可见，运用本方法测定鸡蛋中三聚氰胺，基质净化效果好，杂质干扰小，色谱峰型良好对称度高，操作简单方便，和准确度高等优点，非常适用于鸡蛋中三聚氰胺的检测。 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载! www.agela.com.cn—