尿素同位素中丰度检测方案(气相色谱仪)

2 赛默飞世尔 GCMS测定1C-尿素同位素丰度方法 秦玉荣 余天梁立娜赛默飞世尔科技(中国)有限公司 1.引言 近年来研究证实：幽门螺杆菌可致溃疡病、胃炎以及胃癌。胃病患者胃粘膜的幽门螺杆菌检出率高达59%~77%。实验证明：患者口腔中存在着大量的幽门螺杆菌，可以通过唾液或飞沫感染他人。因此，检测体内幽门螺旋杆菌感染情况，可以有效地诊断与预防胃溃疡、慢性胃炎、胃癌的发生。 C-尿素呼气试验(C-UBT)是特异性诊断人体内幽门螺旋杆菌(Hp)感染的一种无创性方法，此法为1982年美国 DY Graham 和 Klein 博士首创，具有高效、灵敏度高、使用安全等特点，被认为是除组织培养以外的诊断Hp的“金标准”，是目前临床检查 Hp 感染和根除治疗后疗效观察的最佳方法，其敏感度和特异度均可达到90%以上。临床上，预先给病人服用13C标记的尿素片，因为Hp细菌内有尿素酶，当它在胃内遇到吞下的C-尿素，就会把它分解成13CO2，后经胃肠道吸收经血液循环到达肺后随呼气排出并被检测时，就可准确地诊断是否 Hp感染。因此，试验中1C-尿素的丰度直接影响到诊断的结果。 有人用衍生化结合 GC-MS 方法对尿素进行检验，但衍生化步骤繁琐，且由于尿素的不稳定性易在衍生化过程中发生降解，不适合检测标准的建立。本文根据美国药典使用GC-MSB检测C尿素同位素丰度，建立了一种快速、高效的C-尿素同位素丰度检测方法。 2.实验材料 2.1仪器与试剂 2.1.1仪器 Trace 1310 GC气相色谱仪 (Thermo Fisher Scientific)； ISQ单四级杆质谱仪(Thermo Fisher Scientific)； Al/AS1310 自动进样器 (Thermo Scientific)； Trace TR-Wax GC 色谱柱(15mx0.25 mm×0.25pm) (Thermo Fisher scientific， P/N：260W130P 2.1.2试剂 甲醇色谱纯 2.1.3样品 C-尿素 (纯度≥99%) 2.2样品处理 参照美国药典，电取样品1C-尿素0.5mg，用1mL甲醇溶解，上机 GCMS 分析。 2.4仪器条件 进样参数 进样口温度200℃，进样体积1pL，分流模式， 分流比50：1 柱温 50℃， 15℃ /min 到200℃ (5min) 质谱参数 离子源El，温度300℃，传输线温度240℃ 全扫描(FS)和选择离子扫描(SIM)， FS范围： 30-350， SIM： 60，61，62，63 载气类型及流速 氦气(纯度≥99.999%)，恒流模式， 1.5mL/min 3结果与讨论 3.1采用上述仪器方法对样品进行分析，色谱图见图1，选择离子扫描色谱图对应的质谱图见图2。 RT： 4.00-15.09 图1.(上)全扫描色谱图(下)选择离子扫描色谱图 图2.(上)选择离子扫描色谱图(中)质谱图(下)各特征离子的响应强度 参照美国药典丰度计算公式： 3.2采用上述仪器方法对该样品连续进样6次，叠加色谱图见图3，13C-尿素丰度的重复性结果见表1。 图3.样品连续进样6次的叠加色谱图 表1 样品 丰度 RSD C13-1 99.13% 0.008% C13-2 99.13% C13-3 99.14% C13-4 99.13% C13-5 99.13% C13-6 99.15% 4.总结 本文采用 ThermoFisher GC/MS ISQ分析℃-尿素同位素丰度，以 TR-WAX 色谱柱进行分离，建立了一种快速、高效的13C-尿素同位素丰度检测方法，且重复性很好 (RSD=0.008%)，为医学上检测幽门螺杆菌预防与诊断胃溃疡、胃炎、胃癌提供了非常好的手手。 ( [1]王世真，分子核医学.第二版，北京：中国协和医科大学出版社，2004，516-517. ) ( [2] GRAHAM D Y，KLEIN P D，EVANA D J，et al， Campylobacter pylori detected noni n vasively by t h e 1 3C- u rea breath test.Lancet，1987，1：1174-1177. ) ( [3] USP 26 Revision， United States Phamacopecial C o nvention， Inc，2003，336-337 ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：800810 5118400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherSCIENTIFIC AN_C_GCMS-