头孢羟氨苄中含量及有关物质检测方案(制备液相色谱)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 头孢羟氨苄分析报告 AP10067 应用及技术服务部 摘要：本实验按照头孢羟氨苄2015版中国药典方法进行，选择 Innoval AQ C18 (5 um，100A，4.6×150mm) 柱对样品进行测定，同时进一步考察了该色谱柱用于头孢羟氨苄分离度溶液、含量和有关物质等项测试的结果，并初步考察了色谱柱的使用寿命。结果表明 Innoval AQC18 基本适用于头孢羟氨苄的分析：(1)在含量测定分离度溶液中， Innoval AQ C18 对主峰前杂质峰的分离度为24.06，符合标准要求；(2)在有关物质分离度溶液中， Innoval AQ C18对主峰前主要杂质峰的分离度分别为12.37和24.72，符合标准要求；(3)含量测定中，头孢羟氨苄保留时间8.833分钟，柱效6916，拖尾因子0.965，符合标准要求；(4)有关物质测定中共检出4个杂质，分离度均符合标准要求；(5)用于头孢羟氨苄含量测试时，连续进样350针，保留时间、柱效和拖尾因子均无显著变化，表明 Innoval AQ C18 对该样品和流动相有较好耐受性。 关键词：头孢羟氨苄； Innoval AQ C18；2015版药典；液相色谱法 前言 头孢羟氨苄为中国药典2015版二部收录品种，本实验按照该标准进行测试，通过测试得出 Innoval AQ C18 适用于头孢羟氨苄分析，其测试结果令人满意。 表1.头孢羟氨苄样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 (CAS 编号 HO C OH 头孢羟氨苄 Cefadroxil O N CH， ·H0 C16H17N3O5S，H2O 381.41 50370-12-2 HN H H H 实验部分 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 仪器、试剂与材料 试剂材料 超纯水、、日甲醇、磷酸二氢钾、氢氧化钾、无水磷酸氢二钠、磷酸 色谱柱： Innoval AQC18；5 um， 100A，， 4.6×150mm 样品制备 含量测定供试品溶液的制备：：取本品适量，精密称定，加流动相A溶解并定量稀释制成每1ml中含0.3 mg的溶液； 有关物质供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，加流动相A 溶解并定量稀释制成每1ml中含1mg的溶液； 对照品溶液(1)的制备：精密称取α-对羟基苯甘氨酸对照品约 10 mg，置 10 ml量瓶中，加流动相A适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀； 对照品溶液(2)的制备：精密称取7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品约10mg， 置10 ml量瓶中，加 pH7.0磷酸盐缓冲盐(取无水磷酸氢二钠 28.4 g，加水800ml使溶解，用30%磷酸调节pH值至7.0，用水稀释至1000 ml混匀)适量超声使溶解，摇匀； 杂质对照品溶液：精密量取对照品溶液(1)和对照品溶液(2)各1ml，置100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀； 含量测定分离度溶液的制备：取头孢羟氨苄对照品和7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸对照品各适量，加 pH7.0磷酸盐缓冲盐适量超声使溶解，再用流动相A 溶液稀释制制每1ml中约含头孢羟氨苄 0.3 mg 与7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸0.1mg的混合溶液； 有关物质分离度溶液的制备：取杂质对照品溶液与供试品溶液按照9：1混合，摇匀。 色谱条件 含量测定色谱条件 色谱柱： Innoval AQ C18， 5 um， 100A，，4.6×150mm： 流动相：0.02 mol/L的磷酸二氢钾溶液(1 mol/L 氢氧化钾调 pH至5.0)-甲醇(98：2)，，等度洗脱； ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email：s er v ice@a g e l a. com .c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 检测波长：230nm； 柱 温：30℃； 进样量：10pL； 流 速束：：1.0 m1/min 有关物质测定色谱条件 色谱柱： Innoval AQ C18，5 um，100A，4，4.6×150 mm： 流动相：流动相A： 0.02 mol/L 的磷酸二氢钾溶液(1 mol/L 氢氧化钾调pH至5.0)； 流动相B：甲醇，梯度洗脱； 检测波长：：220nm： 柱 温：30C； 进样样：20uL； 流 速：1.0 ml/min 表2.梯度洗脱条件 时间(min) 流动相A(%) 流动相 B(%) 0 98 2 1 98 2 25 70 30 28 98 2 40 98 2 结果与讨论 系统适用性测定 系统适应性测定图谱 ( Email：s er v ice@a g e l a. com .c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 图1.空白(流动相A)测定图谱 保留时间 k 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性 [min] 「mU*s1 [maU] 因子 [min] --1- --- -- --1-- -1-----1-- -----= --1- ------- -1-----1· 3.080 483.54410 94.05511 0.87 0.0767 8942 9.086 5549.77734 389.87326 1.27 0.2167 9742 22 24.06 2.95 图2.含量分离度溶液测定图谱 ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 1.590 - 1.22682e4 2564.57642 0.82 0.0744 2528 3.287 - 351.38391 60.12928 0.78 0.0867 797012.37 2.07 7.705 - 1.18514e4 1475.99109 1.17 0.1233 2162324.72 2.34 图3.有关物质分离度溶液测定图谱 系统适应性测定结果 表 3. Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄含量分离度溶液测定积分结果 名称 保留时间(min) 相对保留时间 RRT 分离度 7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸 3.080 0.339 头孢羟氨苄 9.086 1.000 24.06 表4. Innoval AQ C18用于头孢羟氨苄有关物质分离度溶液测定积分结果 名称 保留时间(min) 相对保留时间 RRT 分离度 a -对羟基苯甘氨酸 1.590 0.206 - 7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸 3.287 0.427 12.37 头孢羟氨苄 7.705 1.000 24.72 含量测定 含量测定图谱 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间[min] 「m.U*s1 [meU] 因子 min1- --- 18.833 - 5623.66016 340.69952 1e-3 0.2500 6916 图4. Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄含量测定图谱 含量测定实验结果 表 5. Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄含量测定积分结果 主峰名称 保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 头孢羟氨苄 8.833 6916 0.965 有关物质测定 有关物质样品测定图谱 mAU7 350 300250200150100·50 0· 8689 VWD1 A. Wavelength=220 nm (H：\头氨苄有关物质201407232014-07-23 19-39-20\有关物质测定0000007.D) 寸卜 35 min ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间 k 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性 「min1 「mU*s1 [mAU] 因子 [min] -1 一 -----一 - 1.587 - 9.24349 3.04662 0.98 0.0522 5114 - 5.398 - 63.42920 7.79524 0.75 0.1211 1100525.84 3.40 7.729 - 1.94181e4 2297.03125 1.34 0.1283 20094 10.98 1.43 11.778 - 466.29553 35.49590 0.45 0.1467 3572517.30 1.52 19.784 - 25.49612 2.27511 0.89 0.1717 7357829.55 1.68 图5. Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄有关物质测定图谱 有关物质样品测定实验结果 表 6.Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄有关物质测定积分结果 名称 保留时间/min 相对保留时间 RRT 分离度 a-对羟基苯甘氨酸 1.587 0.206 未知杂质1 5.398 0.698 25.84 头孢羟氨苄 7.729 1.000 10.98 未知杂质2 11.778 1.524 17.30 未知杂质3 19.784 2.560 29.55 色谱柱批次重现性验证结果 不同批次色谱柱测定图谱 k'minl 「mU*s1 [meU] 因子 [min] ---1------- ---1-- ----1-----|--------1-------1-----8.833 5623.66016 340.69952 1e-3 0.2500 6916 图6.第1批次色谱柱测定图谱 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 8.443 - 4164.14795 236.57965 1.04 0.2667 5554 一 图7.第2批次色谱柱测定图谱 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性[min] 「mU*s1 [mU] 因子 [min] 一 -- --8.764 - 5619.65234 345.84641 1.06 0.2483 6900 - 图8.第3批次色谱柱测定图谱 色谱柱批次重现性测试结果 表 7. Innoval AQ C18用于头孢羟氨苄批次重现性测试积分结果 批次 主峰保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 1 8.833 6916 0.965 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 2 8.443 5554 0.989 3 8.764 6900 0.961 色谱柱寿命测定结果 色谱柱寿命测试图谱 保留时间 峰面积 峰高 理论塔板数峰拖尾因子 7.543 775145 54029 6451 1.00 图9.第1针测定图谱 0 3 4 5 6 8 9 10 11 12 13 min 保留时间峰面积 峰高 理论塔板数峰拖尾因子 7.473 751222 52847 6448 1.00 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email：s er v ice@a g e l a. com .c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 图10.第50针测定图谱 保留时间峰面积 峰高 理论塔板数峰拖尾因子 7.362 763115 55065 6584 1.01 图11.第100针测定图谱 保留时间峰面积 峰高 理论塔板数峰拖尾因子 7.638 757364 50675 6095 1.00 图12.第200针测定图谱 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间峰面积 峰高 理论塔板数峰拖尾因子 7.657 745376 49443 6020 1.00 图13.第300针测定图谱 7.539 755722 51896 6254 1.00 图14.第350针测定图谱 色谱柱寿命测试结果 表 8. Innoval AQ C18用于头孢羟氨苄寿命测试结果 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. ag e l a.co m .c n 客服：400-606-8099 ) 博纳艾杰尔产品应用案例 进样针数 主峰保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 1 7.543 6451 1.00 50 7.473 6448 1.00 100 7.362 6584 1.01 200 7.638 6095 1.00 300 7.657 6020 1.00 350 7.539 6254 1.00 结论 本实验按照中国药典2015版标准，考察了 Innoval AQ C18 用于头孢羟氨苄检测的适用性，结果表明 Innoval AQ C18 色谱柱是适用于头孢羟氨苄分析，效果良好，能够满足检测要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Innoval AQ C18 5 um，100 A， 4.6x150 mm 1支 IA951505-0 保护柱套 适用于4.6×10mm 和2.1×10mm 1支 SH-100 Innoval AQ C18 直联式保护柱芯 5pm， 100A； 4.6×10mm 4/pk IA950105-0S 分析型色谱柱温箱 室温+5-50℃，箱内一对夹套 1个 CC-100 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/PK 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE隔垫45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 微孔滤膜 单膜， 13mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 甲醇 4L/瓶，色谱纯 4x4L/箱 AH230-4 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：