真空采血管中氟和乙二胺四乙酸检测方案(离子色谱仪)

Standard Curve of F免费服务热线：1800 810 5118400 650 5118(支持手机用户) 钟新林 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 氟离子，乙二胺四乙酸，草酸，真空采血管，电导检测，离子色谱 Keywords Fluoride， EDTA，oxalate， evacuated receptacle， conductivity detection， ionchromatography 目标 采用离子色谱抑制电导检测，建立一种简单、灵敏地测定真空采血管中氟离子、EDTA和草酸的方法，用于区分采血管的内容物类型和含量。 引言 真空采血管是利用生产时形成的真空采集血样的采血管。真空采血管有各种类型，根据其不同项目用途，其内添加物也不一致。含有氟化钠的采血管一般用灰色标签，其组成有氟化物/草酸盐、氟化物/肝素钠、氟化物/EDTA 等三种氟。氟化钠是一种弱效抗凝剂，其与其他抗凝剂配合使用时，可使血细胞代谢基本停滞，使血样长时间保持原始状态，抑制糖的分解，特别适用于血糖检测血样的保存。 试剂与标准品 去离子水(Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC，P/N： 50131948) 氟化钠( Fisher Scientific P/N S299-100 ) 0.05 M EDTA标准液(阿拉丁P/NE117545) 草酸钠( Fisher Scientific P/N S487-500) 医药行业标准YY 0314-2007《一次性使用人体静脉血样采集容器》中虽然规定了内容物的量，但并未规定测定方法。氟离子一般选用氟离子选择性电极法③，但氟离子选择性电极的稳定性较差，难以满足现代药典的需求。而草酸和EDTA定定常用的络合滴定法也不适用于测定此类样品中的含量。使用离子色谱，则可一次测定三种不同类型的采血管中的氟离子、草酸和EDTA的含量，并得出采血管内容物的分类。 标准溶液的制备 准确角取的0.221 g氟化钠和0.152 g草酸钠(精确到0.001g)， 分别定容到100mL，配制成浓度均为1.000 g/L的标准品储备液。取6.896 mL 0.05 mol/L EDTA标准滴定液稀释到100mL，成为1.000 g/L标准储备液。 取适量的氟离子、草酸和EDTA标准品储备液(1.000 g/L)，以水逐级稀释成浓度分别为2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0mg/L的混合标准工作溶液。 仪器 样品前处理 Thermo ScientificM ICS-600离子色谱系统，包括-等度泵 -电导检测器 样品：取一真空采血管，注入5 mL超纯水，漩涡震荡使内容物溶解，转移到100 mL容量瓶中，如此操作三次，合并洗涤液并定容到100 mL。过滤膜待测。 耗材 Thermo ScientificTM Target2TM Nylon Syringe Filters(0.45 um， 30 mm， P/N F2500-1) 一次性使用无菌注射器，1mL(上海双鸽实业有限公司) 实验条件 分析柱： lonPac AS22 分离柱，4x250 mm ( P/N 064141)保护柱： lonPac AG22保护柱，4mm x 50 mm(P/N 064139)淋洗液： 4.5 mmol/L Na，CO3+1.4 mmol/L NaHCOs流速： 1.2 mL/min定量环： 25 pL柱温： 30C检测器： 电导检测抑制器： 阴离子自动电解连续再生微膜抑制器ASRS300-4 mm ( P/N 064554)， 抑制电流50 mA 背压： 2000 psi 背景电导： 19.8 pS 结果与讨论 使用AS22柱，利用其亲水性，可以使EDTA较快出峰，通过NaHCO。的浓度，，可以调节流动相的PH值，从而改变EDTA的出峰时间，改善分离。同时AS22整体出峰时间较快，可以在18分钟内分离出所需检测的3种离子并且常见的离子对其没有干扰。如图1所示。 图1阴离子标准溶液色谱图.色谱峰：1-氟离子，2-氯离子，3-EDTA， 4-硝酸根离子，5-硫酸根离子，6-草酸 方法的线性范围、精密度、加标回收率和稳定性 以浓度(c， mg/L)为横坐标，以色谱峰面积(A，uSxmin)为纵坐标，绘制标准工作曲线，考察线性范围，如图2所示，结果见表1。 表1标准工作曲线、线性范围 被测离子 线性方程 线性相关系数 (R) 线性范围 (mg/L) F A=0.2684*C-0.0691 99.95 2.0-20 EDTA A=0.0272*C-0.0073 99.68 2.0-20 Oxalate A=0.0836*C-0.0181 99.95 2.0-20 Standard Curve of EDTA Standard Curve of Oxalate 图2氟离子、EDTA和草酸的标准工作曲线 配制9.0 mg/L的混标溶液。各取5份，样本号分别为1-1，1-2，1-3，1-4，1-5。测量数据记录于表2氟离子精度验证数据中，同时计算平均值，标准偏差和变异系数。 表2氟离子精度验证数据 样本号 峰面积(uSxmin) 测量值 (mg/L) 平均值(mg/L) 标准偏差 变异系数CV (%) 1-1 2.008 9.0590 8.8925 0.152 1.71% 1-2 1.930 8.7111 1-3 1.970 8.8884 1-4 1.944 8.7764 1-5 2.001 9.0277 取1支采血管，用超纯水多次洗涤内壁，合并洗涤液并最终定容到100 mL， 测出样品原始浓度。用此样品溶液分别配制加标浓度为7.5 mg/L、15 mg/L和22 mg/L的加标样品各3个，测出加标样品浓度。数据记录于表3氟离子回收率验证数据中，同时计算出各浓度的加标回收率及平均加标回收率。 表3氟离子回收率验证数据 样品号 原始样品值(mg/L) 理论加标值(mg/L) 测量值(mg/L) 回收率(%) 平均回收率(100%) 加标1-1 14.95 7.50 22.41 99.47 99.29 加标1-2 22.54 101.2 加标1-3 22.36 98.80 加标2-1 15.0 30.03 100.5 加标2-2 29.69 98.27 加标2-3 29.79 98.93 加标3-1 22.0 36.85 99.55 加标3-2 36.55 98.18 加标3-3 36.67 98.73 取1支取血管，用超纯水多次洗涤内壁，合并洗涤液并最终定容到100mL， 测出样品浓度。样品于室温(26℃)放置，于12小时、24小时、48小时、72小时后测试同一瓶样品的浓度，考察样品室温保存的稳定性。测试结果记录于表4稳定性验证数据，同时计算平均值和相对标准偏差。 表4稳定性验证数据 进样时间(小时) 峰面积(uS*min) 测量值 (mg/L) 平均值 (mg/L) 相对标准偏差(%) 0 3.198 14.33 14.42 0.39% 12 3.215 14.41 24 3.226 14.45 48 3.226 14.45 72 3.229 14.47 取采血管10支，样本号分别为2-1，2-2， 2-3， 2-4，2-5，2-6， 2-7， 2-8，2-9，2-10加水并定容于100 mL容量瓶，摇匀，作为测试样品待用(每支采血管为一份测试样品)。取测试样品，离子色谱方法进行检测。数据记录于表5样品氟离子含量检测数据，同时计算平均值，标准偏差。 采血管氟化钠含量计算公式：F×0.1×2.2 表5样品检测数据 样本号 峰面积 (uSxmin) 测量值 (mg/L) 氟化钠含量 mg/mL) 平均值 (IU/mL)| 标准偏差 备注 2-1 3.738 16.72 1.829 1.8376 0.007 某国内品牌 2-2 3.731 16.69 1.836 2-3 3.757 16.80 1.848 2-4 3.729 16.68 1.835 2-5 3.74 16.73 1.840 2-6 3.142 14.08 1.549 1.5312 0.059 某国外品牌 2-7 3.118 13.98 1.538 2-8 2.896 12.99 1.429 2-9 3.174 14.22 1.564 2-10 3.198 14.33 1.576 本文采用采用离子色谱方法抑制电导检测，简单灵敏地测定出真空采血管中氟离子、EDTA和草酸根的含量。方法操作简单便捷，且重现性好，回收率高，适用于此类样品分析。 含肝素钠的样品会污染柱子，当柱效降低时，建议用高氯酸钠冲洗柱子。 ( [1] YY 0314-2007《一次性使用人体静脉血样采集 容器》。 ) ( [2]曾平，刘虹，刘运双。真空采血管内添加物对 常见生化项目测定结果的影响。四川医学，2010，31 (7) ， 993-995。 ) ( [3]WS/T89-1996 尿中氟化物的测定离子选择电极法。 )