考来维仑中有机胺杂质检测方案(离子色谱仪)

连续进样5针，其峰面积 RSD 小于4%，精密度良好。(.(见表2) 引言 高脂血症与心脑血管疾病的发生直接相关，是动脉粥样硬化的主要发病因素，是心脑血管疾病临床监控的重要指标之一。临床常用的血脂调节药主要有他汀类、贝特类、烟酸类、胆酸螯合剂类，考来维仑是新型的胆酸螯合剂，它主要与胆酸结合，造成胆酸耗竭，促进胆固醇转化为胆酸，降低胆固醇。考来维仑用于降血脂、降血糖疗效明显，且因副作用低，在临床上具有广泛的应用。考来维仑由美国健赞公司申请专利，2014年4月专利到期，是近几年新药仿制的新宠。 有机胺的测定有顶空气相色谱法和液相离子对法，但因为考来维仑中的杂质是有机烷胺，是饱和氮杂环，碱性强，因此两种方式分离结果都不好，且灵敏度无法满足要求。在酸性条件下有机胺类可以形成阳离子，并在离子交换色谱柱中以离子交换方式被分离，分离后进入抑制器以抑制电导方式被检测测。 仪器Thermo Scientific DionexMICS-5000*离子色谱系统，包括等度泵，四元梯度泵 -电导检测器 耗材 Thermo ScientificM Target2"MNylon Syringe Filters (0.45 pm，30mm， P/N F2500-1) 一次性使用无菌注射器，1mL(上海双鸽实业有限公司) 附录：8种有机胺的结构 标准溶液的制备 流速： 1.0mL/min 准确称取有机胺标准品，用甲基磺酸乙腈溶液(20mMMSA一乙腈=60：40)定容到适当体积，配制标准品储备液。以甲基磺酸乙腈溶液 (20mM MSA一乙腈=60：40)逐级稀释成不同浓度的标准工作溶液。 定量环： 25pL 柱温： 30℃ 检测器： 电导检测 样品前处理 抑制器： 阴离子自动电解连续再生微膜抑制器CSRS300-4 mm (P/N 064556)，抑制电流59mA，外接水模式。 根据USP论坛中的方法，取本品约0.1g，精密称定，加水溶解并定容至10ml，搅搅30分钟，10000转离心10分钟，过 0.22um滤膜，弃去初滤液，续滤液进样分析。 背景电导：0.8pS 结果与讨论 分析柱： lonPac CS17 分离柱， 4x250 mm (P/N 060557) 保护柱： lonPac CG17 保护柱，4 mm x 50 mm (P/N 060560)淋洗液： MSA/乙腈梯度洗脱 A相：水 有机胺类均可在色谱柱中有保留。由于碳链较长，吸附和离子交换两种机理同时发挥作用。CS17柱比较适合用于分离有机胺。通过调整流动相，，可以在38分钟内分离出所需检测的8种有机胺类。由于非极性吸附作用，有机胺类的保留较强，与常见的阳离子对其没有干扰。色谱图如图1所示。 B相：50mMMSA C相：乙腈 时间/min A B C 0 62 10 28 3 62 10 28 14 52 20 28 28 20 40 40 33 20 40 40 33.1 62 10 28 38 62 10 28 图1.8种有机胺标准溶液色谱图 方法的线性范围、精密度、加标回收率 色谱峰面积(A)的平均值为纵坐标，在一定浓度范围内标准品依次进样，结果以浓度(c， mg/L)为横坐标，以 各有机胺类的线性关系良好，结果见表1。 表1.标准工作曲线、线性范围 Peak Name Cal.Type #Points Coeff.Det. Offset Slope 3 QOff 5 99.7207 -0.0944 0.1039 4 QOff 5 99.8551 -0.0166 0.0277 7 QOff 5 99.2498 -0.062 0.0561 1 QOff 3 100.0000 -0.0659 0.0048 2 QOff 5 99.7479 -0.0576 0.0500 9 QOff 5 99.8030 -0.0091 0.0232 5 QOff 4 99.4544 -0.0079 0.0009 8 QOff 5 99.8650 -0.008 0.0155 表2.精密度结果 序号样品 Height 3 Height 4 Height 7 Height 1 Height 2 Height 9 Height 5 Height 8 1 3.24 0.8276 2.2351 0.1638 2.0487 0.5832 0.1176 0.5439 2 3.2104 0.8152 2.2133 0.1674 2.039 0.5802 0.1176 0.5331 3 3.1819 0.8101 2.1705 0.1687 2.0099 0.5777 0.1159 0.5264 4 3.1585 0.7988 2.1698 0.168 2.0137 0.5621 0.11 0.5131 5 3.1468 0.7849 2.1398 0.1554 1.9822 0.5675 0.1186 0.5078 Ave 3.1875 0.8073 2.1857 0.1647 2.0187 0.5741 0.116 0.5249 RSD，% 1.20% 2.01% 1.74% 3.36% 1.30% 1.56% 2.97% 2.79% 加标回收率结果显示，部分有机胺类回收率小于90%，推测是由于吸附造成的。 表3.加标回收率结果 有机按 测得的量， mg/L 加标的量， mg/L 回收率，% 3 5.552 6.37 87.16 4 5.4101 5.94 91.08 7 7.6109 9.00 84.57 2 8.2026 8.30 98.83 9 5.5703 5.62 99.12 5 50.7347 45.79 110.80 8 6.7774 7.70 88.02 样品测定 根据USP论坛中的方法，取本品约0.1g，精密称定，加水溶解并定容至10ml，搅拌30分钟，10000转离心10分钟，过0.22 um滤膜，弃去初滤液，续滤液进样分析。样品谱图如下 本文采用采用离子色谱方法抑制电导检测，简单灵敏地测定出考来维仑中有机胺杂质的含量。方法操作简单便捷，且重现性好，回收率高，适用于此类样品分析。 流动相中有较高的乙腈，建议实验完成后用 MSA 冲洗色谱柱，用水冲洗抑制器。 ( Ⅰ . 李犁，杜晓红，张建瑞，等.调血脂药物的临床应用 现状与研究进展[J].基层医学论坛，2012，16(25)： 3360-62. ) ( 2. 叶明立，陈郁.离子交换电雾检测测定 CO2吸收液中 一乙醇胺、：二乙醇胺、N-甲基二 乙 醇胺[J]. 浙江 大学学报(理学版)，2011， 3 8(4) ： 433-435， 488. ) ( 3. USP Pending Monograph. Colesevelam. 2012USP. http：//www.usp.org /usp-nf /pending-monographs. ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) ThermoFisherSCIENTIFIC