食品中氨基甲酸乙酯检测方案(气质联用仪)

要获取全球办事处的完整列表，请访问http：//www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs版权所有 ◎2014， PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer@是PerkinElmer， Inc. 的注册商标。其他所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。012857_CHN_01 PKI 用 GC-MS 分析氨基甲酸乙酯 介绍 会自然产生，比如面包和酒类的生产中。尿素和乙醇反应后就会产生氨基甲酸乙酯。还有在用酵母和/或乳酸菌作为催化剂对氨基酸降解生产尿素的过程中，如精氨酸和瓜氨酸。这个反应是发生在尿素(由存在于葡萄皮中得精氨酸催化降解产生)和发酵产生的乙醇之间的。尿素的另外一个来源是瓜氨酸和酒类生产中产生的乳酸菌反应。给动物注射氨基甲酸乙酯已经被证明可以致癌，其已经被划入2A类致癌物，即对人体有致癌可能性。美国食品药品监督管理局(FDA)和欧洲食品安全局(EFSA))都报道了各种食品中氨基甲酸乙酯的存在，并提出了指导方案和最大允许限值， FDA 建议限制有机氮肥料的吏用以控制自然来源的氨基甲酸乙酯。EFSA 的报道披露了在坚果酒和非坚果酒类中氨基甲酸乙酯的产生细节，并且报道了有95%的坚果酒中的氨基甲酸乙酯低于推荐限值1mg/L，而所有非坚果酒都低于这个限值。 氨基甲酸乙酯在食物发酵的过程中 评价机构还建议采取措施来减少形成氨基甲酸乙酯，如减少加热、光照和制成品的储存时间。 本次实验的方法是参考 AOAC 标准944.0，采用气质联用来检测。方法采用氨基甲酸丙酯作为内标物来校正氨基甲酸乙酯。作为试验的一部分，氨基甲酸丁酯作为另一个内标物来试验。 实验 采用 Perkinelmer 的 Clarus 580 GC对氨基甲酸乙酯进行分离， Clarus SQ8 MS作为检测器，通过Waters@Empower3 软件进行控制。通过对单个标准物质的分析用 WatersEmpower3制作一个专门的 MS 谱库。MS试验采用 SIFI (选择离子全扫描)模式以同时获得 Scan 模式和 SIM 模式的数据。全扫模式 (Scan)数据提供的质谱信息通过谱库匹配来定性，选择离子 (SIM)模式数据用于定量。 本试验采用的 GC 和 MS 的方法和参数见表1和表2。图1显示的是用 WatersEmpower3软件编辑有的三个数据通道的MS 方法。图2显示的是数据通道的参数设置。这一些列的参数设置可以一次性得到三个通道的数据。 Table 1. GC method parameters. Gas Chromatograph Clarus 580 GC Column Elite-35(30 mx 0.25 mmx0.25um) Injector Type Programmable Split Splitless Injector Temperature 180°C Injector Liner 2 mm i.d. glass (no glass wool) Carrier Gas Helium @ 0.8 mL/min Pressure Pulse Injection3 mL/min. Split Flow No Split GC Oven Program Temperature Rate Set Point Hold Time 40°C 0.75 20°C/min. 60°C 0 3°C/min. 150°C 0 45°C/min. 220°C 8.7 Table 2. Mass Spectrometer method parameters. Mass Range Clarus SQ 8 S MS Spectrometer Dwell Time Inter Channel SIR Channels m/z (seconds) Delay (seconds) 62 0.100 0.02 74 0.100 0.02 89 0.100 0.02 HS110 420 42.01 Mass 50to 300El+ Mass 62.ElE+ Clarus 580 Clarus SQ8 SIRSIR 2002.00 4201 Mass 74.El+ R 200 42.0 Msss89.El+ Figure 1. Mass spectrometer channels created in Waters" Empower3. Method Set Data Channels2： SIR 62.00 Ch13： SIR 74.00 Ch1A 4： SIR 89.00 Ch1Derived ChannelsTIC 国 Channel Name Processing Method Report Method 1 2： SIR 62.00 Ch1 Mass 62 carbamates 2 3： SIR 74.00 Ch1 Mass 74 carbamates 3 4： SIR 89.00 Ch1 Mass 89 carbamates 4 TIC Default Figure 2. WatersEmpower3 Method set. 氨基甲酸乙酯标准曲线用二氯甲烷配置，浓度分别是100，200，400 和800ng/ml，内标物氨基甲酸丁酯的浓度为 400ng/ml。通过标准曲线的试验得到样品的灵敏度和标准校正曲线。 结果 图3显示的是800ppb浓度的氨基甲酸乙酯三个离子(m/z 62、74、89)的 SIM 结果。 Figure 3. Representative 800 ppb standard ofethyl carbamate analyzed for threedifferentions. 100ppb 浓度的氨基甲酸乙酯的信噪比 (S/N)可以达到249：1。图4显示的是良好的线性结果(r=0.998) Figure 4. Calibration curve ofethyl carbamate(r²0.998). 图5是显示的匹配参数的设置。采用了保留时间预筛选。保留时间的塞选窗口可以根据试验的需要进行放大和缩小，以提高定性的准确度和效率。 图6显示的是离子碎片与标准谱库的匹配度 (PBM)达到了94%，具有极高的匹配度。 Figure S. MS Match Parameters with Retention Time Presearch selected foradditional result qualifying. The PBM threshold will further limit returns to onlythose that match greater than 50%. Figure 6. Library Match results showing 94% PBM fit value. 结果 本试验介绍了一种非常灵敏的检测氨基甲酸乙酯的方法，检测限和定量限分别为1.3ng/L 和 4ng/L， 该限制远远低于酒里的建议限值(125ppb， mg/L)l。Waters@Empower3软件可以很方便的建立一个谱库用与分析匹配，谱库匹配前可以在预计的时间段设置一个保留时间塞查来提高匹配效率，配合上 Clarus SQ8 MS仪器，提供了一套检测氨基己酸乙酯的完整解决方案。 ( 参考文献 ) ( 1. Christine E. Butzke， Linda F . Bisson， U S FDA Ethyl CarbamatePreventative Action Manual， http：//www.fda.gov/Food/ FoodbornelllnessContaminants/ChemicalContaminants/ ucm078521.htm. ) 2. http：//www.efsa.europa.eu/sites/default/files/scientific_output/files/main_documents/578e.pdf. ( 3. Alexander J， Auounsson G， Benford D， Cockburn A， Cravedi J， Doglitti E. 2007. Ethyl carbamate and hydrocyanic acid in food a nd b e verages. Scientific opinion of the panel on contaminants. EFSAJ 551：1-44. ) 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技技区张衡路1670号邮编：201203电话：021-60645888传真：021-60645999www.perkinelmer.com.cn