光源中荧光强度检测方案(分子荧光光谱)

Application TechcompD：天美Application e techcomp@techcomp.cnW www.techcomp.cn 利用标准物质对荧光强度进行标准化 前言：荧光强度通常会受到光源亮度，室温变化等因素的影响，而使得不同时间点检测的荧光强度有所差别，干扰实验者的分析。若使用荧光强度标准化功能，可以校正荧光强度的经时变化、日差变化。荧光强度标准化功能是指通过将测试样品的荧光强度与标准样品相比较，换算得到样品稳定荧光强度的方法。本文黄曲霉毒素为例介绍荧光强度标准化功能。 一、荧光强度标准化介绍 ● 使用210 ug/L的硫酸奎宁(QS)作为标准样品；在软件中输入硫酸奎宁浓度，自动计算换算系数(1.88)； 检测20 ug/L 黄曲霉毒素的荧光光谱， Ex波长350nm； 纵坐标代表与QS值进行换算后的相对荧光强度值；20 pg/L黄曲霉毒素的荧光强度相当于350ppm QS 的强度； 检测结果如下图所示， 20 ug/L 黄曲霉毒素的荧光光谱如图一所示，荧光强度会随仪器或检测时间的变化产生差异；使用硫酸奎宁进行标准化后，可得到相对荧光强度，如图二所示； 图1黄曲霉毒素20 ug/L的荧光光谱 图2黄曲霉毒素20 ug/L的相对荧光光谱QS换算 二、日立荧光进行荧光强度标准化的使用步骤 以标准样品的荧光强度为基准，把实际样品的检测结果作为相对荧光强度进行自动换算； 可以同时确认标准样品的光谱和荧光强度、随后选择标准化所需要的波长，浓度； 检测实际样品后、软件会自动显示标准化了的光谱； 检测之后也可以显示标准化前的光谱、或改变标准化所使用的波长及浓度； 图5标准样品检测 三、硫酸奎宁和黄曲霉毒素的3维荧光光谱 ● 使用QS对黄曲霉毒素的三维荧光光谱进行标准化； ● 确认激发波长350 nm， 发射波长450nm的荧光峰； ● 为了避免仪器的波长依赖性，选择的标准品与待测样品的发射波长要尽量接近；并推荐使用光谱校正功能； 样 品 ： 分析条件： 激发侧狭缝 5 nm 荧光侧狭缝 5nm 扫描速度 60，000 nm/min 响应 自动 光电倍增管电压 500V 光谱校正 ON 过滤器 CF35 结果： ●D不同待测样品需要选择不同的标准物质，如腐蚀物质或1-丁醇的检测，QS可作为基准来做评价；在做水中的叶绿素检测时，可用荧光素为基准； ● 由于硫酸奎宁与待测样品黄曲霉毒素的发射波长接近，所以是合适的标准样品； ● 通过三维光谱测试QS和黄曲霉毒素在450nm的荧光峰； techcomp@techcomp.cnw www.techcomp.cn 荧光强度通常会受到光源亮度，室温变化等因素的影响，而使得不同时间点检测的荧光强度有所差别，干扰实验者的分析。若使用荧光强度标准化功能，可以校正荧光强度的经时变化、日差变化。荧光强度标准化功能是指通过将测试样品的荧光强度与标准样品相比较，换算得到样品稳定荧光强度的方法。本文黄曲霉毒素为例介绍荧光强度标准化功能。