饲料中磺胺类药物检测方案(液相色谱仪)

高效液相色谱法检测饲料中磺胺类药物 　　磺胺药（Sulfonamides）是一类比较常用的药物，具有抗菌谱广、可以口服、吸收较迅速，能通过血脑屏障渗入脑脊液（如磺胺嘧啶，SD）、较为稳定、不易变质等优点。在磺胺药临床应用中，还发现有些品种具抑制碳酸酐酶的作用，有的则有降血糖的副作用。经过系统的化合物合成与筛选，终于发展以双氢克尿噻为代表的磺胺类利尿药和以甲苯磺丁脲为代表的磺胺类口服降血糖药。磺胺药结构与对氨基苯甲酸相似，当前者浓度在体内远大于后者时，可在二氢叶酸合成中取代对氨基苯甲酸，阻断二氢叶酸的合成。这导致微生物的叶酸合成受阻，生命不能延续。 青霉素和其他抗生素相继出现后，由于他们具有更高的抗菌作用，磺胺药的应用受到影响，但磺胺药具有性质稳定、易于组织生产、价格低廉、服用方便等优点，在抗菌药物中始终占有重要的地位，尤其被国内外畜禽养殖业广泛使用。畜禽养殖业是食品的源头，这对人类健康构成潜在的巨大威胁。长期食用含有磺胺类药物超标的畜产品，可能会破坏人的造血系统，引起粒细胞缺乏症等。因此，限制磺胺类药物在畜禽养殖业中的应用是保证食品安全的重要环节。 对于成分复杂的饲料中多种磺胺类药物的检测，应用紫外检测器和梯度洗脱法就可以灵敏、快速、高效的完成分析。 　　仪器介绍 LC600C二元高压梯度液相色谱系统（南京科捷分析仪器有限公司） 配备高压梯度泵1台（内含2台恒流泵和1台梯度混合器），梯度混合器（专利）性能优越 2、16:9的TFT彩屏支持脱机时通过仪器触屏输入和显示所有信息。 3、支持手动进样，可选配自动进样器，采用注射器定量，流动相过针，电脑控制进样量大小，无需更换定量环即可改变进样体积，极大的方便用户操作。 4、广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。 　　实验方法 样品处理： 1、精确称取2.000g试样于50mL具塞离心管中，加入15mL乙酸乙酯，漩涡振荡混匀，30 ℃水浴中超声提取3min，期间取出摇动1次，然后以4000 r/min离心3min，静置后收集上清液转移至另一管中，重复提取残渣2次，合并上清液，转入鸡心瓶中40℃旋转蒸至近干，加入3mL乙酸乙酯，充分摇匀溶解残渣。 2、用5mL正己烷和5mL乙酸乙酯预淋氨基固相萃取柱，再将上述溶解液过小柱，上样后，首先用5 mL正己烷淋洗此柱去除杂质，减压抽干10min，然后用2 mL洗脱液洗脱，收集洗脱液并尽可能抽干小柱。 3、洗脱液过0.45μm有机性滤膜，作为待测液（上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制在0.8~1.0mL/min。）。 分析条件： 色谱柱 C18柱150mm×4.6mm 检测器 紫外检测器 流动相 A：乙腈-甲醇（V/V=1：1）；B：0.1%乙酸溶液 洗脱程序 时间/min A液/% B液/% 0 15 85 30 50 50 34 15 85 流速 0.8mL/min 柱温 20℃ 检测波长 270nm 进样量 20μL 　　谱图分析： 饲料中磺胺类药物的液相色谱图 1磺胺醋酰 2磺胺嘧啶 3磺胺吡啶 4磺胺二甲基嘧啶 5磺胺对甲氧哒嗪 6磺胺甲基异噁唑 7磺胺间甲氧嘧啶 8磺胺二甲氧嘧啶 9磺胺喹噁啉 传真：025-8373895 南京科捷分析仪器有限公司 QQ：2326515893 高效液相色谱法检测饲料中磺胺类药物 　　磺胺药（Sulfonamides）是一类比较常用的药物，具有抗菌谱广、可以口服、吸收较迅速，能通过血脑屏障渗入脑脊液（如磺胺嘧啶，SD）、较为稳定、不易变质等优点。在磺胺药临床应用中，还发现有些品种具抑制碳酸酐酶的作用，有的则有降血糖的副作用。经过系统的化合物合成与筛选，终于发展以双氢克尿噻为代表的磺胺类利尿药和以甲苯磺丁脲为代表的磺胺类口服降血糖药。磺胺药结构与对氨基苯甲酸相似，当前者浓度在体内远大于后者时，可在二氢叶酸合成中取代对氨基苯甲酸，阻断二氢叶酸的合成。这导致微生物的叶酸合成受阻，生命不能延续。 青霉素和其他抗生素相继出现后，由于他们具有更高的抗菌作用，磺胺药的应用受到影响，但磺胺药具有性质稳定、易于组织生产、价格低廉、服用方便等优点，在抗菌药物中始终占有重要的地位，尤其被国内外畜禽养殖业广泛使用。畜禽养殖业是食品的源头，这对人类健康构成潜在的巨大威胁。长期食用含有磺胺类药物超标的畜产品，可能会破坏人的造血系统，引起粒细胞缺乏症等。因此，限制磺胺类药物在畜禽养殖业中的应用是保证食品安全的重要环节。 对于成分复杂的饲料中多种磺胺类药物的检测，应用紫外检测器和梯度洗脱法就可以灵敏、快速、高效的完成分析。 　　仪器介绍LC600C二元高压梯度液相色谱系统（南京科捷分析仪器有限公司）配备高压梯度泵1台（内含2台恒流泵和1台梯度混合器），梯度混合器（专利）性能优越2、16:9的TFT彩屏支持脱机时通过仪器触屏输入和显示所有信息。3、支持手动进样，可选配自动进样器，采用注射器定量，流动相过针，电脑控制进样量大小，无需更换定量环即可改变进样体积，极大的方便用户操作。4、广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。 　　实验方法 样品处理：1、精确称取2.000g试样于50mL具塞离心管中，加入15mL乙酸乙酯，漩涡振荡混匀，30 ℃水浴中超声提取3min，期间取出摇动1次，然后以4000 r/min离心3min，静置后收集上清液转移至另一管中，重复提取残渣2次，合并上清液，转入鸡心瓶中40℃旋转蒸至近干，加入3mL乙酸乙酯，充分摇匀溶解残渣。2、用5mL正己烷和5mL乙酸乙酯预淋氨基固相萃取柱，再将上述溶解液过小柱，上样后，首先用5 mL正己烷淋洗此柱去除杂质，减压抽干10min，然后用2 mL洗脱液洗脱，收集洗脱液并尽可能抽干小柱。3、洗脱液过0.45μm有机性滤膜，作为待测液（上样溶液、淋洗液和洗脱液的流速均控制在0.8~1.0mL/min。）。 分析条件和谱图分析见附件饲料中磺胺类药物的液相色谱图 1磺胺醋酰 2磺胺嘧啶 3磺胺吡啶 4磺胺二甲基嘧啶 5磺胺对甲氧哒嗪6磺胺甲基异噁唑 7磺胺间甲氧嘧啶 8磺胺二甲氧嘧啶 9磺胺喹噁啉