细菌中DNA细胞破壁检测方案(研磨机)

TJ2011高通量组织研磨仪用于细菌的解决方案 选用革兰氏阳性菌的模式菌株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）作为测试菌株，在不同的振荡速度和时间的组合下检测起对细菌的破壁效果。操作过程如下： LB培养基隔夜培养（约12 小时） 分别取3ml菌液收集（1.5mlEP管） 分别加入0.5 g 0.1mm直径的玻璃珠（sigma），置于仪器上破碎（未加RNA酶） 加入0.5ml酚：氯仿：异戊醇萃取，13000rpm离心5min，取上清液 使用威格拉斯DNA纯化试剂盒提取上清液中的DNA 6，Nanodrop测试核算品质 注意：酚：氯仿：异戊醇本来可以和玻璃珠一起加入的，但酚具有强氧化性，所以为乐保护仪器选择了后来加入，建议采用好的材料。第4步之后可以有多种选择，可以选择用氯仿异戊醇再抽提一次，然后再用异丙醇沉淀；也可以选用试剂盒。这里为乐节约时间选用了威格拉斯的DNA纯化试剂盒。 组合(rpm*min) 浓度 260/280 260/230 0 实验室普通振荡器10min 168.8 2.08 2.27 1 1500*10 597.5 1.97 2.33 2 1500*3 211.8 2.03 2.3 3 1500*5 626.1 2.08 2.27 4 1300*5 204.1 2.01 2.32 5 1000*5 172.9 2.09 2.25 6 800*5 167.7 2.09 2.27 7 500*5 117 1.99 2.23 8 300*5 89.1 1.65 1.99 电泳图如下： 结论：即使是在300rpm*5min的情况下，提取出来的核算仍然满足PCR扩增需求。 2，对另一株阳性菌进行了同样流程的操作，得到的结果如下： 组合(rpm*min) 浓度 260/280 260/230 0 实验室普通振荡器10min 173.2 2.08 2.31 1 1500*10 706.8 2.02 2.27 2 1500*3 230.2 2.03 2.13 3 1500*5 923.5 2.11 2.26 4 1300*5 415.6 2.02 2.35 5 1000*5 243.0 2.03 2.33 6 800*5 158.2 1.98 2.13 结论：这个仪器在破碎一般的阳性菌的时候，效果还是很好的，虽然会产生一些弥散，但这是玻璃珠破碎方法的缺点，玻璃珠破碎的方法的优点就是破碎较彻底，在提取土壤DNA、古菌DNA等实验操作中广为应用。总而言之，TJ2011高通量组织研磨仪可以满足破碎一般阳性菌的要求。