咸鱼中有机磷农药残留检测方案(液相色谱配件)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 使用两种前处理方法结合高效液相色谱串联质谱法测定咸鱼中16种有机磷农药残留 应用简报 食品检测与农业 作者 摘要 ( 梁雪琪黎小鹏²魏斌 ) ( 1.中山市农产品质量监督检验所 ) 2.中山市三乡镇农产品检验检测站 本文建立了咸鱼中16种有机磷农药残留的液相色谱串联联谱分析方法，线性范围在0.5~20 ng/mL 之间，线性相关系数在0.991~0.999之间。此外，还对两种前处理方法进行了考察，分别使用 Agilent Bond Elut QuEChERS 试剂盒以及国标前处理方法对咸鱼进行前处理， QuEChERS 方法回收率在55.45%~100.37%之间，国标前处理方法回收率在46.62%~108.32%。结果表明， QuEChERS 方法具有操作简便快速、准率率高、重复性好等优点。 3.淮安出入境检验检疫局 前言 食品的质量安全近年来在我国引起了高度重视。咸鱼是一种腌制食品，在加工过程中不法商贩为了防治蚊蝇、蛆虫等滋生会向咸鱼喷洒、浸泡有机磷农药，这严重威胁广大人民的健康。因此，建立准确、快速测定此类食品中有机磷残留的检测方法具有重要意义。 国标中关于肉制品中有机磷农药的前处理方法繁琐，且除脂和净化效果不理想。而 QuEChERS(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe) 方法是近年来国际上最新发展起来的一种用于农产品农药残留检测的快速样品前处理技术，此方法快捷简便，并且能将咸鱼样品中大量油脂去除，减少分析过程中基质干扰。因此本文采用这两种前处理方法结合液相色谱串联质谱法快速检测咸鱼中有机磷农药残留，以便对比其除脂和净化效果。 材料与试剂 甲酸、乙腈均为色谱纯，购于德国 Merck 公司；乙腈、丙酮、二氯甲烷、硫酸钠等均为分析纯，购于广州分析化学试剂厂；实验用水购于屈臣氏；甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧乐果、久效磷、敌百虫、乐果、敌敌畏、杀扑磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷、马拉硫磷、三唑磷、喹硫磷、倍硫磷、治螟磷、毒死蜱标准品的浓度均为100mg/L，购于农业部环境保护监测所。 Agilent Bond Elut QuEChERS 试剂盒购于安捷伦科技公司。 仪器 Agilent 1200 液相色谱系统 Agilent 6410 三重四极杆液质联用系统 IKA公司摇床、T26匀浆机 SIGMA公司高速冷冻离心机3K30 0rganomation 公司 MUL-TIV APTM 氮吹仪 瑞士 BuCHI公司旋转蒸发仪 国标前处理法 称取5g咸鱼样品，加入20 mL丙酮，匀质机匀浆，10000 rpm 4℃冷冻离心5min， 吸取 10mL 上清液于分液漏斗中，加入 20 mL 20 g/L的无水硫酸钠溶液，再加入 20mL二氯甲烷，摇晃提取 2 min， 静置分层，把下清液放入装有2g无水硫酸钠和5g中性氧化铝的锥形瓶中，再用20 mL二氯甲烷再次提取，合并两次提取液，鸡心瓶口放滤纸，把锥形瓶中液体倒入，最后再用 10 mL二氯甲烷清洗锥形瓶后倒入鸡心瓶，不设温度下滤液旋蒸至干，2.5 mL初始流动相定容，漩涡震荡1 min， 10000 rmp/min 4°℃ 离心5 min， 取上清液于样品瓶中，待液质联用系统检测。 QuEChERS 前处理法 称取 5g咸鱼样品， 加入 10 mL冰冻乙腈，匀质机匀浆，加入陶瓷均质子， 加入 Agilent Bond Elut QuEChERS 提取包，剧烈震荡3 min，10000 rpm 4℃冷冻离心5 min， 全部上清液倒入有陶瓷均质子的Agilent Bond Elut QuEChERS 分散固相萃取净化管中，剧烈震荡3 min， 漩涡震荡1 min， 10000 rpm 4℃冷冻离心5 min， 吸取 0.2mL上清液，初始流动相定容到1mL， 待液质联用系统检测。 液相色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18， 2.1x100 mm， 2.7um 柱温： 45°C 流速： 0.3mL/min 进样量： 10 pL 流动相A： 含0.1%甲酸的水 流动相B： 含0.1%甲酸的乙腈 梯度洗脱： 时间(min) B(%) 2 2 35 2.50 40 7.00 60 10.00 95 14.00 2 质谱条件 电离方式： 电喷雾离子源(ESI+) 检测模式： 多反应检测(MRM) 毛细管电压：4000V 干燥气流量： 10L/min 干燥气温度：350°C 雾化器压力：50psi 定性离子对、定量离子对及碰撞能量：见表1 表1.待测物的质谱参数 响应 vs. 采集时间(min) 响应 vs. 采集时间 (min) *为定量离子 4 10011121314响应 vs. 采集时间 (min) 结果与讨论 图1.0.5 ppb 有机磷农药混合标准溶液的 TIC 图 (A， Poroshell 120 SB-C18；B， ZORBAX SB-C18； C， Atlantis T3) 液相色谱柱选择 分别使用 Poroshell 120 SB-C18 (2.1x100 mm， 2.7 pm)、ZORBAXSB-C18 (2.1x 150 mm， 3.5 pm) 和Atlantis T3 (2.1x150 mm，3.5 pm) 色谱柱对 0.5 ppb 的16种有机磷农药混合标准溶液进行分析。如图1所示， 采用 Poroshell 120 SB-C18色谱柱对16种有机磷农药进行分离时，色谱峰的分离效果最好，且分离时间短。 样品前处理方法优化 本文分别使用国标和 QuEChERS 方法对咸鱼样品进行前处理，以便对比这两种方法的净化效果。如图2所示，咸鱼样品中油脂含量高，杂质成分较为复杂，国标前处理方法(黑色基线)的净化效果不理想，在空白样品 TIC图中可以明显看到基线噪音较大； 而 QuEChERS 前处理方法(红色基线)的净化效果较好，基线噪音较小。 线性范围、相关系数和定量限 采用文中所述实验条件，依次对0.5、1、2、5、10、20 ng/ml的混合标准溶液进行分析，记录色谱图。以不同浓度点为横坐标(X)， 以每个浓度点下各有机磷农药特征离子峰的峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。如表2所示，本文所述方法在线性范围0.5-20 ng/mL内，16种有机磷农药的线性相关系数良好，均在0.991-0.999之间。 通过各有机磷农药的特征离子色谱峰信噪比 S/N >10，计算得到方法定量限(LOQ)， 如表2所示。 定量限、回收率和精密度 在空白样品中分别添加浓度水平为10、20、40 ug/kg 的混合标准溶液，做2次平行实验，进行方法回收率和精密度讨论。如表3所示，对比两种前处理方法的回收率和标准偏差可以得到， QuEChERS前处理方法的平均回收率和相对标准偏差均优于国标前处理方法，表明 QuEChERS 方法的准确率更高、重复性更好。此外，实验中发现，国标方法在旋蒸浓缩过程中，当温度超过大气压下80℃时，部分有机磷农药会发生分解，导致回收率下降或显现回收率为零的状况，所以在旋蒸浓缩的时候不设任何温度。 表2.16种有机磷农药的线性方程和相关系数 分析物 线性方程 相关系数 LOQ 甲胺磷 y=10358.187377x+339.922429 0.9999 0.44 乙酰甲胺磷 y=9054.838527x+2709.943016 0.9981 0.57 氧乐果 y=6164.665331x+1195.690532 0.9992 0.41 久效磷 v=9248.352377x+822.780537 0.9986 0.50 敌百虫 y=1732.687679x+59.145321 0.9998 1.02 乐果 y=10829.334041x-180.824597 0.9915 0.29 敌敌畏 v=4368.674093x-612.528836 0.9998 0.88 杀扑磷 v=19146.452539x+6517.004383 0.9952 0.15 亚胺硫磷 v=32803.224297x+6481.263774 0.9989 0.32 甲基对硫磷 v=791.358518x-150.989407 0.9996 0.09 马拉硫磷 v=5210.165070x+1753.591261 0.9933 0.21 三唑磷 y=57890.824345x+11698.930679 0.9992 0.23 喹硫磷 v=12991.074637x-1119.485222 0.9997 0.32 倍硫磷 v=1513.646719x-111.735279 0.9993 1.60 治螟磷 y=26768.220959x-510.129441 0.9955 0.12 毒死蜱 v=1070.323086x-155.970179 0.9987 2.50 表3添加回收率和精密度数据 (n=2) 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 结论 本文建立了咸鱼中16种有机磷农药残留的液相色谱串联质谱检测方法， 并采用两种前处理方法对加标样品进行分析。结果表明，本文所述液相色谱串联质谱检测方法可对16种有机磷农药进行分离，分析效果好且分离时间短。通过对比实验可以得到，与国标前处理方法相比， QuEChERS 前处理方法的提取效率更高、净化效果更好、灵敏度更高、重现性更好，适用于咸鱼中有机磷农药残留检测的实际工作需要。 ( 参考文献 ) ( [1] 张一宾，张.农药[M].北京： 中 国物资出版社，1997：55-60 ) ( [2] GB/T5009.20-2003食品中有机磷农药残留量的测定 【 S 】 ) ( 耗材订购信息 ) ( Agilent Bond Elut QuEChERS提取包 ： 部件号59 8 2-6650 ) ( Agilent Bond Elut QuEChERS 分散固相萃取净化管： ) 部件号5982-4950 ( Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱： 2 . 1x100 mm， 2.7 pm， 部件号685775-902 ) Agilent Technologies 液相色谱柱选择分别使用 Poroshell 120 SB-C18 (2.1x100 mm, 2.7 m)、ZORBAX SB-C18 (2.1 x 150 mm, 3.5 m) 和 Atlantis T3 (2.1 x 150 mm, 3.5 m) 色谱柱对 0.5 ppb 的 16 种有机磷农药混合标准溶液进行分 析。如图1所示，采用 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱对 16 种有机磷 农药进行分离时，色谱峰的分离效果最好，且分离时间短。样品前处理方法优化本文分别使用国标和 QuEChERS 方法对咸鱼样品进行前处理，以便 对比这两种方法的净化效果。如图 2 所示，咸鱼样品中油脂含量高， 杂质成分较为复杂，国标前处理方法（黑色基线）的净化效果不理想，在空白样品 TIC 图中可以明显看到基线噪音较大；而 QuEChERS 前 处理方法（红色基线）的净化效果较好，基线噪音较小。