食品中三氯蔗糖检测方案

Agela Technologies 摘要：本实验重现了《食品中三氯蔗糖的测定》(GB/T 22255-2014)，样品经甲醇水(3：1，V/V)提取，CleanertPEP-2固相萃取柱净化， Venusil XBP C18 (L)色谱柱(4.6×150 mm， 5 um， 150A)分离，水和乙腈为流动相进行洗脱，外标法进行定量。结果表明，三氯蔗糖添加量为1.0mg/g时，回收率在80%~110%之间，能够满足检测要求。 关键词：三氯蔗糖； Cleanert"PEP-2固相萃取柱； 1.前言 三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，是一种白色粉末状产品，极易溶于水，水溶液澄清透明，其甜度是蔗糖的400~800倍。其中，食品包装成分表中常能看到的蔗糖素(学名三氯蔗糖)，虽然所含热量少，但吃多了也会胖，而且还可能阻碍身体对一些药物的吸收。 因此通过有效的实验技术手段，对食品中的有关三氯蔗糖留进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义。 本实验通过优化前处理方法建立了三氯蔗糖在食品中的高效液相色谱的方法。 2.仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪(蒸发光检测器)； 博纳艾杰尔12位负压SPE装置。 试剂材料 甲醇、乙腈、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸锌、亚铁氰化钾均为分析纯；中中性氧化铝(100目~200目) 三氯蔗糖标准品(纯度99%)； 乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解至100 mL； 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解至100 mL： 甲醇水溶液：量取75mL甲醇，加25mL水，混匀； 乙腈水溶液：：量取11mL乙腈，加89mL水，混匀。 一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.45 um，直径13 mm)； Cleanert"PEP-2固相萃取柱：200 mg/6mL。 3.样品制备 样品提取 酱油 称取2g样品置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加入3mL水，涡旋混匀振荡3 min后，加入15 mL甲醇，继续震荡30 s， 超声波提取20 min， 3000r/min离心10min，上清液移入50mL离心管中，沉淀物加入5.0mL甲醇水(3：1，V/V)，涡旋30 s， 以3000 r/min，离心10 min，重复提取2次，将上清液合并于150 mL分液漏斗中。 在150mL分液漏斗中，加入30 mL正己烷，振摇2min， 静置分层，20 min后， 下层水相移至于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1mL左右时，用9mL水分3次冲洗蒸发皿，合并于15mL离心管中，超声处理5 min， 3000 r/min离心10 min， 待净化。 可口可乐 称取混匀后试样5 g， 置于15mL离心管中，加入5 mL水，涡旋混合器上振荡30s， 以3000 r/min离心10 min 酸奶 称取混匀后试样2g置于50mL离心管中，加入5 mL水，涡旋振荡3 min后加入15 mL甲醇， 0.5 mL乙酸锌，0.5mL亚铁氰化钾，继续震荡30s，超声波提取20 min， 3000r/min离心10 min， 上清液移入50 mL离心管中，沉淀物加入5.0 mL甲醇水(3：1，V/V)，涡旋30 s， 以3000 r/min，离心10 min， 重复提取2次，将上清液合并于150 mL分液漏斗中 在150mL分液漏斗中，加入30mL正己烷，振摇2min， 静置分层，20 min后， 下层水相移至于50 mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1mL左右时，用9mL水分3次冲洗蒸发皿，合并于15mL离心管中，超声处理5 min， 3000 r/min离心10 min， 待净化。 样品净化 先将Cleanert PEP-2 (200 mg/6 mL)小柱分别用4 mL甲醇，4mL水溶液活化平衡；然后将待净化液过柱；用1mL水洗柱，弃去全部流出液；最后用3mL甲醇洗脱。收集洗脱液于40℃氮气吹干，用1mL乙腈水(11：89，V/V)溶解残留物，过0.45um尼龙针式过滤器滤膜后待测。 4.色谱条件 色谱柱： Venusil" XBPC18(L)， 5 um， 150A， 4.6×150mm 流动相：乙腈：水=11：89；；柱温：35℃ 进样量：20uL； 蒸发温度：50℃ 5.结果与讨论 实验结果 由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测三氯蔗糖，加标回收率在80%~110%之间，能够满足标准要求。 表1.三氯蔗糖加标回收实验结果(n=3) 物质名称 添加水平(mg/kg) 平均回收率(%) RSD(%) 酱油 50.0 109.5 6.8 可口可乐 20.0 81.9 3.1 酸奶 50.0 86.5 0.5 图1.0.1 mg/mL 混合标准夜液液相色谱图 图2.酱油样品基质空白液相色谱图 图3.50mg/kg 酱油样品基质加标液相色谱图 图4.可口可乐样品基质空白液相色谱图 图5.20mg/kg 可口可乐样品基质加标液相色谱图 图6.50 mg/kg酸奶样品基质空白液相色谱图 图7.50 mg/kg 酸奶样品基质加标液相色谱图 结论 本实验依据《食品中三氯蔗糖的测定》》(GB/T 22255-2014)建立了食品中三氯蔗糖残留量的检测方法，并结合高效液相色谱对食品中三氯蔗糖残留物的含量进行了测定。对于加标量为50 mg/kg的可乐和20 mg/kg的酸奶、酱油样品进行了检测，回收率在80%~110%之间，符合要求。 6.订货信息 产品名称 规格包装 订货号 VenusilXBP C18 (L) 5 um， 150 A， 4.6 × 150 mm VX951505-L Cleanert"PEP-2 200 mg/6 mL， 30/pk PE2006-2 Qdaura卓睿全自动固相萃取系统 4通道 SPE-40 15位氮吹仪 15位 NV15-M 保护柱套 适用于4.6×10mm和2.1×10mm， 4/pk SH-100 直联式保护柱芯 5 um， 150A； 2.1 × 10 mm VX950105-LS 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32 ×11.6 mm， 100/pk 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫 45° Shore A； 1.0 mm， 100/pk 0915-1819 针式过滤器 单膜，13mm， 0.45 um， 200/pk AS081345 一次性注射器 2mL无针头， 100/pk LZSQ-2ML www.agela.com.cn— 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载!