血液中甲拌磷，咖啡因，氨基比林检测方案(固相萃取仪)

完整的无机和有机样品前处理产品线提供全面的医疗卫生检测解决方案Preekem屹尧科技 PreeKem转屹尧科技样品前处理专家 医疗卫生行业检测解决方案 一 无机样品前处理系列 微波消解仪一适用于重金属及汞、砷等有害物质元素检测 TOPEX全能型微波化学工作平台 WX-8000专家型密闭微波消解仪 COOLPEXK灵动型微波化学反应仪 有机样品前处理系列 适用于农药残留、兽药残留、食品添加剂、药物及司法检测 EXTRA全自动固相萃取仪 N1全自动氮吹浓缩仪 NS-10圆盘氮吹浓缩仪 从无到有开启样品前处理智能化时代 ID BIOET1402 1引言 血液中药物含量的准确检测，对相关案件的认定起着至关重要的作用。当前，药物分析普遍采用液液萃取法，该方法操作繁琐，费时费力且除杂效果差；本文选用 ProELUT PLS 固相萃取柱，建立了同时测定血液中甲拌磷、咖啡因、氨基比林的全自动固相萃取法，并用 GC/MS 进行筛选检验和定性定量。该方法具有提取过程自动化、一次处理项目多、回收率高、重现性好、除杂效果佳等特点，特别符合刑侦化验中安眠药检测的需求。 2试剂、仪器及器材 2.1试剂 甲醇、乙酸乙酯(以上均为色谱纯)、去离子水，，甲拌磷、咖啡因、氨基比林标准品(均购自公安部物证鉴定中心)。 2.2血液样品 取自近期未服药物健康人抽取的血液样品 2.3仪器及器材 安捷伦7890A/5975C 气质联用仪； 屹尧 EXTRA 全自动固相萃取仪(图1)； 3实验方法 3.1血液样品预处理 精确移取血液样品1.0 mL (若血液样品粘稠，则先用水进行1：1稀释，稀释后取样品 1.0ml)，之后血样进行 ASPE 净化。 图1 EXTRA 全自动固相萃取仪 3.2血液样品 ASPE 净化 (1) 待净化液采用 EXTRA-ASPE 进行净化。 (2)在3mL专用固相萃取 (SPE， Solid-PhaseExtration)小柱上装上 3 mL柱密封塞。 (3)将塞好密封塞的 SPE 小柱放入EXTRA-ASPE的3 mL SPE 架上。 (4)将溶剂瓶 S1 中装入600mL 乙酸乙酯试剂；溶剂瓶 S2 中装入600 mL去离子水；溶齐瓶V1 中装入800 mL 去离子水，溶剂瓶V2中装入800 mL 甲醇。 (5)在控制 EXTR-ASPE 系统的 PC 软件方法设置界面上，设置血液中3种药物的固相萃取方法(固相萃取方法设置如表1)。 表1 EXTRA 全自动固相萃取仪方法 动作 位置 溶剂 体积 抽溶剂速度 打溶剂速度 清洗探针 外针 甲醇 5.0mL 120 mL/min 活化 甲醇 3.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 活化 水 3.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 活化 空气 0.6 mL 10 mL/min 上样 样品 1.2 mL 20 mL/min 1.0 mL/min 上样 空气 0.3mL 1 10 mL/min 清洗探针 外针 甲醇 5.0 mL 120 mL/min 淋洗 水 2.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 淋洗 空气 10 mL 30 mL/min 清洗探针 外针 甲醇 2.0 mL / 120 mL/min 淋洗 甲醇 2.0 mL 20 mL/min 1.5 mL/min 淋洗 空气 10 mL 30 mL/min 洗脱 乙酸乙酯 2.0 mL 20 mL/min 1.0mL/min 洗脱 空气 1.0mL 20 mL/min 10 mL/min 3.3 GC/MS检测条件 色谱柱： HP-5MS 进样口温度：280℃ 进样模式：不分流 进样口压力：11.654 Psi 流速：1.0 mL /min 柱温：120℃，保持2min， 30℃ min 升温至280℃，保持13min。 3.4甲拌磷、咖啡因、氨基比林的出峰时间、定量离子、定性离子如表2所示。 表2三种物质的出峰时间、定量离子、定性离子 检测物质 出峰时间(min) 定量离子 定性离子1 定性离子2 甲拌磷 6.327 75 121 260 咖啡因 6.971 194 109 165 氨基比林 7.293 231 56 111 4数据 4.1标准曲线 对浓度为2、5、10、15、20u g/mL的甲拌磷、咖啡因、氨基比林标准样品进行定量分析，得出化合物的标准曲线如图2. 图2甲拌磷、咖啡因、氨基比林的标准曲线 4.2回收率及精密度 平行测定6次添加实验，添加量5ug，利用峰面积外标定量；评价方法的平均回收率及精密度；测定结果见表3。 表3三种物质的回收率及精密度 检测物质 加标量(ug/mL) 平均值 (ug/mL) RSD% 平均回收率% 甲拌磷 5 4.408 5.7 88.2 咖啡因 5 5.291 2.3 105.8 氨基比林 5 4.32 4.0 86.4 5结论 本实验采用全自动固相萃取仪结合气相色谱串联质谱检测血液中的三种安眠药成分，加标量为 5 ug/mL时，回收率为 86.4%-105.8，精密度RSD (n=6)在2.3%-5.7%之间，表现良好，可满足日常检测需要。同时，方法简单，可操作性强，采用全自动固相萃取节约时间及人力，减少人为误差，在实际样品检测中可提高效率。 ww.preekem.com ww.preekem.com 血液样品处理血液样品预处理精确移取血液样品1.0 mL（若血液样品粘稠，则先用水进行1:1稀释，稀释后取样品1.0ml），之后血样进行ASPE净化。                                      血液样品ASPE净化（1）待净化液采用EXTRA-ASPE进行净化。（2）在3 mL 专用固相萃取小柱上装上3 mL柱密封塞。（3）将塞好密封塞的SPE小柱放入EXTRA-ASPE的3 mL SPE架上。（4）将溶剂瓶S1中装入600 mL 乙酸乙酯试剂；溶剂瓶S2中装入600 mL 去离子水；溶剂瓶V1中装入800 mL去离子水，溶剂瓶V2中装入800 mL甲醇。（5）在控制EXTR-ASPE系统的PC软件方法设置界面上，设置血液中3种药物的固相萃取方法（固相萃取方法设置如图1）。