缓冲蛋白胨水增菌液中缓冲蛋白胨水增菌液检测方案(试剂盒)

食品中人工合成着色剂的液相色谱仪测定 合成色素以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成着色剂，合成着色剂有一定毒性，过多食用会危害人体健康，但由于人工合成着色剂成本低、色泽鲜艳、着色力强、色调多样，故被广泛使用；合成着色剂有严格的控制使用范围和最大使用量，因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。 对于食品中合成着色剂的检测目前可借鉴国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，分别采用高效液相色谱法，薄层色谱法，示波极谱法进行定性定量分析，其中高效液相色谱法前处理采用聚酰胺吸附法或液-液分配法进行色素提取。 上海炎怡生物在参考国标的基础上，推出食品中人工合成着色剂的解决方案，该方案前处理采用聚合物基质亲水亲脂平衡反相固相萃取柱ProElut PLS进行色素的提取，比国标方法更简便易行，提取效率更高，净化效果更好；同时对高效液相色谱检测方法进行了改进，分别采用两款反相色谱柱，梯度洗脱检测食品中人工合成着色剂，分离效果更优异，增加定性定量的准确性。 该方案特别适用于食品中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红和亮蓝等人工合成着色剂的检测。以下为上海炎怡生物推出的食品中人工合成着色剂的检测解决方案，供您参考！ 1 样品准备 1.1 可乐样品 取1 g可乐(加热超声驱除二氧化碳)，40 μL甲酸于试管中，摇匀，作为上样液待净化。 1.2 红薯粉样品 (1) 取2 g样品与20 mL提取剂*混合，涡旋2 min，超声提取10 min，6000 rpm下离心3 min，收集上清液； (2) 将下层残留物依次用10 mL、10 mL提取剂重复提取两次，合并三次提取上清液； (3) 将上清液在45℃水浴条件下，减压蒸馏至6 mL，再加入80 μL甲酸，混匀，待净化。 提取剂*：氨水+70%乙醇（1+99，体积比）。 2 SPE柱净化——ProElut PLS 500 mg/6 mL 2.1 可乐样品SPE柱净化流程 (1) 活化/平衡： 5 mL甲醇活化，5 mL水平衡，流出液弃去； (2) 上 样： 将待净化液加入小柱，流出液弃去； (3) 淋 洗： 5 mL 2%甲酸水溶液，流出液弃去，将小柱抽干； (3) 洗 脱： 4 mL 2%氨水-甲醇溶液洗脱，收集流出液，2%氨水-甲醇溶液调至中性； (4) 重新溶解： 在40 ℃下用减压蒸馏将收集液浓缩至近干，然后用50%甲醇水溶液定容至1 mL后供HPLC分析。 2.2 红薯粉样品SPE柱净化流程 (1) 活 化： 5 mL甲醇，5 mL水活化； (2) 上 样： 加入待净化液，弃去流出液； (3) 淋 洗： 加入4 mL水，弃去流出液，将SPE柱抽干； (4) 洗 脱： 加入6 mL 2%氨水甲醇溶液，收集流出液； (5) 重新溶解： 将洗脱液在45 ℃下氮气吹至约0.5 mL，再用水定容至1 mL，微孔滤膜过滤后供HPLC分析。 3 分析条件 色谱柱： Inspire C18，250 × 4.6 mm，5 μm Diamonsil C18(2) 250 × 4.6 mm，5 μm 流 速： 1.0 mL/min 检测器：* UV 254 nm 柱 温： 35℃ 进样量： 20 μL 流动相： A：乙腈，B：0.02 mol/L 乙酸铵溶液 梯度 时间（min） 0 20 30 31 40 A（%） 5 30 37 5 5 B（%） 95 70 63 95 95 4添加回收结果 4.1 红薯粉添加回收结果 红薯粉中人工合成着色剂（添加水平为5 mg / kg）的添加回收结果 目标物 柠檬黄 苋菜红 胭脂红 日落黄 诱惑红 亮蓝 回收率 83.46% 83.18% 87.84% 94.59% 93.90% 101.28% 4.2可乐添加回收结果 分析物 添加水平(mg/kg) 回收率/% RSD(n*=4)/% 柠檬黄 1.6 97.9 3.77 苋菜红 2.4 97.1 2.77 靛蓝 2.4 72.3 3.73 胭脂红 3.2 98.2 1.31 日落黄 2.8 90.8 2.19 亮蓝 10.4 96.5 0.84 赤藓红 7.2 90.7 2.49 *n：平行样品的数量 订货号 中文名称 英文名称 CAS# 规格 价格 C10125000 诱惑红 Allura Red AC [25956-17-6] 0.1g 750 C16284000 胭脂红 Ponceau 4RC (E124) [2611-82-7] 0.1g 780 C10148500 苋菜红 Amaranth [915-67-3] 0.25g 405 C17138000 柠檬黄 Tartrazine [1934-21-0] 0.25g 480 C17048000 日落黄 Sunset Yellow (E110) [2783-94-0] 0.1g 780 C13205000 赤藓红 Erythrosin B disodium salt [16423-68-0] 0.25g 360 C10665200 亮蓝 Brilliant Blue FCF [3844-45-9] 0.25g 360 C14289000 靛蓝 Indigotine [860-22-0] 0.25g 405 人工合成着色剂饮料是人们常用食品。厂家为改善其感官性状，常加入过量的人工合成着色剂。又称人工合成色素，常以苯甲苯蔡等为原料，经磺化偶合缩合等化学反应制成，对人体有一定毒性因此，快速准确检测饮料中人工合成色素的含量具有重要实际意义。市售饮料中常见添加的人工合成色素有食品研究与开发年月期种柠檬黄览菜红靛蓝日落黄胭脂红。 　　测定方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法等。以往采用的高效液相色谱法均使用梯度洗脱技术，时间长，操作程序繁锁。山东滕州市鲁创分析仪器有限公司换用适宜流动相洗脱，波长分段检测方法，不经梯度洗脱便可以同时测定多种人工合成色素。时间短，操作程序大大简化，方法分离效果好，结果准确可靠，其灵敏度准确度精密度均达到分析测量要求。现已用于饮料中色素的测定。 　　实验部分 主要仪器：高效液相色谱仪、二极管阵列式检测器、色谱柱。 主要试剂：一磷酸二氧钾溶液（临用新配丙酮一水一氨溶液（冰醋酸，甲醇，溶液，种色素标准储备液一‘国家标准制剂厂制造），混合标准应用液临用前逐级稀释配制。所用试剂均为分析纯。 　　流动相每次需过滤，脱气。使用去离子水。 样品处理 取样品一加水适量，滴入一滴冰醋酸调至加入目聚酞胺吸附色素，待上清液无色后，去离子水洗净吸附剂，用丙酮一水一氨（l）溶液多次解吸附至吸附剂无色，收集解析液，水浴浓缩至进样前通过滤膜。 　　 色谱分析条件 流动相甲醇一磷酸二氢钾（23流速而柱温波长入分段检测一而砚一而双而以后欢峰面积定量，峰鉴别定性进样体积结果与讨论样品处理本文比较了羊毛绒染色氧化铝吸附聚酞胺吸附三种处理方法，发现靛蓝对热敏感羊毛绒染色需加热，会破坏该色素。 　　而氧化铝吸附法处理样品，测定时干扰严重，不利于定性定量分析。 　　采用聚酞胺吸附法处理样品，简便快速，不破坏色素，干扰少，利于分析，优于前两者，液相色谱仪且换用丙酮一水一氨溶液（氨水一乙醇溶液解吸附，解析效率提高。 　　但注意靛蓝对光较敏感，处理好样品应避光保存，尽快测定。 　　流动相值及流速选择采用甲醇一磷酸二氢钾缓冲体系，流动相值对分离度保留值影响甚大。 　　当或时，种色素出峰发生粘连重叠或拖尾，效果不佳。 　　实验磷酸二氢钾为按不同比例与甲醇混合作流动相，结合分离度ID，当选用流动相为时，甲醇一磷酸二氢钾（23）作流动相，流速分离效果良好。 　　波长选择在一定范围的波长下，对种色素标准溶液扫描，根据其光谱图分析鉴定。 　　柠檬黄览菜红靛蓝在处有较强吸收，胭脂红在处有较强吸收，日落黄在处有较强吸收，根据其出峰顺序采用分段波长测定，一入2一而砚以后沐此条件下的色谱图见图a一柠檬黄一览菜红c一靛蓝一胭脂红旧落黄（而图高效液相色谱法分离种色素混合标准液色谱图食品研究与开发）年期固定相选择实验选用巧柱方法检出限线性范围以所选色谱条件下基线噪声的倍所相当的种色谱标准浓度为检出限，分别为柠檬黄呷览菜红靛蓝胭脂红以日落黄种色素标准浓度为以与峰面积呈良好线性关系，相关系数方法精密度准确度干扰实验配制种色素混合标准溶液，浓度为25砂连续测定次，进行精密度实验，各色素分别为柠檬黄览菜红靛蓝胭脂红日落黄对市售种样品进行平行测定次，计算其相对标准偏差，用加标回收考察方法准确度，样品回收率为80一以于标准混合液（25.以L）中加人苯甲酸山梨酸糖精各（即）按上述方法处理后测定，未发现干扰峰出现，可排除此种物质的干扰。  食品中人工合成着色剂的液相色谱仪测定 合成色素以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成着色剂，合成着色剂有一定毒性，过多食用会危害人体健康，但由于人工合成着色剂成本低、色泽鲜艳、着色力强、色调多样，故被广泛使用；合成着色剂有严格的控制使用范围和最大使用量，因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。 对于食品中合成着色剂的检测目前可借鉴国标GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》，分别采用高效液相色谱法，薄层色谱法，示波极谱法进行定性定量分析，其中高效液相色谱法前处理采用聚酰胺吸附法或液-液分配法进行色素提取。 上海炎怡生物在参考国标的基础上，推出食品中人工合成着色剂的解决方案，该方案前处理采用聚合物基质亲水亲脂平衡反相固相萃取柱ProElut PLS进行色素的提取，比国标方法更简便易行，提取效率更高，净化效果更好；同时对高效液相色谱检测方法进行了改进，分别采用两款反相色谱柱，梯度洗脱检测食品中人工合成着色剂，分离效果更优异，增加定性定量的准确性。 该方案特别适用于食品中柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红和亮蓝等人工合成着色剂的检测。以下为上海炎怡生物推出的食品中人工合成着色剂的检测解决方案，供您参考！ 1 样品准备1.1 可乐样品 取1 g可乐(加热超声驱除二氧化碳)，40 μL甲酸于试管中，摇匀，作为上样液待净化。 1.2 红薯粉样品(1) 取2 g样品与20 mL提取剂*混合，涡旋2 min，超声提取10 min，6000 rpm下离心3 min，收集上清液；(2) 将下层残留物依次用10 mL、10 mL提取剂重复提取两次，合并三次提取上清液；(3) 将上清液在45℃水浴条件下，减压蒸馏至6 mL，再加入80 μL甲酸，混匀，待净化。提取剂*：氨水+70%乙醇（1+99，体积比）。 2 SPE柱净化——ProElut  PLS 500 mg/6 mL2.1 可乐样品SPE柱净化流程 (1) 活化/平衡： 5 mL甲醇活化，5 mL水平衡，流出液弃去； (2) 上    样： 将待净化液加入小柱，流出液弃去； (3) 淋    洗： 5 mL 2%甲酸水溶液，流出液弃去，将小柱抽干； (3) 洗    脱： 4 mL 2%氨水-甲醇溶液洗脱，收集流出液，2%氨水-甲醇溶液调至中性； (4) 重新溶解： 在40 ℃下用减压蒸馏将收集液浓缩至近干，然后用50%甲醇水溶液定容至1 mL后供HPLC分析。 2.2 红薯粉样品SPE柱净化流程 (1) 活    化： 5 mL甲醇，5 mL水活化； (2) 上    样： 加入待净化液，弃去流出液； (3) 淋    洗： 加入4 mL水，弃去流出液，将SPE柱抽干； (4) 洗    脱： 加入6 mL 2%氨水甲醇溶液，收集流出液； (5) 重新溶解： 将洗脱液在45 ℃下氮气吹至约0.5 mL，再用水定容至1 mL，微孔滤膜过滤后供HPLC分析。   3 分析条件 色谱柱： Inspire C18，250 × 4.6 mm，5 μmDiamonsil C18(2) 250 × 4.6 mm，5 μm  流 速： 1.0 mL/min  检测器：* UV 254 nm 柱 温： 35℃   进样量：   20 μL 流动相： A：乙腈，B：0.02 mol/L 乙酸铵溶液   梯度 时间（min） 0 20 30 31 40 A（%） 5 30 37 5 5 B（%） 95 70 63 95 95  4添加回收结果4.1 红薯粉添加回收结果 红薯粉中人工合成着色剂（添加水平为5 mg / kg）的添加回收结果 目标物 柠檬黄 苋菜红 胭脂红 日落黄 诱惑红 亮蓝 回收率 83.46% 83.18% 87.84% 94.59% 93.90% 101.28%  4.2可乐添加回收结果 分析物 添加水平(mg/kg) 回收率/% RSD(n*=4)/% 柠檬黄 1.6 97.9 3.77 苋菜红 2.4 97.1 2.77 靛蓝 2.4 72.3 3.73 胭脂红 3.2 98.2 1.31 日落黄 2.8 90.8 2.19 亮蓝 10.4 96.5 0.84 赤藓红 7.2 90.7 2.49 *n：平行样品的数量订货号 中文名称 英文名称 CAS# 规格 价格 C10125000 诱惑红 Allura Red AC [25956-17-6]  0.1g  750 C16284000 胭脂红 Ponceau 4RC (E124) [2611-82-7]  0.1g  780 C10148500 苋菜红 Amaranth [915-67-3] 0.25g 405 C17138000 柠檬黄 Tartrazine [1934-21-0] 0.25g 480 C17048000 日落黄 Sunset Yellow (E110) [2783-94-0]  0.1g  780 C13205000 赤藓红 Erythrosin B disodium salt [16423-68-0] 0.25g 360 C10665200 亮蓝 Brilliant Blue FCF [3844-45-9] 0.25g 360 C14289000 靛蓝 Indigotine [860-22-0] 0.25g 405    人工合成着色剂饮料是人们常用食品。厂家为改善其感官性状，常加入过量的人工合成着色剂。又称人工合成色素，常以苯甲苯蔡等为原料，经磺化偶合缩合等化学反应制成，对人体有一定毒性因此，快速准确检测饮料中人工合成色素的含量具有重要实际意义。市售饮料中常见添加的人工合成色素有食品研究与开发年月期种柠檬黄览菜红靛蓝日落黄胭脂红。　　测定方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法等。以往采用的高效液相色谱法均使用梯度洗脱技术，时间长，操作程序繁锁。山东滕州市鲁创分析仪器有限公司换用适宜流动相洗脱，波长分段检测方法，不经梯度洗脱便可以同时测定多种人工合成色素。时间短，操作程序大大简化，方法分离效果好，结果准确可靠，其灵敏度准确度精密度均达到分析测量要求。现已用于饮料中色素的测定。　　实验部分      主要仪器：高效液相色谱仪、二极管阵列式检测器、色谱柱。      主要试剂：一磷酸二氧钾溶液（临用新配丙酮一水一氨溶液（冰醋酸，甲醇，溶液，种色素标准储备液一‘国家标准制剂厂制造），混合标准应用液临用前逐级稀释配制。所用试剂均为分析纯。　　流动相每次需过滤，脱气。使用去离子水。      样品处理      取样品一加水适量，滴入一滴冰醋酸调至加入目聚酞胺吸附色素，待上清液无色后，去离子水洗净吸附剂，用丙酮一水一氨（l）溶液多次解吸附至吸附剂无色，收集解析液，水浴浓缩至进样前通过滤膜。　　 色谱分析条件       流动相甲醇一磷酸二氢钾（23流速而柱温波长入分段检测一而砚一而双而以后欢峰面积定量，峰鉴别定性进样体积结果与讨论样品处理本文比较了羊毛绒染色氧化铝吸附聚酞胺吸附三种处理方法，发现靛蓝对热敏感羊毛绒染色需加热，会破坏该色素。　　而氧化铝吸附法处理样品，测定时干扰严重，不利于定性定量分析。　　采用聚酞胺吸附法处理样品，简便快速，不破坏色素，干扰少，利于分析，优于前两者，液相色谱仪且换用丙酮一水一氨溶液（氨水一乙醇溶液解吸附，解析效率提高。　　但注意靛蓝对光较敏感，处理好样品应避光保存，尽快测定。　　流动相值及流速选择采用甲醇一磷酸二氢钾缓冲体系，流动相值对分离度保留值影响甚大。　　当或时，种色素出峰发生粘连重叠或拖尾，效果不佳。　　实验磷酸二氢钾为按不同比例与甲醇混合作流动相，结合分离度ID，当选用流动相为时，甲醇一磷酸二氢钾（23）作流动相，流速分离效果良好。　　波长选择在一定范围的波长下，对种色素标准溶液扫描，根据其光谱图分析鉴定。　　柠檬黄览菜红靛蓝在处有较强吸收，胭脂红在处有较强吸收，日落黄在处有较强吸收，根据其出峰顺序采用分段波长测定，一入2一而砚以后沐此条件下的色谱图见图a一柠檬黄一览菜红c一靛蓝一胭脂红旧落黄（而图高效液相色谱法分离种色素混合标准液色谱图食品研究与开发）年期固定相选择实验选用巧柱方法检出限线性范围以所选色谱条件下基线噪声的倍所相当的种色谱标准浓度为检出限，分别为柠檬黄呷览菜红靛蓝胭脂红以日落黄种色素标准浓度为以与峰面积呈良好线性关系，相关系数方法精密度准确度干扰实验配制种色素混合标准溶液，浓度为25砂连续测定次，进行精密度实验，各色素分别为柠檬黄览菜红靛蓝胭脂红日落黄对市售种样品进行平行测定次，计算其相对标准偏差，用加标回收考察方法准确度，样品回收率为80一以于标准混合液（25.以L）中加人苯甲酸山梨酸糖精各（即）按上述方法处理后测定，未发现干扰峰出现，可排除此种物质的干扰。