黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。B1 、B2和G1、G2,就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表,毒性最强的排行“B1”,B表示蓝色,因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外,它还有堂兄弟G1和G2,因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。
Surwit应用方案 应用方案 赛智科技(杭州)有限公司 黄曲霉毒素(B1,B2, G1,G2)的高效液相色谱 HPLC 检测方案 【黄曲霉毒素】 黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。B1、B2和 G1、G2,就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表,毒性最强的排行“B1”,B表示蓝色,因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外,之还有堂兄弟 G1和 G2,因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。 黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免,不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国,都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准,危害就小到可以忽略了。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中,特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品,当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT 的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。 由于黄曲霉毒素在水溶液中会发生荧光淬灭,反相色谱中 B1 和G1两种异构体荧光强度很弱,需要进行衍生化。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类,我国药典在测定黄曲霉毒素时采用碘柱后衍生法。 【样品处理过程】 中药:取供供品粉末15g(过二号筛),精密称定,加入氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2min(搅拌速度大于 11000r/min), 离心5min(离心速度大于 2500r/min),精密量取上清液15ml, 置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔用膜(0.45um)滤过,量取续滤液20ml, 待净化; 大米:取样品25g, 加入5g氯化钠与125ml提取液(70%甲醇-水溶液)混匀,剧烈振荡 20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;取10ml 滤液加入20ml 蒸馏水稀释,过滤,收集滤液作为上样液,取 15ml 该溶液待净化; 植物油:取样品25g,加入125ml提取液(80%乙腈-水溶液)混匀,剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;取10ml虑液加入40ml 蒸馏水稀释,过滤,收集滤液作为上样液,取25ml该溶液待净化; 净化过程需用到黄曲霉免疫亲和柱,净化过程略。 【色谱条件】 色谱柱: C18,4.6mm*250mm, 粒度 5 um 流动相:甲醇-乙腈-水=40:18:42 流动相B:将2.2g一水庚烷磺酸钠与 6.8g磷酸二氢钾溶于500ml水中,与500ml甲醇混合, PH=3.5;两相混合梯度脱洗;波长: 入ex=360nm X em=450nm 流速:0.8mL/min 衍生溶液为 0.05%的碘溶液,衍生泵:0.3ml/min, 衍生温度:70℃ 【谱图】 网址: www.surwit.com www.hplc.com.cn 赛智科技(杭州)有限公司 【仪器配置】 高压输液泵 0.001-9.999ml/min 2台 荧光检测器 190-700mum 1台 柱后衍生系统 1台 手动进样阀 含触发开关 1套 阀安装支架 1套 液相色谱柱 C18 1支 微量进样器 200ul 1支 维护工具包 液相色谱专用启动工具 1套 色谱工作站 Clarify 1套 超声清洗仪 1套 真空抽滤装置 带真空泵 1套 赛智科技(杭州)有限公司E-mail: surwit@hplc.com.cn浙江省杭州市东冠路金盛科技技号楼-楼Tel: ax:
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