大米、植物油中黄曲霉毒素检测方案

Surwit应用方案 应用方案 赛智科技(杭州)有限公司 黄曲霉毒素(B1，B2， G1，G2)的高效液相色谱 HPLC 检测方案 【黄曲霉毒素】 黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。B1、B2和 G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表，毒性最强的排行“B1”，B表示蓝色，因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外，之还有堂兄弟 G1和 G2，因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。 黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免，不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国，都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准，危害就小到可以忽略了。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT 的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。 由于黄曲霉毒素在水溶液中会发生荧光淬灭，反相色谱中 B1 和G1两种异构体荧光强度很弱，需要进行衍生化。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类，我国药典在测定黄曲霉毒素时采用碘柱后衍生法。 【样品处理过程】 中药：取供供品粉末15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2min(搅拌速度大于 11000r/min)， 离心5min(离心速度大于 2500r/min)，精密量取上清液15ml， 置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔用膜(0.45um)滤过，量取续滤液20ml， 待净化； 大米：取样品25g， 加入5g氯化钠与125ml提取液(70%甲醇-水溶液)混匀，剧烈振荡 20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；取10ml 滤液加入20ml 蒸馏水稀释，过滤，收集滤液作为上样液，取 15ml 该溶液待净化； 植物油：取样品25g，加入125ml提取液(80%乙腈-水溶液)混匀，剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；取10ml虑液加入40ml 蒸馏水稀释，过滤，收集滤液作为上样液，取25ml该溶液待净化； 净化过程需用到黄曲霉免疫亲和柱，净化过程略。 【色谱条件】 色谱柱： C18，4.6mm*250mm， 粒度 5 um 流动相：甲醇-乙腈-水=40：18：42 流动相B：将2.2g一水庚烷磺酸钠与 6.8g磷酸二氢钾溶于500ml水中，与500ml甲醇混合， PH=3.5；两相混合梯度脱洗；波长： 入ex=360nm X em=450nm 流速：0.8mL/min 衍生溶液为 0.05%的碘溶液，衍生泵：0.3ml/min， 衍生温度：70℃ 【谱图】 网址： www.surwit.com www.hplc.com.cn 赛智科技(杭州)有限公司 【仪器配置】 高压输液泵 0.001-9.999ml/min 2台 荧光检测器 190-700mum 1台 柱后衍生系统 1台 手动进样阀 含触发开关 1套 阀安装支架 1套 液相色谱柱 C18 1支 微量进样器 200ul 1支 维护工具包 液相色谱专用启动工具 1套 色谱工作站 Clarify 1套 超声清洗仪 1套 真空抽滤装置 带真空泵 1套 赛智科技(杭州)有限公司E-mail： surwit@hplc.com.cn浙江省杭州市东冠路金盛科技技号楼-楼Tel： ax：