水果、蔬菜和谷物中农药多残留及确证检测方案(固相萃取)

深圳逗点生物技术有限公司-biocomma biotechco.，ltd. QuEChERS EN方法用于大米中农药多残留的检测 (CopureM QuEChERS) 一、实验目的 本研究利用分散固相萃取(QuEChERS) 法作为样品的前处理方法， GC-ECD和LC-MS/MS法作为分析方法，检测大米中的农药多残留。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、应用范围 本方法适用于含脂类和蜡类物质较多的水果、蔬菜和谷物等中农药多残留检测及确证。 三、参考标准 《BSEN 15662：2008 Foods of plant origin-Determination of pesticide residues using GC-MSand/orLC-MS/MS following acetonitrile extraction/partitioning and clean-up by dispersive SPE-QuEChERS-method》。 四、实验材料 Biocomma° CopureMQuEChERS提取管50 mL(Cat. No. COQ050010)。 Biocomma° CopureM QuEChERS净化管15 mL(Cat. No. COQ015032)。 五、实验步骤 1、样品提取 将大米在-18℃下冷冻，彻底粉碎。准确称取粉碎好的大米10.0 g于50 mL离心管中，加入10mL乙腈，振摇1min；再加入QuEChERS萃取盐包(4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠和0.5g柠檬酸氢二钠)，用力振摇1 min，4000 r/min离心5 min。上层乙腈层待净化。 2、样品净化 取待净化的上层乙腈层6 mL于15 mL QuEChERS净化管(900 mg MgSO4、150 mg PSA和150 mg C18)中，涡旋1 min，4000 r/min离心5 min。取上清液1 mL，过0.22 um滤膜，待上机测试。 3、仪器条件 1.GC-ECD条件 气相仪器： Agilent 7890A 色谱柱： Agilent J&W HP-5， 30mx0.32 mm， 0.25 um或者相当者 进样口温度：220℃ 检测器温度：300℃ 升温程序： 180℃(保持2 min) 以10℃/min升温到230℃(保持2 min) 以2℃/min升温到260℃(保持2 min) 以25℃/min升温到270℃(保持1.6 min) 载气：氦气 流速：1.6mL/min 进样方式：分流进样，分流比10：1 2.LC-MS/MS条件 色谱柱：Venusil ASB C18(2.1 mmx150 mm，5 um) 质谱仪： API4000 流动相： A： 0.1%HCOOH+10 mM乙酸铵(取1 mL HCOOH和0.77 g乙酸铵至1L水溶液中) B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱 表1流动相梯度洗脱程序 时间/min A(%) B(%) —— 95 5 1.50 95 5 6 5 95 11 5 95 11.01 95 5 15 95 5 流速：0.35 mL/min 柱温：40℃ 进样体积：5 pL 离子源：电喷雾(ESI) 扫描模式：正离子模式 检测方式：多反应监测(MRM) 表2质谱仪离子源参数 Source/Gas Collision Gas(CAD) 6 Curtain Gas(CUR) 12 lon Source Gas 1(GS1) 50 Ion Source Gas 2(GS2) 50 Ion Spray Voltage(IS) 5500 Temperature(TEM) 550 Interface Heater(ihe) ON 表3氨基甲酸酯类农药各组分名称、保留时间及母离子和子离子检测离子对 物质名称 保留时间(min) 检测离子对 DP EP CE CXP 涕灭威 7.06 208.1>89.1 30 10 22 12 208.1>116 30 10 10 12 克百威 7.13 222.3>123.1 48 10 16 12 222.3>165.2 48 10 31 12 灭多威 6.51 163.2>88.1 36 10 15 12 163.2>106.1 36 10 12 12 涕灭威砜 6.25 223.1>86.2 69 10 21 12 223.1>148.1 69 10 13 12 涕灭威亚砜 6.10 207.1>132.2 60 10 13 12 207.1>89.1 60 10 22 12 甲奈威 7.18 202.1>145.2 58 10 12 12 202.1>127.1 58 10 40 12 多菌灵 6.82 192.1>160.1 68 10 34 12 192.1>132.2 68 10 42 12 六、实验结果 1、大米中农药多残留的添加回收结果 表40.2 mg/kg大米中有机氯类、拟除虫菊酯类农药多残留的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 五氯硝基苯 82.0 81.0 83.0 82.00 1.22 百菌清 84.0 86.0 91.5 87.17 4.46 乙烯菌核利 84.0 81.5 84.0 83.17 1.74 三唑酮 103.5 99.0 102.5 101.67 2.32 腐霉利 98.4 94.5 97.5 96.80 2.11 异菌脲 103.5 98.0 100.0 100.50 2.77 联苯菊酯 107.5 101.5 107.5 105.50 3.28 甲氰菊酯 86.5 81.5 85.0 84.33 3.04 高效氟氯氰菊酯 92.0 87.5 88.4 89.30 2.67 氟氯氰菊酯 87.6 85.45 85.8 86.28 1.34 氯氰菊酯 71.5 76.85 71.2 73.18 4.34 氟氰戊菊酯 131.2 123.2 124.5 126.30 3.40 氰戊菊酯 102.5 98.5 88.0 96.33 7.77 氟胺氰菊酯 92.9 90.4 90.7 91.33 1.49 溴氰菊酯 117.5 111.5 109.0 112.67 3.88 表5 0.05 mg/kg大米中氨基甲酸酯类农药多残留的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 涕灭威 94.6 93.6 99.2 95.80 3.12 克百威 89.6 91.6 91.2 90.80 1.17 灭多威 107.6 114.4 111.2 111.07 3.06 多菌灵 75.8 82.0 82.6 80.13 4.70 涕灭威砜 97.2 104.4 101.2 100.93 3.57 涕灭威亚砜 93.0 100.0 101.6 98.20 4.66 甲奈威 86.6 85.8 92.6 88.33 4.21 2、大米中农药多残留检测色谱图 图1添加水平为0.2mg/kg大米中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留检测色谱图 图2添加水平为0.05 mg/kg大米中氨基甲酸酯类农药多残留检测色谱图 9.0e5 8.5e58.0e5·7.5e57.0e56.5e5·6.0e5·5.5e55.0e54.5e54.0e5·3.5e53.0e52.5e5·2.0e5-1.5e51.0e5 5.0e4 0.0 3 5.15 1涕灭威亚砜 2涕灭威砜 3灭多威 4多灵菌 5涕灭威 6克百威 7甲奈威 6.70 467 7.43 本号：QuEChERS-ww.biocomma.cn QuEChERS EN方法用于大米中农药多残留的检测（Copure TM   QuEChERS）一、实验目的本研究利用分散固相萃取（QuEChERS）法作为样品的前处理方法，GC-ECD和LC-MS/MS法作为分析方法，检测大米中的农药多残留。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。二、应用范围本方法适用于含脂类和蜡类物质较多的水果、蔬菜和谷物等中农药多残留检测及确证。三、参考标准《BS EN  15662:2008   Foods  of plant  origin—Determination     of  pesticide   residues  using  GC-MS and/or  LC-MS/MS  following   acetonitrile   extraction/partitioning      and clean-up  by  dispersive  SPE—QuEChERS-method》。四、实验材料Biocomma Copure TM QuEChERS提取管50 mL(Cat. No. COQ050010)。Biocomma Copure TM QuEChERS净化管15 mL(Cat. No. COQ015032)。五、实验步骤1、样品提取将大米在-18 ℃下冷冻，彻底粉碎。准确称取粉碎好的大米10.0  g于50 mL离心管中，加入10 mL乙腈，振摇 1min;再加入QuEChERS萃取盐包（4 g无水硫酸镁、1  g氯化钠、1 g柠檬酸钠和0.5 g柠檬酸氢二钠），用力振摇1 min，4000 r/min离心5 min。上层乙腈层待净化。2、样品净化取待净化的上层乙腈层6  mL于15 mL  QuEChERS净化管(900 mg  MgSO4、150  mg PSA和150  mg  C18)中，涡旋 1 min，4000 r/min离心5 min。取上清液1 mL，过0.22 μm滤膜，待上机测试。3、仪器条件1.GC-ECD条件气相仪器：Agilent 7890A色谱柱：Agilent J&W HP-5，30 m × 0.32 mm，0.25 μm或者相当者进样口温度：220 ℃检测器温度：300 ℃升温程序：180 ℃(保持2 min)以10 ℃/min升温到230 ℃(保持2 min)以2 ℃/min升温到260 ℃(保持2 min)以25 ℃/min升温到270 ℃(保持1.6 min)载气：氦气流速：1.6 mL/min进样方式：分流进样，分流比10:12.LC-MS/MS条件色谱柱：Venusil ASB C18(2.1 mm×150 mm, 5 μm)质谱仪：API 4000流动相：A:  0.1% HCOOH+10 mM乙酸铵(取1 mL HCOOH和0.77 g乙酸铵至1 L水溶液中)             B:  甲醇洗脱方式：梯度洗脱表1  流动相梯度洗脱程序流速：0.35 mL/min柱温： 40 ℃进样体积：5 μL离子源：电喷雾(ESI)扫描模式：正离子模式检测方式：多反应监测(MRM)表2  质谱仪离子源参数表3  氨基甲酸酯类农药各组分名称、保留时间及母离子和子离子检测离子对六、实验结果1、大米中农药多残留的添加回收结果表4  0.2 mg/kg大米中有机氯类、拟除虫菊酯类农药多残留的添加回收结果表5  0.05  mg/kg大米中氨基甲酸酯类农药多残留的添加回收结果2、大米中农药多残留检测色谱图图1  添加水平为0.2  mg/kg大米中有机氯和拟除虫菊酯类农药多残留检测色谱图图2  添加水平为0.05  mg/kg大米中氨基甲酸酯类农药多残留检测色谱图