乳制品及特殊膳食中农兽药残留检测方案

2S CIENTIFICAN_C_GCMS-003 气相色谱-质谱法测定牛奶中的双甲脒及其代谢物残留量 吕建霞余翀天赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 单四级杆质谱仪；兽药；TG-5色谱柱 目标 建立高效的气相色谱质谱检测方法，灵敏、快速测定牛 奶中的双甲脒及其代谢物的含量牛奶中的双甲脒及其代谢物在酸性条件下水解为2，4-二甲基苯胺，正己烷提取后，气质联用仪分析方法检出限远远低于食品安全国家标准中规定的双甲脒最大残留限量 0.05mg/kg 引言 双甲脒(Amitraz)是一种广谱性的杀螨剂，曾在国内外被大量使用，研究发现其代谢产物2，4-二甲基苯胺具有致癌作用，并且双甲脒可通过食物链的传递，吸入、摄入或经皮肤吸收后会引起中毒，对人体造成潜在的致癌危险“。因此，我国农业部、卫生部发布的《农药安全使用规定》将它列为高毒杀螨剂，明确规定禁止使用，CAC 和 EU 也禁止其使用。 仪器 Trace1310-ISQ气相色谱质谱联用仪，配E源(ThermoScientific)； AS1310 自动进样器( Thermo Scientific) 恒温干燥箱 ( Thermo Scientific ) 目前，双甲脒残留量测定方法有气相色谱法、液相色谱法25。传统测定双甲脒分析方法是气相色谱法，用七氟丁酸酐衍生2，4-二甲基苯胺和双甲脒的脱水缩合产物进行GC分析，但是加入衍生化试剂操作繁琐、且毒性较大。或者以液相色谱法直接测定双甲脒母体含量，此方法忽视了双甲脒在酸性条件下会分解成2，4-二甲基苯胺的特性，只测定双甲脒母体含量作为双甲脒的总残留量是不科学的。 离心机(Thermo Scientific )天平漩涡混合器(Thermo Scientific)耗材色谱柱： TG-5MS(30mx0.25 mm×0.25 um) ( Thermo Scientific，PN：26098-1420) 试剂与标准品 双甲脒标准品：含量≥99%；2，4-二甲基苯胺标准品：含量>95% 本方法是将牛奶中的双甲脒水解为2，4-二甲基苯胺，用气相色谱-质谱进行定性、定量，结果是双甲脒和其代谢产物的总残留量。方法操作简单，检出限远低于食品安全国家标准中规定的双甲脒最大残留限量0.05mg/kg。 氢氧化钠：优级纯；盐酸：优级纯；无水硫酸钠：优级级；正己烷：色谱纯(Thermofisher) ( 1mol/L盐酸溶液：取浓盐酸8.3mL，用水稀释定容至100mL ) 4mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠16克，用水溶解并定容至100mL 储备液：准确称取10.0mg 双甲脒和2，4-二甲基苯胺标准品，分别用正己烷溶解稀释并定容至100mL，得到100mg/L标准储备液，储存在冰箱中备用。 标准中间液：双甲脒和2，4-二甲基苯胺储备液分别移取1mL，用正己烷稀释定容至100mL，得浓度为1mg/L的标准中间液。 称取牛奶样品5.0克于50mL离心管中，加入1mol/L盐酸溶液10mL，于60℃恒温干燥箱中静置30min，冷却，10000rpm 离心10min，取上清液于另一离心管中，加入4mol/L氢氧化钠溶液10mL， 正己烷5mL， 漩涡混匀，静置 5min， 10000rpm 离心 10min， 取上层正己烷液加入无水硫酸钠1g去除水分，供气相色谱质谱仪测定。 色谱柱： TG-5MS(30mx0.25 mm×0.25 pm) ； 柱温：50C(1min )， 20℃ /min 到 250℃(10min)； 进样模式：不分流进样，不分流时间为 1min； 进样量：1pL；进样口温度：260℃； 载气：氦气(99.999%)，恒流模式， 1mL/min； 质谱离子源温度：300℃，传输线温度：300℃；扫描模式：选择离子监测模式， m/z=106，120，121，定量离子为121 前处理条件的优化：双甲脒在酸性条件下水解较快并且水解较彻底，水解生成的2，4-二甲基苯胺为碱性化合物，在酸性条件下与酸成盐，溶于水，在碱性条件下，溶于大多数有机溶剂。因此水解后，加入碱性溶液再加入正己烷提取。 仪器分析方法优化：以全扫描的方式对2，4-二甲基苯胺进行测定，得到其质谱图(图1)。根据2，4-二甲基苯胺的全扫描质谱图和保留时间，选择2，4-二甲基苯胺的定性和定量的特征目标监测离子。测定时，可根据标准物和待测物的定量离子流图中的峰面积，外标法定量。确证时，可根据碎片离子及其丰度比作为其阳性判别的依据。在选定的色谱条件下，标准品的色谱图见图2。 图1.2，4-二甲基苯胺的质谱图 图2.1.0mg/L2，4-二甲基苯胺标准溶液色谱图 线性关系及测定低限：准确移取2，4-二甲基苯胺适量，添加到空白样品按上述前处理方法处理得到的基质溶液中，分别配制得到浓度为0、5、10、20、40、100ug/L的基质标准工作液，供气相色谱质谱测定。以测定峰面积 图3.2，4-二甲基苯胺的线性情况 式中： X---样品中双甲脒含量， ng/g； C---试样溶液中2，4-二甲基苯胺的浓度， ng/mL； V---萃取用正己烷的体积， mL； 图4.样品空白和样品加标谱图(黑色谱图为样品空白，蓝色谱图为样品加标，2，4-二甲基苯胺出峰时间为 6.29min) 表1.空白牛奶样品添加实验回收率和精密度 添加水平(ug/kg) 5.0 20.0 1 3.79 17.29 2 3.94 14.75 3 4.13 17.49 4 4.03 18.44 5 3.69 16.33 平均值 3.92 16.86 RSD(%) 4.53 8.28 平均回收率(%) 73.8 81.7 样品中的双甲脒在酸性条件下水解为2，4-二甲基苯胺，碱化后用正己烷提取，采用赛默飞世尔新型的气相色谱质谱仪检测和确证，外标法定量。结果表明，双甲脒的平均回收率为73.8-81.7%，5次平行测定的RSD值≤8.28%，方法测定低限为 2ng/g。此法无需衍生，操作简单，科学准确，灵敏度高，能够满足牛奶中双甲脒的残留分析要求。 ( [1]吴建明，梁婉华，张云英等.双甲脒毒性研究.化工劳 动保护，19 9 2，13(3)：134-135 ) ( [2]郑永权，姚建仁，邵向东等.蜂蜜中双甲脒残留量检测 方法.农药科学与管理，2000，21(3)：14-16 ) ( [3]赵增运，吴斌，沈崇钰等.高效液相色谱法测定蜂蜜中 的双甲脒残留.中国养蜂，2005，56(5)：4-5 ) ( [4]王元鸿，荣会，张莹等.食品中双甲脒残留量气相色谱 测定方法研究.中国食品卫生杂志，2001，13(6)：20-22 ) ( [5]杨容.气相色谱法检测茶叶中痕量双甲脒.食品科技， 2006，2：94-95 )