烟草中农残检测方案

方法包简介 仪器简介 烟草中农残检测的整体解决方案及方法包介绍 赛默飞世尔科技 三重四极杆串接气质 目录 二. 四.* 五.样品前处理方法 六.仪器和设备 七.7方法包使用简介 方法包简介仪器简介 5三.化合物简介 6相关政策及法规 11111112 八.应用文章 16 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便地使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法、数据处理方法( TraceFinder 方法文件夹)、相关应用文章、相关标准、色谱柱信息、前处理方法、数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。 由于 TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder 软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、CAS号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用 TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作信息。 方法包(Method Kit ) TSQ 8000 Evo 三重四极杆串接气质联用仪 秉承着在气相色谱三重四极杆质谱中技术的一贯领先优势， Thermo Fisher Scientific 在推出 TSQ 8000 之后再次创新，推出了更新的一款气相串接质谱仪 TSQ 8000 Evo，该款高效的 GC/MS/MS 提供了永不停机的生产率，其出色的灵敏度，超快的扫描速度，简便的 MSMS功能，满足最苛刻的定量定性分析要求，为食品安全、环境分析、法医和制药应用分析提供基础。 TSQ 8000 Evo 主要特点： AutoSRM 功能自动优化二级离子对信息； 。定时保留时间 SRM 功能(T-SRM)和定时保留时间 SIM 功能(T-SIM) 使高通量检测成为可能，并且优化方法设置参数，无需分配时间段； ·最新的 TraceFinder 软件，提供最新的技术平台，界面友好的色谱分析软件，可以直接调用数据库信息自动建立数据处理方法及进样方法； ·高达800 MRM/s的扫描速度，即使在极限高速扫描条件下仍不会过多损失灵敏度； 。方法桥可以快速转换其他仪器或者其他公司的质谱方法； ·在质谱不泄真空的情况下，更换整个离子源，节省常规系统维护时间，简化操作； ·双灯丝设计，并且灯丝在同一侧； ·离子源上具有双加热区，有效去除基质对离子源的污染，节省维护时间； ·弯曲的预四极杆，有效去除中性噪音，减少背景并提高灵敏度。 烟草标准于2014年2月开始正式实施。 表A.1168种农药及2种内标物质的中英文名称及CAS 号 2014年1月15日中国烟草总公司颁布了烟草及烟草制品中多种农药残留量的测定的行业标准 YQ/T 47.1-2014，其中第一部分为串接气质检测农药残留的方法。该标准于2014年2月10正式实施。 2014年3月24日中国烟草总公司又颁布了 YQ 50-2014 烟最农药最大残留限量，规定了烟叶中123种农药的最大残留限量。该限量标准于同年4月15日正式实施。 五.样品前处理 按照 YQ/T 47.1-2014 烟草及烟草制品中多种农药残留量的测定方法来进行前处理 提取：称取2g样品于50mL具盖离心管中，精确至0.01g，加入10 mL水(4.1)，手持离心管振荡直至样品与水充分混合后，静置 10 min。另别多取 10 mL 乙腈(4.2)和0.1 mL 混合内标工作溶液(4.11.4)于该离心管中，并置于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000 r/min 速率振荡 2 min。将离心管在(-18℃~-20℃)条件下冷冻保存10 min 后，取出。向离心管中分别加入5 mL 甲苯(4.3)、4g无水硫酸镁(4.4)、1g氯化钠(4.5)、1g柠檬酸钠(4.6)、0.5g柠檬酸氢二钠(4.7)，立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000 r/min 速度振荡 2 min， 然后以4000 r/min 离心5 min。收集上层清液备用。 净化：移取1.5mL样品提取液上层清液(7.1)于2mL离心管中，加入150 mg 无水硫酸镁(4.4)和50 mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂(4.8)，于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000 r/min 速率振荡 2 min， 以4000 r/min 离心5 min， 收集上层清液，待检测分析。 六.仪器和设备 仪器： Thermo ScientificM气相色谱三重四极杆串接质谱仪 TSQ 8000Evo。 设备：漩涡混合振荡仪、离心机、氮吹浓缩仪。 色谱柱： TR-Pesticide lI (30 m*0.25 mm*0.25 um， 带5m预柱)毛细管色谱柱 (Thermo ScientificM)。C10保留时间为18.90 min。 七.方法包的使用 1.进样方法使用：直接使用方法包中 meth 结尾的文件，进行进样分析。 不同仪器配置可能稍有不同，可以参考以下方法截图。初次使用此方法，可将MS 方法中的 TimeWindow 设置到 4-5 min， 等确定了每个化合物的保留时间后，再将 Time Window 改到 1-2 min。 2.将 lobacco pesticide 这个方法文件拷贝到 C：\TraceFinderData\32\InstrumentMethods 中。 3.数据处理方法建立：拷贝方法包中的文件夹 到 C：\TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以直接在TraceFinder 软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。 在 Instrument method 中选择下拉菜单的 Tobacco pesticide， 保存这个 Master Method。 子对信息，挑选离子对信息找到化合物，所有的步骤均是自动完成，龙，一点即可，极大得提高分析效率，简化方法流程。世龙 TSQ 8000 Evo 三重四极杆串接气质快速检测烟草中农药残留 TSQ 8000 Evo；烟草基质；农药残留；快速筛查；方法包 2.前言 2014年1月15日中国烟草总公司颁布了烟草及烟草制品中多种农药残留量的测定的行业标准 YQ/T 47.1一2014，其中第一部分为串接气质检测农药残留的方法。该标准于2014年2月10正式实施。赛默飞世尔科技针对这一行业标准，开发了烟草中检测多农残的方法。 本实验用 TSQ 8000 Evo 结合赛默飞世尔科技农残分析色谱柱(TR-pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 pm)分析烟草中的122种农药残留，得到了非常出色的结果。各种农药的最低检测限在0.004ppb-0.75ppb之间，在5 ppb-200 ppb的范围有良好的线性，且用10 ppb 样品连续5针进样，得到 RSD 在1.01%-9.69%之间，表明此方法具有良好的重现性。 3.实验部分 3.1仪器和色谱柱 TSQ 8000 Evo 三重四极杆气相色谱质谱联用仪(ThermoScientificM美国)， TR-pesticide Ⅱ农残分析柱(30 m*0.25mm*0.25 um 带5m预柱) 3.2仪器方法 GC 方法： 传输线温度：300℃。 PTV 进样口：起始温度为70℃，进样时间0.05 min；然后以4.5℃/min 升至280℃，保持1min， 将所有化合物通过程序升温的进样方式转移至色谱柱；随后以14.5C/min 升至320℃，保持5 min， 设置进样口的清洁模式。不分流进样， 载气：恒流，1.2 mL/min； 柱温箱：40℃起始保持1.5 min， 以 25℃/min 升至90°，保持1.5 min； 再以 25C/min 的速率升至180℃；随后以5C/min 的速率升至280℃；最后以 10℃/min 的速率升至300℃， 保持5 min。整个升温程序35 min. 进样量：2pl 质谱方法： 离子源温度：300℃， 灯丝电流为25uA， 采用 T-SRM 方法，无需分时间段。部分方法如图1所示(总共 402对 SRM 离子对)： 图1： T-SRM方法截图 3.3前处理方法提取 称取2g样品于50mL 具盖离心管中，精确至 0.01 g， 加入10mL水(4.1)，手持离心管振荡直至样品与水充分混合后， 静置 10 min。分别多取10mL 乙腈(4.2)和0.1 mL混合内标工作溶液(4.11.4)于该离心管中，并置于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000 r/min 速率振荡 2 min。将离心管在(-18℃~-20℃)条件下冷冻保存 10 min 后，取出。向离心管中分别加入5mL甲苯(4.3)、4g无水硫酸镁(4.4)、1g氯化钠(4.5)1g柠檬酸钠(4.6)、0.5g柠檬酸氢二钠(4.7)，立即手持离心管剧烈振荡以防结块，再置于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000 r/min 速度振荡2 min，然后以4000 r/min离心5 min。收集上层清液备用。 净化 移取 1.5mL样品提取液上层清液(7.1)于2mL离心管中，加入150 mg 无水硫酸镁(4.4)和50 mg N-丙基乙二胺键合固相吸附剂(4.8)，于漩涡混合振荡仪(5.2)上以2000r/min 速率振荡2 min， 以4000 r/min 离心5 min，收集上层清液，待检测分析。 4.实验结果 4.1 Auto SRM 优化部分化合物的离子对信息 TSQ 8000 Evo 的整个实验流程可以参考图2。 TSQ 8000 Evo自带的 TraceFinder 软件有一个数据库，该数据库包含常规三重四极杆串接气质上分析的1000多种化合物离子对信息，如农药，环境污染物等化合物。所以，当我们需要完成手头上化合物的方法建立时，可以首先参考数据库中的离子对信息。数据库中查不到的化合物离子对信息，可以使用 TSQ 8000 Evo特有的 AutoSRM 软件来自动完成。 图2： TSQ 8000 Evo开发方法的流程示意图 AutoSRM 顾名思义就是可以自动优化化合物 SRM 离子对的软件，该软件通过选择母离子，选择子离子，自动优化碰撞能量这三个步骤可以完成方法优化，极大得简化了常规串接气质建立化合物检测方法的步骤，节省了时间。赛默飞世尔科技全新一代三重四极杆气相色谱质谱联用仪 TSQ 8000 Evo 独有的AutoSRM功能，可以自动优化离子对信息及碰撞能量，并且当一次优化的化合物数目较多时，可以智能得调整进样的次数以期在最少的时间内得到最优化的方法，使得整个方法建立部分更加简单方便。整个AutoSRM的步骤如图1所示： 1)选择母离子 2)选择子离子 3)优化碰撞能量 图3： AutoSRM 示意图 4.2标准曲线 分别配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混标溶液，采用内标法定量，内标为莠去津或者三苯基磷酸酯(按照保留时间来确定以哪种物质为内标，本实验保留时间在 20 min 之前的化合物都以莠去津为内标，20 min 之后以三苯基磷酸酯为内标)。，下表列出所有122种化合物的标准曲线方程以及线性相关系数，可以看出，应用 TSQ 8000 Evo 快速扫描检测这122种化合物，可以得到良好的线性方式，有利于定量的准确性。 表1：122种化合物的线性方程及相关系数(*表示IS) 4.3重现性及最低检出限 用10ppb的样品重复进样5针，检测方法的重现性。所得的重现性结果如下图所示，所有的化合物的重现性在1.01%-9.69%之间(如表2所示)。 分别配置100ppt、200ppt、500ppt、1ppb以及2ppb的样品，按照 S/N 为3和S/N为10来估算化合物的最低检出限及最低定量限。各个化合物的 LOD 和 LOQ如表2所示。 No. 中文名 Compound Name RT RSD 浓度 (ppb) S/N LOD(ppb) LOQ(ppb) 甲氟磷 dimefox 6.68 6.20% 0.5 15 0.100 0.333 2 甲胺磷 Methamidophos 8.13 5.19% 0.2 26 0.023 0.077 3 敌敌畏 Dichlorvos 8.23 5.75% 0.1 44 0.007 0.023 4 二溴磷 Naled 8.23 5.75% 0.1 44 0.007 0.023 5 速灭磷 Mevinphos 9.36 4.87% 0.1 27 0.011 0.037 No.中文名 Compound Name RT RSD 浓度(ppb) S/N LOD(ppb) LOQ(ppb) 104 联苯菊酯 Bifenthrin 22.07 2.08% 0.1 6 0.050 0.167 105 甲氧滴滴涕 Methoxychlor 22.23 2.53% 0.2 24 0.025 0.083 106 伏杀硫磷 Phosalone 23.1 1.29% 0.1 16 0.019 0.063 107 丁硫克百威 Azinphos-methyl 23.17 1.92% 0.1 13 0.023 0.077 108 保棉磷 Carbosulfan 23.17 2.49% 0.1 3 0.100 0.333 109 灭蚁灵 Mirex 23.83 2.96% 0.1 24 0.013 0.042 110 氯氟氰菊酯 Cyhalothrin Il (gamma) 23.91 2.15% 0.1 32 0.009 0.031 111 益棉磷 Azinphos-ethyl 24.31 1.24% 0.1 11 0.027 0.091 112 顺-氯菊酯 Permethrin( cis-) 25.34 1.90% 0.5 22 0.068 0.227 113 反-氯菊酯 Permethrin ( trans-) 25.59 1.71% 1 20 0.150 0.500 114 氟氯氰菊酯 Cyfluthrin 26.4 2.04% 2 91 0.066 0.220 115 氯氰菊酯 Cypermethrin 27 1.89% 2 64 0.094 0.313 116 溴氰菊酯 Deltamethrin 29.98 1.90% 2 80 0.075 0.250 117 (E)-烯酰吗啉 Dimethomorph E 30.4 3.96% 0.1 39 0.008 0.026 118 噁唑菌酮 Famoxadone 30.47 4.30% 2 48 0.125 0.417 119 (Z)-烯酰吗啉 Dimethomorph Z 30.87 3.75% 0.1 17 0.018 0.059 120 三唑醇 Triadimenol 16.36，16.59 1.26% 2 46 0.130 0.435 121 氟氰戊菊酯 Flucythrinate(2 peaks) 27.34，27.73 3.04% 0.1 7 0.043 0.143 122 氰戊菊酯 Fenvalerate 28.67，29.06 1.41% 0.5 34 0.044 0.147 表2：122种化合物的最低检出限及重现性(*表示IS) 选取部分化合物在100ppt 时的色谱图： Acephate RT：9.42|100ppt-short Carbaryl RT： 13.98|100ppt-short Chlorfenvinphos-E-trans RT： 16.10|100ppt-short RT：9.42 RT：13.98 100 100 100- 80- (E)-毒虫畏 T 162 16.3 异噁草酮 12.4 100- o，p'-DDD 23.7 23.8 23.9 24.0 24.1 18.9 19.0 19.1 19.2 19.3 17.8 17.9 18.1 18.2 RT(min) RT(min) RT(min) Dimethomorph peak 1 RT：30.42|100ppt-short Endosulfan sulfate RT：20.18|100ppl-short Fenamiphos sulfone RT： 21.63| 100ppt-short Flucythrinate peak 1 RT：27.35|100ppt-short Flucythrinate peak 2 RT：27.74|100ppt-short Hexachlorobenzene RT： 11.84|100ppt-short RT：11.84 100- 六氯苯 20- 11.6 11.7 11.8 11.9 12.0 RT(min) Isoprothiolane RT：17.55|100ppl-short Malathion RT：14.61|100ppl-short Metolachlor RT： 14.84|100ppt-short 100- 80- 异丙甲草胺 20- 14.6 14.7 14.8 14.9 15.0 RT(min) Omethoate RT： 10.65|100ppt-short Oxadixyl RT： 19.05|100ppt-short RT：15.08 100- 14.9 15.0 15.1 RT(min) Phorate RT： 11.46| 100ppt-short Phosphamidon RT：13.44|100ppt-short 100 21.0 21.1 212 RT(min) Pirimicarb RT：13.09|100ppt-short Propoxur RT： 10.76|100ppt-short Tetrachlorvinphos RT：16.89|100ppt-short RT：16.89 100- TM 16.7 16.8 RT(min) 图4： 部分化合物 100 ppt 的色谱图 Parathion (ethyl) RT： 15.08|200ppt-short 对硫磷 15.2 15.3 Piperonyl butoxide RT：21.16|100ppt-short RT：21.15 增效醚 21.3 21.4 蚜灭磷 16.9 17.0 17.1 4.4烟草中农残检测的方法包 方法包是赛默飞世尔科技色谱质谱部应用部门针对客户需求提出的简易仪器使用流程，方法包内所涉及的化合物均为常见的能在 GC/MS 上检测的化合物，如农药残留、多环芳烃、多氯联苯、多溴联苯和多溴联苯醚、邻苯二甲酸酯等。方法包的作用就是能使客户更快更简便得使用仪器，尽快上手。 方法包包括进样方法、数据处理方法( TraceFinder 方法文件夹)、相关应用文章、相关标准、色谱柱信息、前处理方法，数据文件等，客户可以直接调用进样方法和数据处理方法完成化合物的定性定量分析。 由于 TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 进样方法而不是分时间段的扫描方法，原来的进样的方法可以直接调用，即使保留时间会有微小的偏差，也不会影响最终的结果。另外， TraceFinder软件自带的数据库可以直接编辑数据处理方法，数据库里包括化合物的名称、离子对、碰撞能量、定量离子、定性离子、CAS号等信息。同时， TraceFinder 软件可以根据数据处理方法自动关联生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。这样应用TraceFinder 就可以直接生成数据处理方法和部分进样方法。整个过程都是自动化的，几乎不需要操作者手动输入任何操作 信息。 想要快速建立方法时，直接拷贝方法包中的文件夹到 C：\TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以在 TraceFinder软件中打开，这个方法包括数据处理方法和进样方法。 图5：打开方法包 应用 Thermo ScientificM三重四极杆串接气质联用仪 TSQ 8000Evo，可以快速分析烟草中的农药残留。方法学验证表明， 该方法的线性、检出限、RSD 值均满足 YQ/T 47.1—2014 烟草及烟草制品多种农药残留量的测定以及 YQ 50—2014 烟叶农药最大残留限量的要求。应用 Thermo Fisher 方法包，可以快速建立进样方法和数据处理方法，拿来即用，无需从数据库中整合信息建立方法，而是直接用现成的方法，，节省大量时间，提高分析效率。一级和二级高分辨质谱数据，保证了定性和定量结果的可靠性；媲美高端三重四极杆的灵敏度和宽线性范围可轻松定量药物中的痕量杂质。与三重四极杆质谱相比， Q ExactiveFocus 采用一级质谱定量不需要优化母离子，子离子参数，仅利用目标化合物精密分子质量即可实现准确定量，更为方便快速。采用二级高分辨质谱定量可以记录子离子全扫描信息，通过在数据后处理中灵活的挑选更具有专属性的子离子进行定量，有效的排除基质干扰，选择性更好，灵敏度更高。 口 口 赛默飞官方微信 赛默飞官方网站 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 上海(中国总部) 广州 沈阳 武汉 上海浦东新金桥路27号7号楼 广州东风中路410-412号 沈阳市沈河区惠工街10号 武汉东湖高新技术开发区 时代地产中心2405-2406，3001-3004 卓越大厦3109室 高新大道858号A7楼 北京 成都 香港 昆明 北京市安定门东大街28号 成都市武侯区临江西路1号 ( 香港新界沙田，沙田乡事会路138号 新城市中央广场第一座九楼911-915室 ) 云南省昆明市五华区三市街6号柏联 Thermo雍和大厦西楼7层 锦江国际大厦1406 广场写字楼908单元