其他食品中丙烯酰胺检测方案

Agilent 6410 串联四极质谱检测食品中的丙烯酰胺 串联质谱仪具有的高灵敏度检测性能使得对于小分子的丙烯酰胺具有快速、准确地测定。分析定量限设定为10 ng/mL，检测限可以达到1ng/mL，完全满足实际食品的测定。对于实际不同的中国食品进行测定中发现了不同茶叶由于品种、工艺的不同，其可能表现出丙烯酰胺含量的不同。 1概述 丙烯酰胺是一种具有神经毒性的小分子化合物，它主要由游离的天门冬酰胺在食品加工过程中通过美拉德反应形成。I天门冬酰胺和碳水化合物是形成丙烯酰胺必需的物质基础，高温(高于120℃)则是丙烯酰胺形成的关键条件，加工方式、水活度、pH 值等因素也影响其形成。目前食品中丙烯酰胺的分析主要采用气相色谱质谱法 (GC-MS)与液相色谱-串联质谱联用技术 (LC-MS/MS)。2，3，4] 2实验 2.1试剂 丙烯酰酰标准品购买于 Sigma-Aldrich 公司(USA)，乙腈购买于 Burdick & Jackson公司(CAS75-05-8， Muskegon， USA)，甲酸购买于迪马公司，水为 Milli Q. 精确称量10 mg的丙烯酰胺，用水溶解于 10 mL的容量瓶中，配制成1 mg/mL 浓度的标准品，放置于冰箱中保存。用水逐步稀释，配制成10，20，50，100，200，500 ng/mL 的标准溶液进行测定。 2.2样品前处理 1.手工碾碎样品放在烧杯中。 2.称1克碾碎的样品放到 15 ml 带盖的聚丙烯锥形管中。 3.将10 mL水加到样品中。 4 在搅拌器中混合40分钟。 5. 在9000转/分离心管30分钟，迅速取出上清液过滤。 6.将2mL样品放置大旋转过滤管中，0.45omPVDF，9000转/分离心30分钟。 7.用2mL甲醇，随后通过 2 mL水调制 SPE柱。使用 SPE 柱排除甲醛和水。 8.用2mL试验提取物加入 SPE 柱，让提取物完全通过吸附物质，然后用2mL水冲洗。 9.用2mL提取液从 SPE 柱提取丙烯酰胺(10%甲醇：90%水：0.1%蚁酸)。 2.3液相色谱条件 Agilent 1100 系列液相色谱仪，配置有 G1311A四元泵， G1379A 脱气机， G1367A 自动进样器。色谱柱： Eclipse Plus C18， 2.1×150 mm， 3.5 om。流动相为乙乙：0.2%甲酸水溶液=5：95，流速=0.3 mL/min。设定泵的停止时间为3分钟。 2.4质谱条件 Agilent 6410 串联四极杆质谱仪，配置了 ESI离子源。在(+)ESI模式下，采集数据，经实验优化设定质谱参数如下： Capillary 4000 V， Drying Gas11L/min， Neb Press 35 psi， Gas Temp 350℃，Fragmentor 100， Skimmer 15， OctDc1 (Skim2)45 V， Oct RF 500 V，碰撞气为高纯氮气，Q1和Q3的分辨率均为单位质量分辨。MRM模式下的参数如下： transition 为 72->55，碰撞能量10V。 3结果和讨论 3.1标准曲线和线性范围 将用户配制的系列浓度丙烯酰胺溶液，按照前面的方法进行 LC/MS/MS分析，建立标准曲线。以待测物质浓度(C)为横坐标，待测物的质谱峰面积(Y)为纵坐标，忽略原点且设定权重因子为 1/C 进行回归计算，求得的直线回归方程即为标准曲曲，见图1。丙烯酰胺的直线回归方程为Y=43.8290X+137.6837，相关系数 R2为0.9977，线性范围为10~500 ppb，最低定量浓度为 10 ng/mL。 3.2方法的精密度和准确度 对于10，50，100， 500 ng/mL浓度的丙烯酰胺溶液进行 LC/MS/MS分析，每一浓度进行5样本分析，所得的 RSD 见表1。实验结果由 Agilent 的Mass Hunter 软件进行计算。从结果可以看出，标准品的日内偏差均小于10%。 3.3 实际应用 对于不同品种的6个实际样品进行了测试、分析，结果见表1. 图1.丙烯酰胺的校正曲线 表1.不同浓度丙烯酰胺测定的精密度结果 Compounds Concentration RSD 丙烯酰胺 (ng/mL) (%) 10 6.9 50 3.15 100 4.17 500 3.31 图2为腐乳中丙烯酰胺的测定结果。丙烯酰胺的保留时间在上述液相色谱条件下为1.5分钟左右。从实际样品看，在保留时间1.3分钟处有一个明显的色谱峰，怀疑为丙烯酰胺。添加5 ppb水平的丙烯酰胺，可以看见在保留时间1.55分钟出现了一个色谱峰，该色谱峰为丙烯酰胺，从而判断保留时间1.3分钟的色谱峰为腐乳中的一个干扰峰。 图3为红茶4中丙烯酰胺的测定结果。在保留时间1.55分钟左右为丙烯酰胺，为了进一步确证，添加5 ppb 水平的丙烯酰胺。从添加丙烯酰胺强后的结果可以看出，未添加前，色谱峰的离子强度为14counts，添加后变为 45counts，信号强度明显增强，说明该色谱峰确实为丙烯酰胺。由测定的含量计算可知，其低于10 ppb 水平，对于人体的危害很小。 图2.腐乳中丙烯酰胺的MRM图：上为实际样品的测定结果；下图为添加5 ppb丙烯酰胺水平后测定的MRM图 图3.为红茶4中丙烯酰胺的MRM图：上为实际样品的测定结果；下图为添加5 ppb丙烯酰胺水平后测定的MRM图 6结论 禾用安捷伦6410 串联质谱 (LC-MS/MS) 方法可以快速、准确地测定食品中的丙烯酰胺的含量。 7致谢 感谢中国农业大学食品与工程学院赵广华教授和陈芳副教授完成了实际样品的前处理工作。 ( 参考文献 ) ( 5. Yu Zhang，Genyi Zhang， Ying Zhang. J. Chromatogr. A. 1075(2005)?：1 ) ( 6. H.Ono，Y.Chuda，M.Ohnishi-Kameyama etc. Food Additives and Contaminants， 2003，20(3)：215 ) ( 7 . Thierry Delatour， Adrienne Perisset， TillGoldmann etc. J. Agric. Food Chem.， 2004， 52 (15)：4625 ) ( 8. Denis Andrzejewski， John A. G. Roach， Martha L. Gay etc. J. Agric. Food Chem.， 2004，52(7)：1996 )