调味品中添加及非法添加检测方案

AN_C_LC-54 冉良骥 金燕赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 高效液相色谱；乙酰磺胺酸钾； WAX-1色谱柱 目的 利用高效液相色谱仪，采用 WAX-1色谱柱建立食醋中安赛蜜的检测方法，在现有国家标准和参考文献基础上，进一步消除基质干扰，确保分析过程快速、准确。 引言 安赛蜜(化学名：乙酰磺胺酸钾 Acesulfame-k， 又称AK糖)， 属第四代合成甜味剂，其甜度为蔗糖的200倍，具有口感好，对热、酸稳定性好、安全性高等特点，我国卫生部于1992年5月已正式批准安赛蜜用于食品、饮料领域。但在食 图1安赛蜜化学机构 醋酿造工业中，为了确保产品的原 始风味，防止商家借助添加剂擅自改变醋液口感并进行商业炒作，在GB 2760-2011食品安全国家标准《食品添加剂使用标准》中规定，安赛蜜在食醋中不得检出。 目前安赛蜜常见的国家标准及文献方法如表1所示。 由表1内容可知，目前安赛蜜检测常用洗脱系统为硫酸铵或醋酸铵体系，分析柱通常为 C18色谱柱，但采用上述方 法检测食醋中的安赛蜜时发现：由于检测波长接近末端吸收，基线噪音较大(特别是醋酸盐体系)；同时由于食醋的基质干扰较强，导致难以通过检测结果直观判定食醋样品中是否含有安赛蜜。 表1.安赛蜜的检测方法 方法出处 样品基质 色谱柱 流动相 检测波长 国家标准 饮料 C18色谱柱 0.02M 硫安铵·甲醇·乙腈-10%硫酸 214nm GB/T 5009.140-2003 (800：150：50：1) 方法开发报告 APPBJ-LC-090728 食品 C18色谱柱 0.02M 醋酸铵-甲醇(90：10) 230nm 文献3 液体调味料 C18色谱柱 0.02M醋酸铵-甲醇(93：7) 230nm 阴离子交换结合反相分离的混合模式，以磷酸盐-乙腈洗脱系统实现了安赛蜜色谱峰与基质成份的良好分离，无需复杂前处理过程(简单稀释过滤即可)，方法快速简便(测试周期约为10min)，灵敏度高(检测限按供试品取样量折算可达0.8 ug/ml， 而 GB/T 5009.140-2003的方法检测限为4 ug/ml)，精密度和回收率好，为食醋类样品中安赛蜜的测定提供了较好的方法参考。 材料与方法 仪器 高效液相色谱仪(Thermo Scientific Dionex LPG 3400 系列，包括有带在线脱气单元的低压四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，二极管阵列检测器。) 超纯水机 (Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC/UF xCAD plus，P/N： 50136146) 针式过滤器(Fisherbrand，尼龙膜，孔径0.45 pm，P/N：CNG#431225) 试剂和对照品 乙腈(色谱纯， Fisher Chemical， P/N：A998-4) 磷酸二氢钾(分析纯， Acros， P/N：424205000) 氢氧化钠(优级纯， Acros， P/N： 134070010) 结果与讨论标准品色谱图(0.5pg/ml) 安赛蜜(含量99.5%， Dr. ErenstorferGmbH ， P/N：10010800) 标准品溶液制备 精密量取安赛蜜适量，以纯水逐级稀释为浓度分别为20.0、10.0、5.00、2.00、1.00、0.50、0.05、0.025 pg/ml的标准工作溶液。 样品溶液制备 精密量取样品1.00ml， 加水稀释定容至100ml，过0.45 pm针式过滤器(尼龙膜)后待测。 加标溶液制备 精密量取样品1ml，准确加入5ml标准品溶液(浓度10 ug/ml)，加水稀释定容至100ml， 过0.45 pm针式过滤器(尼龙膜)后待测。 色谱条件 分析柱： Acclaim Mixed-Mode WAX-1 3pm， 3.0×150mm(P/N：001056， S/N：070088) 流动相：100mM磷酸盐缓冲液(pH6.8)-乙腈(80：20)流速：0.8 ml/min 进样量：10pL 柱温：30℃ 图3.羊品2#及加标样品色谱图 (下-样品；上-加标样品，安赛蜜色谱峰纯度指数994) 检测波长的选择 通过 DAD 检测器测得安赛蜜色谱峰的最大吸收波长为 227nm，由此确定方法检测波长 图4.安赛蜜紫外吸收图谱 色谱柱及流动相的选择 分别选择 Acclaim C18、Acclaim PA2、Acclaim WAX-1色谱柱对样品和对照进行分离，结果发现Acclaim PA2 色谱柱对安赛蜜保留较弱，峰形不佳(见图5)；采用 Acclaim C18 分析，杂峰洗脱时间长，且基质干扰大(见图6)；而采用Acclaim WAX-1 色谱柱，色谱分离效果最好，且其他杂质保留时间均小于安赛蜜，便于控制总分析时间，故最终将其确定为本法的分析柱。 分别对流动相中缓冲液种类、浓度、pH值进行筛选， 结果发现： (1)采用磷酸盐缓冲液时，基线噪音最小； (2)当缓冲盐浓度≤50mM时，安赛蜜色谱峰在多次重复进样后容易发生变形，推测可能是样品中无吸收的物质在柱头处占据了活性位点，将缓冲盐浓度提高至100mM时，该问题可得到明显改善； (3)当 pH由6.0调节至7.0过程中，2#样品中主要杂峰与安赛蜜分离度逐渐增大，当 pH 达6.8~7.0时，分离效果最佳。综上，最终确定本法的流动相比例。 图 5.PA2柱-对照品色谱图 图6.C18柱-样品及加标样品色谱图(上-样品；下-加标样品) 取浓度为 0.5 ug/ml 的对照品溶液重复进样7针，保留时间RSD 为0.13%，色谱峰面积RSD 为0.36%。 线性、检出限 取不同浓度安赛蜜标准工作溶液依次进样10pl分析，在0.025 pg/ml~20.0 pg/ml范围，以安赛蜜浓度和峰面积进行 图7.方法定量限色谱图 表2.样品检测及回收率考察结果 序号 基质 检测结果(pg/kg) 国标GB/T 5009.140-2003 本方法 加标回收率(%，n=3) 1 果醋 基线不平，有干扰 N.D 95.3 2 陈醋 基线不平，有干扰 N.D 90.3 结论 测定 ( 2]赛默飞世尔公司方法开发报告 APPBJ -LC-090728 “食品 中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸同时测定的方法” ) 本方法使用 WAX-1色谱柱对食醋中安赛蜜进行测定，操作简便易行，大大降低基质的干扰，提高了方法重现性和准确度。 ( [1]国家标准 GB/T 5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾的 ) ( [3]董明，反相高效液相色谱法同时检测复合液体调味料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量[J]商品与 质量，2013(3)：244 )