肉制品中添加及非法添加检测方案

南京科捷高效液相色谱仪（液相色谱法）检测肉食品中常见4种抗生素残留 1 仪器与试剂 科捷仪器 LC-10Tvp高压恒流泵      SPD-10Tvp紫外检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)器 超声波清洗仪 反相色谱柱C18 固相萃取柱 泰乐菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考标准品均为天津市科密欧化学试剂开发中心监制 乙腈、正己烷均为优级纯 其它试剂均为分析纯 实验用水均为二次蒸馏水 新鲜牛肉与鸡肉均为超市所购 2 色谱条件 C18反相色谱柱 柱温25℃，流速1mL/min，进样量25uL，梯度洗脱条件A相为甲醇，B相为0.2mol/L磷酸二氢钠含10%(体积比)甲醇，调节pH为3.0，梯度洗脱程序：0-2min10%A，2-8min 10%-40%A，8-9min40%-10%A，检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)波长入为275nm 3 标准溶液的配制及标准曲线的制备 分别准确称取各标准品0.01g（精确至0.001g），用甲醇分别溶解并定容至100mL，配制成100mg/L标准储备液，于一4℃冰箱中冷藏，测定时将各标准溶液混合后稀释成0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0mg/L的溶液。分别以泰乐菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程及相关系数（r）。 4 样品处理 将新鲜牛肉及鸡肉分别匀浆后，于-18℃冰箱中保存。测定时，将匀浆冷冻保存的牛肉与鸡肉样品于室温下自然解冻。分别准确称取20.0g样品置于50mL具塞锥形瓶中，加入20mL乙腈，超声10min，转移至离心管，以5000r/min离心10min，收集上清液，离心沉淀物用上述方法重复提取2次，合并上清液。向得到的清夜中加入30mL正己烷，用力振荡5min，静置分层，弃去上层正己烷层。然后将溶液于40℃减压旋转蒸发至约2mL，氮气吹干后加入5mL甲醇一磷酸盐混合液超声溶解抗生素，最好定容至10mL。 5样品净化 将HLB固相萃取小柱用5mL甲醇、5mL去离子水活化后，将4得到的样品处理液上固相萃取柱(柱流速保持1滴/s），用10mL蒸馏水、10mL5%甲醇水溶液淋洗固相萃取柱，再用10mL甲醇洗脱，将洗脱液用氮气吹干后，加入流动相超声定容至5mL，最后，经0.22um滤膜过滤后进样。 6方法的准确度、精密度、线性范围、回收率 对于牛肉样品分别添加0.1、0.5、1.0mg/kg 3个水平的混合标准溶液，按照4与5样品处理及净化方法，每个水平平行测定4次，进行回收率实验，并且以3倍信噪比分别计算泰乐菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在牛肉样品中的检出限，在测定条件下4种药物在0.1—20mg/L范围内均呈线性，线性方程与相关系数、平均回收率、相对标准偏差见表1 HYPERLINK "http://www.tryte.com.cn/UploadFiles/2013-03/admin/2013031910365358693.jpg" \t "http://www.tryte.com.cn/html/_blank" HYPERLINK "http://www.tryte.com.cn/UploadFiles/2013-03/admin/201303191037048227.jpg" \t "http://www.tryte.com.cn/html/_blank" HYPERLINK "C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-1230.png" \t "http://www.tryte.com.cn/html/_blank" 7 实际样品检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​) 本实验分别对10份牛肉样品和10份鸡肉样品中泰乐菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考进行检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)，没有发现牛肉样品中含有以上抗生素，但是在4份鸡肉样品中都不同程度检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)到了泰乐菌素，最高为200ug/kg，最低为80ug/kg，平均含量为120ug/kg，高于我国动物性食品中兽药最高残留限量标准（100ug/kg） 结论     我国动物性食品中兽药最高残留限量标准规定泰乐菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在肉品中的最高残留量（MRL）分别为100、75、1.5、200ug/kg，本实验所测泰乐菌素、替米考星、氟苯尼考的检出限分别为20、32、16ug/kg均在最高残留限量以下，符合残留检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)分析要求。由于氯霉素药物特殊性，欧盟对氯霉素的检出限要求为0.1ug/kg，美国FDA对氯霉素的检出限要求为0.3ug/kg，按照本实验方法，氯霉素检出限为19ug/kg，还未达到国际上的要求，这是因为提取方法和所用检测 (​http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​list_1226.html" \t "http:​/​​/​www.tryte.com.cn​/​html​/​_blank​)器所致。今后应该发展更加灵敏的方法以提高氯霉素。本实验方法的平均回收率较高（75%-87%），而且步骤简单、操作容易、重现性较好相对标准偏差为1.35%-5.41%，表明方法稳定可靠。 南京科捷分析仪器有限公司025-83312752（南京总公司） 0731-85716019(湖南分公司)