鱼粉中氨基酸检测方案(液相色谱仪)

鱼粉中氨基酸的高效液相色谱(hplc)检测方案 随着我国饲料工业的发展，鱼粉的需要量逐年增加，鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。鱼粉是水产饲料的主要蛋白源，尤其含有动物生长所必需的氨基酸，由于鱼粉用量大，价格高，有些厂家掺杂使假、以次充好，使鱼粉质量参差不齐，这一行为业给鱼粉品质分析带来了一定困难。因此，有必要建立一个有效的手段对鱼粉中氨基酸进行定量分析。 以下是赛智科技利用 LC-10Tvp 高效液相色谱仪对鱼粉进行的 HPLC 检测方案。 (本应用方案请勿转载，侵权必究) 1、仪器与试剂 1.1仪器、设备 LC-10Tvp 高效液相色谱仪 Vertex 色谱柱AA： 250mm×4.6mm×5mm 分析天平 恒温箱，温度控制在110±1℃ 微量进样器，(20uL)一支 漩涡混匀器 氮吹仪 针头过滤器 微孔滤膜：0.45Hm 1.2试剂 盐酸溶液，6mol/L：将优级纯盐酸与水按1：1(V/V)混合。 氨基酸标准工作溶液。 乙腈，色谱纯。 三水合醋酸钠，优级纯。 冰醋酸。 正己烷，色谱纯。 2、供试品溶液和对照品溶液的制备 对照品溶液的制备 取氨基酸混合工作标液500ul，用水稀释至5ml，即得。 供试品溶液的制备 称取试样50-100mg(准确至0.1mg)于据塞试管中，加入6.0mol/l 盐酸10ml，混匀，充分提取10min，盖紧盖子。将样品置于110℃恒温干燥箱中，水解22-24h。冷却后充分混匀，过滤。根据实验要求移取适量上清液，60℃下氮气吹干，备用。以下按照衍生方法包进行。 方法包衍生方法：将恒温水浴锅预热至50±1℃，分别将A、B两种衍生试剂用稀释至原来浓度的1/5倍。精密量取上述对照品1ml，至于试管中，加入稀释后的A溶液0.5ml和稀释后的B溶液0.5ml，摇匀；在50±1℃的水浴中加热45分钟，取出，加入正己烷溶液1ml，振摇；并用孔径为0.45um有机膜过滤，放置30min 后，取澄清的下层液进行分析实验。供试品的衍生步骤与对照品相同。 3、色谱条件 色谱柱： AA44.6mmx250 mm， 粒度5 mm 流动相： 流动相A： 0.1mol/L醋酸钠溶液(pH6.5)：乙腈=93：7 配置方法：准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000ml水中，搅拌均匀，溶解，用冰醋酸或氢氧化钠溶液调节 pH 值至6.5；准确量取配制好的三水合醋酸钠溶液465ml 和乙腈35ml，混合均与，抽滤，过0.45pm滤膜。 流动相B：水：乙腈=20：80。 配制方法：准确量取水100ml和乙腈400ml，混合均匀，抽滤，过0.45um滤膜。波长：254nm 流速：1.0 mL/min 梯度设置： T (min) A% B% 0.01 100.0 0.0 11 93.0 7.0 13.9 88.0 12.0 14 85.0 15.0 29 66.0 34.0 32 30.0 70.0 35 0.0 100.0 42 0.0 100.0 45 100.0 0.0 60 100.0 0.0 4、测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得 5、谱图