饲料中三聚氰胺、氨基酸、维生素等物质检测方案(液相色谱仪)

依利特三 目录 前言 1 .第一章饲料中三聚氰胺的检测....... .2 .第二章饲料中氨基酸的检测......... .10 .第三章饲料中维生素类物质的检测....... ..17 饲料中维生素 B1 的检测. ..17 饲料中维生素B2的检测. .饲料中维生素 B6的检测. 2 饲料中维生素B12的检测..... ..21 饲料中维生素E的检测..... ............................................................................................. 饲料中维生素 D3 的检测 .饲料中维生素K3的检测. 饲料中泛酸的检测....... ..27 饲料中烟酸、叶酸的检测...........28i.......................................................................................... 第四章饲料中相关物质的检测仪器配置. .30 附录1......m ....34 .大连依利特分析仪器有限公司简介.. ..34 附录2........ ....38 大连依利特有限公司产品介绍....... .38 前言 随着畜牧养殖业的迅速发展，人们对饲料营养成分的分析要求在不断提高，饲料分析的内容已从比较单一的高含量营养成分，如蛋白质、脂肪等的总量分析，深入到比较复杂的微量营养元素，如氨基酸、维生素、微量元素及饲料中有害物质等分析。如用传统的化学分析方法，很难甚至不能进行这些成分的分析。因而采用高灵敏度、高效、自动化的分析方法已成为饲料行业领域分析的发展方向。 高效液相色谱法是现代仪器分析中一支突起的新技术，由于其具有准确性好、灵敏度高、分析速度快等优点，已成为现代仪器分析非常重要的手段，它在饲料分析领域有着非常广泛的应用。它可以检测饲料中氨基酸、维生素、脂肪酸、有机酸、添加剂和有害物质，也可同时测定几种或几十种成分。 鉴于此，大连依利特分析仪器有限公司作为国内高效液相色谱仪生产知名厂家，立足于满足饲料行业用户需求、秉承着“质量更佳、服务更优、创新更快、争创行业一流品牌”的理念并结合自身技术应用实力雄厚的特点，提出了为饲料行业用户提供一揽子解决方案的设想并加以实施，形成了《高效液相色谱在饲料行业的应用》。 我们希望此应用文集能给广大饲料行业用户在饲料分析方面提供一个参考，并且能为用户提供一个解决方案。 第一章饲料中三聚氰胺的检测 三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环化合物，重要的氮杂环有机化工原料，简称三胺。由于食品和饲料工业蛋白质含量测试方法的缺陷，三聚氰胺常被某些企业当作食品或饲料添加剂，以提高食品或饲料中蛋白质含量指标。 饲料中三聚氰胺经三氯乙酸提取、离心后，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱物吹干后用流动相溶解，用高效液相色谱仪进行测定。 【系统配置】 表1.1 饲料中三聚氰胺测试用分析方法包 序号 名称 规格级别 产地 1 柠檬酸 分析纯 国产 2 辛烷磺酸钠 色谱纯 国产 3 三聚氰胺标准品 纯度≥99.0% 进口 4 水系滤膜(100片/盒) o50mm， 0.45um 上海 5 有机系滤膜(100片/盒) o50mm， 0.45um 上海 6 针筒式有机相过滤器(100支/包) o13mm， 0.45um 天津 7 Elite MSP 三聚氰胺专用柱 5um， ID：4.6x150mm 依利特 8 混合型阳离子固相萃取柱(50支/盒) HyperSep Retain-CX，60mg/3mL 进口 表1.2 饲料中三聚氰胺测试用前处理配置包 序号 名称 规格级别 产地 1 超声波水浴 AS3120型，3L，功率：120W 国产 2 隔膜真空泵 GM 型 国产 3 溶剂过滤器 1000mL 国产 4 分析天平 AL104，感量0.0001g 进口 JD60-4，0.0001g 沈阳 5 离心机 TG16G，16000转，6×50mL 湖南 TD5G， 5000 转， 12×10mL 湖南 pH计 FE20K 酸度计 进口 6010酸度计 上海 7 涡旋混合器 QL-861 江苏 8 固相萃取仪 SPE-12 天津 9 氮气吹干仪 PGC-01D 天津 表1.3 饲料中三聚氰胺液相色谱仪标准配置包 序号 名称 数量 1 P1201三聚氰胺测试用液相色谱系统 1套 (1)P1201高压恒流输液泵 1台 (2)UV1201紫外可变波长检测器 1台 (3)ZWII型色谱柱恒温箱 1套 (4)Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 (5)Elite MSP 三聚氰胺专用柱 1支 (6)ZJ-1阀及色谱柱安装支架 1套 (7)EC2006色谱数据处理系统软件V1.7版 1套 (8)P1201等度启动包 1套 2 高级配置(更多功能，人性化配置，工作效率更高) (1)RO1201溶剂管理器(含进口二元脱气机) 1套 (2)AS1201自动进样器 1套 3 供参考其他液相色谱系统 (1)P230Ⅱ型等度系统基本配置 1套 称取饲料样品 0.40g(精确到 0.01g)，置于10mL具塞刻度试管中，加入 7mL 1%三氯乙酸，涡旋混匀，超声提取 30min； 再加入0.5mL 10%乙酸锌溶液和 0.5mL 10%亚铁氰化钾溶液，涡旋混匀，用1%三氯乙酸定容至满刻度线；样品经10000rpm， 离心 5min； 取5mL上清液作为待净化液。 依次用3mL甲醇和5mL 水活化 SPE 柱；将待净化液用水稀释至10mL， 转移至固相萃取柱，依次用 3mL 水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL 5%氨化甲醇溶液洗脱。整个过程控制流速不超过 1mL/min。洗脱液50℃下用氮气吹干，残留物用1mL流动相溶解，涡旋混合，过0.45 um 油系滤膜，供HPLC分析。 【色谱条件】 色谱柱： Elite MSP(5um， 4.6×150mm) 流动相：离子对试剂缓冲液：乙腈=90：10(离子对试剂缓冲液：：准确称取2.10g柠檬酸和2.16g 辛烷磺酸钠，加入约980mL 水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L， 并用 0.45 um水系微孔滤膜过滤备用) 流速：11.5mL/min 柱温：室温 ● 检测波长：240nm ● 进样量：20uL 图1.1三聚氰胺标准品谱图 图1.2某饲料样品分析谱图(含量 0.63mg/kg) 【性能指标】 连续进样重复性测试 图 1.3 5pg/mL标准品11针连续进样重叠谱图 表1.4 5ug/mL标准品连续进样11次重复性数据 编号 保留时间/min 峰面积/mV sec 1 14.687 207.21 2 14.679 206.85 3 14.665 206.28 4 14.637 205.23 5 14.638 206.12 6 14.616 206.36 7 14.586 207.66 8 14.620 207.55 9 14.627 207.84 10 14.659 207.83 11 14.689 207.71 平均值 14.65 206.97 RSD/% 0.23 0.42 图1.4不同浓度标准品叠加谱图 图1.5三聚氰胺浓度与峰面积关系 方法最低检出和最低定量限 以3倍信噪比峰高对应的浓度换算为方法检出限，，以10倍信噪比峰高对应的浓度换算为方法定量限。 表1.5 Elite P1201 测试三聚氰胺方法检出限和定量限 计算方法 方法去出限(mg/kg) 方法定量限(mg/kg) 校正曲线方法 0.046 0.153 方法准确性 图1.6未知饲料样品、空白及加标叠加谱图 表1.6饲料加标回收率结果 加标量 平行实验一 平行实验二 平均值 回收率% (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) 1.0 1.05 1.03 1.04 104.0% 5.0 4.36 4.51 4.44 88.8% 10.0 9.63 9.25 9.44 94.4% 25.0 21.97 21.77 21.87 87.5% 方法的稳定性 同一饲料加标样品，，一分为三，采用所述方法连续处理三次，并测试谱图计算结果。 图1.7某加标饲料样品平行测试叠加谱图 表1.77-平行样品测试结果 平行实验- 一 平行实验二 平行实验三 平均值 RSD% 1.47 (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) (mg/kg) 4.36 4.51 4.42 4.43 第二章饲料中氨基酸的检测 氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是维持动物生长所必须的营养物质，其种类和含量是衡量饲料蛋白质价值的根本指标，测定饲料中氨基酸具有非常重要的意义。 饲料中氨基酸分析大都采用氨基酸分析仪以离子交换分离，柱后衍生测定，这种方法准确度较高，但是分析时间较长，灵敏度较低。柱前衍生反相高效液相色谱法测定氨基酸，与氨基酸分析仪相比，分析时间短、灵敏度高，所以常用于饲料中氨基酸的测定。 表2.1饲料中氨基酸测试用分析方法包 序号 名称 规格级别 产地 1 氨基酸标准品(18种) 纯度≥98% 进口 2 水系滤膜(100片/盒) o50mm，0.45um 上海 3 有机系滤膜(100片/盒) o50mm， 0.45um 上海 4 针筒式有机相过滤器(100支/包) o13mm， 0.45um 天津 5 一次性注射器(200支/包) 1mL 国产 6 氨基酸专用分析柱 5um， ID：4.6×250mm 依利特 7 专用保护柱及保护柱芯 5um， ID：4.6×50mm 进口 8 氨基酸试剂盒 一套 依利特 表2.2氨基酸试剂盒 序号 名称 规格 数量/瓶 1 氨基酸衍生化溶液 250mL 1 2 衍生缓冲固体组分A 25g 1 3 衍生缓冲固体组分B 100g 1 4 平衡缓冲固体组分A 25g 1 5 平衡缓冲固体组分B 50 1 6 流动相B固体组分 100g 3 表2.3饲料中氨基酸测试用前处理配置包 序号 名称 规格级别 产地 1 超声波水浴 AS3120 型，3L， 功率：120W 天津 2 隔膜真空泵 GM型 天津 3 溶剂过滤器 1000mL 天津 4 分析天平 AL104，感量0.0001g 进口 JD60-4，0.0001g 沈阳 5 PH计 FE20K 酸度计 进口 6010酸度计 上海 6 氮吹仪 PGC-01D 天津 7 安瓿瓶 5mL 河南 表2.4饲料中氨基酸测试液相色谱仪标准配置 序号 名称 数量 1 P1201氨基酸测试用液相色谱系统 1套 (1) P1201高压恒流输液泵 2台 (2)UV1201紫外可变波长检测器 1台 (3)ZWII型色谱柱恒温箱 1套 (4)Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 (5)Elite AAK 专用色谱柱 1支 (6)ZJ-1阀及色谱柱安装支架 1套 (7)TD-1-15梯度溶液混合器 1个 (8)EC2006 色谱数据处理系统软件V1.7版 1套 (9)P1201梯度启动包 1套 2 高级配置(更多功能，人性化配置，工作效率更高) (1)P1201 溶剂管理器(含进口二元脱气机) 1套 (2)AS1201自动进样器 1套 3 可供选择其他液相色谱系统 (1)P230Ⅱ型梯度系统基本配置 1套 取25mg(根据样品氨基酸含量而定)饲料样品(如饲料样品为块状固体，需先用粉碎设备粉碎)，加入 5mL安部瓶中，再加入3mL6mol/L盐酸溶液，酒精灯高温拉丝封口，放入烘箱中110℃水解24小时。 将水解后样品从安部瓶转入蒸发皿中，并用水多次洗涤安部瓶，洗液一并转入蒸发皿，80℃水浴蒸干，或在氮气保护下，80℃水浴加热安部瓶，直至样品蒸干。 用衍生溶液多次洗涤蒸发皿(或安部瓶)，洗液转入25mL容量瓶中，并用衍生缓冲溶液定容，用0.45 um滤膜过滤，备用。 取已过滤的样品溶液 10mL 至50mL 棕色试剂瓶中，加入5mL衍生溶液，混匀，放入60℃水浴中，暗处反应 60min。反应完毕后，取出冷却至室温，加入平衡缓冲溶液稀释至刻度，静置片刻，过膜，备用。 【色谱条件】 色谱柱： EliteAAK(5um， 4.6×250mm) 流动相：流动相A：乙晴：水=50：50流动相B：缓冲溶液 流速：11.2mL/min 柱温：27℃ ● 检测波长：360nm 进样量：10pL 300· 图2.118种氨基酸标准谱图 图2.2某饲料样品1氨基酸测试谱图 图2.3某饲料样品2氨基酸测试谱图 【性能指标】 分离度 表2.518种氨基酸的分离情况 名称 Asp Glu Ser Arg Gly Thr 分离度 11.8 25.6 6.1 1.7 1.8 名称 Pro Ala Val Met Cys Ile 分离度 1.5 3.6 23.7 3.0 3.1 2.7 名称 Leu Trp Phe His Lys Tyr 分离度 2.5 6.5 1.7 1.5 2.2 2.5 重复性 图2.4连续进样重复性比较 表2.6连续进样重复性数据 名称 Asp Glu Ser Arg Gly Thr 保留时间RSD(%) 0.25 0.15 0.14 0.10 0.11 0.07 峰面积RSD(%) 0.49 0.55 0.49 0.61 0.47 0.48 名称 Pro Ala Val Met Cys Ile 保留时间RSD(%) 0.05 0.06 0.02 0.03 0.03 0.02 峰面积RSD(%) 0.41 0.43 0.48 0.61 0.76 0.62 名称 Leu Trp Phe His Lys lyr 保留时间RSD (%) 0.02 0.04 0.02 0.04 0.01 0.01 峰面积RSD(%) 0.51 0.79 0.57 0.56 0.74 0.35 最低检出限 以 Asp 为例，最低检出限D 为 0.098mg/kg。 衍生产物的稳定性 衍生后的氨基酸样品连续7天分析的色谱峰保留时间和面积的重现性结果，衍生物最少在7天中具有很好的稳定性。 图2.5衍生产物的稳定性 饲料中含硫氨基酸的检测 含硫氨基酸在酸水解条件下非常容易被破坏，无法进行准确的定量检测。近年来，氧化水解法成为分析含硫氨基酸较为常用的水解方法。 采用氧化水解，2，4-二硝基氟苯柱前衍生紫外检测高效液相色谱法测定饲料中的含硫氨基酸具有良好的结果。 【样品预处理】 称取一定量的标准品或饲料样品，置5mL安部瓶中，加入已冷却的过甲酸溶液0.3mL，连同冰水浴一道置于4℃冰箱中，反应16小时。 以1.767mol/L 偏重亚硫酸钠溶液为终止剂，于氧化液中加入偏重亚硫酸钠溶液 0.1mL，充分摇匀后，直接加入 6mol/L 盐酸溶液3mL， 酒精灯高温拉丝封口，置烘箱110+3℃水解24小时，水解液氮气吹干，用衍生缓冲溶液多次洗涤安部瓶，合并洗涤液转移至25mL容量瓶中，并用缓冲溶液定容，备用。 衍生方法及色谱条件同饲料中氨基酸的测定。 【典型谱图】 图2.6空白(a)、饲料样品(b)、样品加标(c)色谱图 1.磺基丙氨酸，2.蛋氨酸砜 第三章饲料中维生素类物质的检测 【系统配置】 表3.1饲料中维生素类物质检测液相色谱仪标准配置 序号 名称 数量 1 维生素类物质测试用液相色谱系统 1套 (1)P1201高压恒流输液泵 1台 (2)UV1201紫外可变波长检测器 1台 (3)ZWII型色谱柱恒温箱 1套 (4)Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 (5)ZJ-1阀及色谱柱安装支架 1套 (6)EC2006色谱数据处理系统软件V1.7版 1套 (7)P1201等度启动包 1套 2 高级配置(更多功能，人性化配置，工作效率更高) (1)RO1201溶剂管理器(含进口二元脱气机) 1套 (2)AS1201自动进样器 1套 3 供参考其他液相色谱系统 (1)P230Ⅱ型等度系统基本配置 1套 饲料中维生素B1的检测 【样品预处理】 称取维生素预混饲料 0.2g(精确至 0.0001g)；复合预混饲料1g(精确至 0.001g)，于100mL棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液超声提取 20min， 待冷却后，用提取液定容至刻度，混匀，过滤。 【色谱条件】 ●色谱柱： SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6mm×150mm) ● 流动相：缓缓液：甲醇=75：25(缓冲液的配制方法：在已装入约700mL去离子水的1000mlL容量瓶中，加入 50mg EDTA(精确到 0.001g)， 1.1g庚烷磺酸钠(精确到 0.001g)，待全部溶解后加入 25mL 冰乙酸、5mL三乙胺，用去离子水定容至刻度。用冰乙酸、丶j三乙胺调节该溶液 pH 值至3.40=+0.02，过 0.45um滤膜。) ● 检测波长：246nm ● 流速：0.8mL/min 进样量：10pL ● 柱温：室温 图 3.1 20ug/mL 维生素 B1标准品谱图 图3.2维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素 B2 的检测 【样品预处理】 称取维生素预混饲料0.2g(精确至0.0001g)；复合预混饲料2g(精确至0.001g)，，于50mL棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液于80℃~100℃水浴中煮沸30min，待冷却后，加入14mL甲醇，用提取液定容至刻度，混匀，过滤。维生素预混饲料进一步稀释5倍进样。 【色谱条件】 ● 色谱柱：SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6mmx250mm) 流动相：缓冲液：甲醇=86：14(缓冲液的配制方法：在已装入约700mL 去离子水的1000mlL容量瓶中，加入 50mg EDTA(精确到 0.001g)， 1.1g庚烷磺酸钠(精确到 0.001g)，待全部溶解后加入25mL冰乙酸、5mL三乙胺，用去离子水定容至刻度。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液 pH 值至3.40=0.02，过0.45um滤膜。) 检测波长：267nm ● 流速：11.0mL/min ● 进样量：10pL ● 柱温：室温 【典型谱图】 图3.35pg/mL 维生素B2标准品谱图 图3.4维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素 B6的检测 【样品预处理】 称取维生素预混饲料0.2g(精确至 0.0001g)；复合预混饲料1g(精确至0.001g)， 于50mL棕色容量瓶中，加入三分之二体积的提取液超声提取 20min(中间旋摇--次以防样品附着瓶底)，待温度降至室温后用提取液定容至刻度，过滤，待用。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil ODS2(5um， 4.6mmx250mm) ● 流动相：缓冲液：甲醇=86：14(缓冲液的配制方法：在已装入约700mL 去离子水的1000mlL容量瓶中，加入50mg EDTA(精确到 0.001g)， 1.1g 庚烷磺酸钠(精确到 0.001g)，待全部溶解后加入 25mL冰乙酸、5mL三乙胺，用去离子水定容至刻度。用冰乙酸、三乙胺调节该溶液 pH 值至3.40=0.02，过 0.45um滤膜。) ● 检测波长：280nm ● 流速：：11.0mL/min ● 进样量：10uL 柱温： 室温 【典型谱图】 图3.520ug/mL维生素B6标准品谱图 图3.6维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素 B12的检测 【样品预处理】 称取维生素预混饲料 5.0000g(精确至 0.0001g)， 置于100mL棕色容量瓶中，加入60mL去离子水，摇匀，置于超声水浴中超声提取 15min， 用去离子水定容至刻度混合均匀。再用0.45um滤膜过滤，进样。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil NH2(5um， 4.6mmx250mm) ● 流动相：3%正磷酸水溶液 260mL 与 700mL乙腈混合，超声脱气。 ● 检测波长：361nm ● 流速：11.7mL/min ● 进样量：20uL ● 柱温：30℃ 【典型谱图】 图 3.72.5ug/mL 维生素 B12标准品谱图 图3.8维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素E的检测 【样品预处理】 称取饲料0.5g(精确至 0.0001g)于 50mL 棕色容量瓶中，加入约40mL甲醇，于60摄氏度超声波水浴中超声提取 30min， 冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。如果试样中维生素E(dl-a-生育酚乙酸酯)的标示量低于 10g/kg， 则将溶液过 0.45um 滤膜，进样测定，否则需将溶液用甲醇进一步稀释，使维生素E(dl-a-生育酚乙酸酯)的进样度在10ug/mL~120ug/mL之间。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil ODS2(5um， 4.6mmx250mm) ● 流动相：甲醇：水=98：2 ● 检测波长：285nm ● 流速： 1.0mL/min ● 进样量：20pL ● 柱温：室温 图3.9 130ug/mL 维生素E(dl-a-生育酚乙酸酯)标准品谱图 图3.10维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素 D3 的检测 【样品预处理】 称取试样 0.500g于50mL棕色容量瓶中，加入约 40mL 甲醇， 于65℃超声波水浴中超声提取 30min， 冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过 0.45um滤膜，进样测定。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil BDS C18(5um， 4.6mmx250mm) 流动相：甲醇：水=98：2 ● 检测波长：285nm ● 流速：1.0mL/min 进样量：20pL ● 柱温：室温 图3.11 10ug/mL 维生素D3标准品谱图 图3.12维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中维生素K3 的检测 【样品预处理】 称取试样 1g 左右置于250mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取 25mL于125mL分液漏斗中，加三氯甲烷 40mL 和 1mol/L 碳酸钠溶液5mL， 剧烈振摇 30s， 静止分层，分出三氯甲烷层通过预先用三氯甲烷润湿的棉花过滤如250mL容量瓶中，再用三氯甲烷40mL迅速洗涤滤器，洗液并入容量瓶，水层用三氯甲烷萃取2次，每次约20mL，萃 取液过滤，并用三氯甲烷 20mL 洗涤滤器，洗液和全部滤液并入容量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。精密吸取 2mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。过0.45um有机滤膜，待测。 【色谱条件】 ● 色谱柱： SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6mmx250mm) 流动相：：甲醇：水=65：35 ● 检测波长：251nm ● 流速：11.0mL/min ● 进样量：20pL ● 柱温：30℃ 图 3.13 10pg/mL 维生素K3标准品谱图 图3.14维生素预混禽饲料样品检测谱图 饲料中泛酸的检测 【样品预处理】 取维生素预混饲料0.25g(精确至0.0001g)， 置于100mL棕色容量瓶中，加入60mL水浸湿，摇匀，加10mL1%二乙胺四乙酸二钠溶液混匀，置于超声波水浴上振荡提取 15min， 用水定容至刻度混合均匀。再用 0.45 um 滤膜过滤，进样。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil GOLD aQ(5um， 4.6mmx250mm) ● 流动相：称取3.12g二水磷酸二氢钠溶于1L水中，用氢氧化钠溶液(0.1mol/L)调节 pH至5.5，通过 0.45um滤膜过滤脱气。 检测波长：200mm ● 流速：.11mL/min 进样量：10pL ● 柱温：室温 图3.15 20ug/mL 泛酸标准品谱图 图3.16维生素预混禽饲料检测谱图 饲料中烟酸、叶酸的检测 【样品预处理】 称取维生素预混饲料0.5g(精确至0.0001g)，置于100mL棕色容量瓶中，加入 0.1mol/L碳酸钠溶液 10mL 浸试试样，加70mL提取液混匀，置于超声水浴中超声提取15min，用提取液定容至刻度，混合均匀。再用 0.45 um滤膜过滤，进样。 【色谱条件】 ● 色谱柱： Hypersil C8(5um， 4.6mm×250mm) 流动相：称取4.84g的磷酸氢二钾，9.82g的磷酸二氢钾，溶于去离子水中，加20mL乙腈，用去离子水定容至1L，混匀用20%氢氧化钾调节 pH 至6.5。 检测波长：280nm ● 流速：11.4mL/min 进样量：20pL ● 柱温：室温 图3.1720ug/mL 混合标准品谱图 图3.18维生素预混禽饲料检测谱图 饲料安全，直接关系动物产品的质量安全，最终影响人类健康。近年来，向饲料中违法添加违禁物质等行为时有发生，由此引发的食品安全事故经主流媒体曝光后，已引起公众的不安、不满甚至愤怒。 饲料行业已于2012年5月1日正式实施新版《饲料和饲料添加剂管理条例》(以下简称《条例》)。新《条例》强调，““禁止使用饲料原料目录、饲料添加剂品种目录和药物饲料添加剂品种目录以外的任何物质生产饲料”。 依利特作为液相色谱仪知名厂商，有义务也有责任为饲料行业的用户提供解决方案，为饲料及饲料添加剂的安全贡献力量。我公司根据饲料行业国家标准，结合自身的技术实力，推出了标准中涉及液相色谱方法的仪器配置，为广大饲料行业的用户提供参考。 表4.1饲料中相关物质检测仪器配置 推荐仪器配置 检测项目 备注(可选的其他配置) P1201型等度系统 泛酸，维生素B12，维生素K3，维生素A，蛋氨酸羟基类似物，尼卡巴嗪，磺胺类药物，金霉素，土霉素，氯羟吡啶，叶黄素，氨苄青霉素，L-抗坏血酸-2-磷酸酯，磺胺喹恶啉，盐酸氨丙啉，维吉尼亚霉素，莫能菌素，杆菌肽锌，呋喃唑酮，盐酸氯苯胍，氢化可的松，雌二醇，苯并芘，地西泮，西马特罗，孔雀石绿，二甲硝咪唑，安眠酮，氯米芬，阿那曲唑，雷诺西芬，二硝托胺 P230Ⅱ型等度 系统基本配置 维生素B1， 维生素B2，维生素B6，维生素E，烟酸，叶酸，三甲氧苄氨嘧啶，柠檬酸，富马酸，乳酸，氟哌酸，氯烯雌醚 需要配置色谱柱恒温箱 P1201型梯度系统 喹乙醇，免疫球蛋白 IgG，生物胺，苏丹红染料，7种磺胺类药物，硝基呋喃类药物 P230Ⅱ型高压梯度基本配置 5种糖皮质激素 需要配置色谱柱恒温箱 P1201等度配荧光检测器 莱克多巴胺，拉沙洛西钠，安普霉素 P230Ⅱ等度配荧光检测器 P1201梯度配荧光检测器 盐酸多巴胺 P230Ⅱ梯度配荧光检测器 纳多诺尔 需要配置 色谱柱恒温箱 LU230Ⅱ四元低压梯度系统 替米考星 需要配置 色谱柱恒温箱 备注： P1201等/梯度系统配荧光检测器、P230Ⅱ等/梯度系统配荧光检测器配置和 P1201 等/梯度系统、P230Ⅱ等/梯度系统配置基本一致，区别在于将紫外-可见检测器换成荧光检测器配 AD 适配器。 表4.2P1201型等度系统基本配置 序号 名称 数量 1 P1201高压恒流泵 1台 2 UV1201紫外-可见波长检测器 1台 3 Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 4 SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6x200mm) 1支 5 EC2006色谱数据处理工作站 1套 6 P1201等度启动包 1套 表4.3 P1201型梯度系统基本配置 序号 名称 数量 1 P1201高压恒流泵 2台 2 UV1201 紫外-可见波长检测器 1台 3 Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 4 SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6x200mm) 1支 5 EC2006色谱数据处理工作站 1套 6 TD-1-15梯度溶液混合器 1个 7 P1201梯度启动包 1套 表4.4P230Ⅱ型等度系统基本配置 序号 名称 数量 1 P230Ⅱ高压恒流泵 1台 2 UV230ⅡI紫外-可见波长检测器 1台 3 Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 4 SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6×200mm) 1支 5 EC2006色谱数据处理工作站 1套 6 P230Ⅱ等度启动包 1套 表4.5 P230Ⅱ型梯度系统基本配置 序号 名称 数量 1 P230Ⅱ高压恒流泵 2台 2 UV230Ⅱ紫外-可见波长检测器 1台 3 Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 4 SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6x200mm) 1支 5 EC2006 色谱数据处理工作站 1套 6 TD-1-15梯度溶液混合器 1个 7 P230Ⅱ梯度启动包 1套 表4.6LU230Ⅱ型四元低压梯度系统基本配置 序号 名称 数量 1 P230Ⅱ高压恒流泵 1台 2 UV230ⅡI紫外-可见波长检测器 1台 3 Rheodyne 7725i 高压六通进样阀 1支 4 SinoChrom ODS-BP(5um， 4.6×200mm) 1支 5 EC2006色谱数据处理工作站 1套 6 LU230Ⅱ低压梯度混合器(内置 DG230-4在线脱气机) 1台 7 P230Ⅱ等度启动包 1套 8 LU230II四元低压梯度混合器启动包 1套 备注：表4.2~4.6中标配的色谱柱可根据具体的测试项目更换相应的色谱柱。 【参考标准】 1. GB/T 17813-1999《复合预混料中烟酸、叶酸的测定》2. GB/T17817-2010《饲料中维生素A 的测定高效液相色谱法》3. GB/T 17818-2010《饲料中维生素 D3 的测定高效液相色谱法》4. GB/T 19423-2003《饲料中尼卡巴嗪的测定高效液相色谱法》5. GB/T 19542-2007《饲料中磺胺类药物的测定高效液相色谱法》6. GB/T 19684-2005《饲料中金霉素的测定高效液相色谱法》7. GB/T20133-2007《饲料中免疫球蛋白 IgG 的测定高效液相色谱法》8. GB/T21036-2007《饲料中盐酸多巴胺的测定高效液相色谱法》9. GB/T21037-2007《饲料中三甲氧苄氨嘧啶的测定高效液相色谱法》10. GB/T 22259-2008《饲料中土霉素的测定高效液相色谱法》11. GB/T 22262-2008《饲料中氯羟吡啶的测定高效液相色谱法》12. GB/T 23187-2008《饲料中叶黄素的测定高效液相色谱法》13. GB/T 23385-2009《饲料中氨苄青霉素的测定高效液相色谱法》14. GB/T 23877-2009《饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸的测定高效液相色谱法》15. GB/T 23882-2009《饲料中L-坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法》16. GB/T 23884-2009《动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法》17.GB/T8381.10-2005《饲料中磺胺喹恶啉的测定高效液相色谱法》 18. GB/T 8381.11-2005 《饲料中盐酸氨丙啉的测定高效液相色谱法》 19. GB/T 17819-1999 《维生素预混料中维生素 B12的测定高效液相色谱法》 20.GB/T 18872-2002 《饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法》 21.GB/T20189-2006 《饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法》 22. GB/T222261-2008 《饲料中维吉尼亚霉素的测定高效液相色谱法》 23. NY/T 1457-2007 《饲料中氟哌酸的测定高效液相色谱法》 24. NY/T 724-2003 《饲料中拉沙洛西钠的测定高效液相色谱法》 25. NY/T 725-2003 《饲料中莫能菌素的测定高效液相色谱法》 26.NY/Tr7726-2003 《饲料中杆菌肽锌的测定高效液相色谱法》 27. NY/T 727-2003 《饲料中呋喃唑酮的测定高效液相色谱法》 28. NY/T9910-2004 《饲料中盐酸氯苯胍的测定高效液相色谱法》 29. NY/T 914-2004 《饲料中氢化可的松的测定高效液相色谱法》 30.NY/T918-2004 《饲料中雌二醇的测定高效液相色谱法》31. NY/T9919-2004 《饲料中苯并芘的测定高效液相色谱法》32. NY/Tr 9934-2005 《饲料中地西泮的测定高效液相色谱法》33. NY/T 937-2005 《饲料中西马特罗的测定高效液相色谱法》34. NY/T 1258-2007 《饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法》 35. NY/T1I1756-2009 《饲料中孔雀石绿的测定高效液相色谱法》 36. NY/T9936-2005 《饲料中二甲硝咪唑的测定高效液相色谱法》 37. NY/Tr1463-2007 《饲料中安眠酮的测定高效液相色谱法》 38.农业部783号公告-4-2006 《饲料中替米考星的测定高效液相色谱法》 39.农业部1063号公告-4-2008 《饲料中纳多洛尔的测定高效液相色谱法》 40.农业部1068号公告-2-2008 《饲料中5种糖皮质激素的测定高效液相色谱法》 41.农业部1068号公告-4-2008 《饲料中氯米芬的测定高效液相色谱法》 42.农业部1068号公告-5-2008 《饲料中阿那曲唑的测定高效液相色谱法》 43.农业部1068号公告-6-2008 《饲料中雷诺西芬的测定高效液相色谱法》 44.农业部1486号公告-3-2010 《饲料中安普霉素的测定高效液相色谱法》 45.农业部1486号公告-7-2010 《饲料中9种磺胺类药物的测定高效液相色谱法》 46.农业部1486号公告-8-2010 《饲料中硝基呋喃类药物的测定高效液相色谱法》 47.农业部1486号公告-9-2010 《饲料中氯烯雌醚的测定高效液相色谱法》 48.农业部783号公告-5-2006 《饲料中二硝托胺的测定高效液相色谱法》 附录1 公司背景 大连依利特分析仪器有限公司前身是中国科学院大连化学物理研究所第四研究室(色谱室)亦即国家色谱研究分析中心的一个课题组。从1988年起，我们就肩负起将大连化学物理研究所在色谱领域近四十年的科研成果转化为生产力的重任，其研制的产品-高效液相色谱柱和高效液相色谱仪，一举打破了国外厂家的垄断地位，平抑了国外产品长达十几年的在中国市场上的高价格，使国内用户可以用较少的资金购买到性价比优的国产高科技产品。 技术实力 色谱分析行业国内最知名两名中科院院士-卢佩章、张玉奎院士均为大连依利特公司的创始人；其中，张玉奎院士至今仍担任公司董事。目前公司聚集了一大批开发、研制、生产和应用色谱仪的专家，具有较强的色谱理论基础和经验。并且创造出了中国首次商业化的液相产品五个第一。 发展历程与主要荣誉 时间 发展历程与主要荣誉 1993年 大连依利特科学仪器有限公司成立 1993年 P100 液相色谱仪获得 BCEIA 展览会金奖 1997年 P200Ⅱ高效液相色谱仪器投产 1998年 获得 CMC 计量产品生产认证 2000年4月 通过 ISO9001质量管理体系认证 2000年5月 通过国家“九.五”攻关项目验收 2000年8月 改制更名为大连依利特分析仪器有限公司 2001年11月 获“十大知名色谱仪器品牌”称号 2003年1月 全面推出230系列高效液相色谱仪 2003年3月 P230 系列液相色谱仪器再次获得 BCEIA 展览会金奖 2004年3月 “依利特”牌产品荣获首批“大连名牌”称号 2005年10月 高新园区4000平米新生产基地落成 2007年4月 LU230 低压四元梯度系统获自主创新金奖 2008年9月 P1201系列高效液相色谱仪上市 2008年11月 国家火炬计划项目通过评审 2008年11月 “辽宁大连依利特工程技术中心成立” 2008年12月 通过四部门评审获得最新版高新技术企业资格 2009年4月 LIFD230 激光诱导荧光检测器获自主创新金奖 2010年4月 获“2009最受关注十大国产仪器厂商”称号 2010年4月 P1201系列高效液相色谱仪被评为“最受关注十大国产仪器” 2010年10月 “依利特”商标获得中国驰名商标殊荣 2011年4月 P2000高压恒流泵获自主创新银奖 2012年2月 获得《国家火炬计划重点高新技术企业证书》和《高新技术企业证书》 2012年12月 获得《“超高液相色谱仪”国家火炬计划项目证书》 2013年1月 起动“多维生物色谱仪及液质联用关键部件的研制”项目 2013年5月 “iChrom 5100 高效液相色谱仪”荣获自主创新金奖 服务体系 营销服务体系 除公司大连本部外，在上海、西安、济南、广州、长沙、南京、厦门、浙江等地客户较为集中的地区设立了办事处、联络处或地区总代理!，，已形成全国范围内的销售服务网络。 公司于2010年7月成立客服中心。客服中心共分为2个部分：电话客服小组和仪器维修小组。 电话客服小组 电话客服小组为您解答售后仪器，耗材使用方面的问题，为您提供最佳解决方案。包括仪器的操作，维护，发生故障的解决方案，色谱柱的使用和维护，软件操作等。倾听您宝贵的意见与建议，以不断完善产品和服务作为我们努力的方向。 服务方式 400 电话 400-66-35483，最后五位由对应 ELITE (依利特英文商标)五个字母的电话按键组成。2010年新增服务方式，，工作日8：00-17：00 之间任何时段提供服务。 固定电话 0411-84732384，84732442，沿用至今的服务方式，7.工作日 8：00-17：00 之间任何时段提供服务。 服务手机 13998658129，休息日及工作时间以外任何时段提供服务。 电子邮箱 service@elitehplc.com QQ.MSN在线 工作日8：00-17：00 之间任何时段提供服务。 传真 0411-84732460，任何时段自动接受传真 安装维修小组 安装维修小组正式成立于2009年1月，是由各级代理及公司总部人员共同组建的一个团体。安装维修小组主要负责全国各地仪器安装、维修、维护及培训，通过不断成长，发扬公司“服务更优”的优良传统，现今已发展成为结合安装与售后服务为一体的服务型团队。服务内容 客户仪器安装及使用操作培训； 客户仪器维修及保养； 客户现场样品实验分析处理； 客户疑难问题上门服务。 附录2 大连依利特有限公司产品介绍 P1201 高效液相色谱仪 P1201高压恒流泵 流量范围：0.001~9.999mL/min(设定步长0.001mL/min) 流量准确度：≤+0.2%(1.0mL/min， 8.5MPa， 水，，室温) 二 流量稳定性：≤0.075%(1.0mL/min， 8.5MPa，水，室温) 最高工作压力： 42.0MPa(0.001mL/min~5.000mL/min)20.0MPa(5.001mL/min~9.999mL/min) 可设定上下限，可自动报警 显示压力误差：≤士3%或0.5MPa 压力脉动：：11% 柱塞密封清洗：在线(选配件) UV1201紫外-可见检测器 线性范围：≥1.8AU(5%) 波长范围：190nm~700mm 波长重复性： +0.1nm T 二 波长准确性：+1.0nm 谱带宽度：8nm 响应时间：0.0s~4.9s -基线噪声：≤+0.5×10AU(空池、254nm、1.0s) 基结漂移：≤1×10(空池、254nm、稳定60min) 最小检测浓度：4×10g/mL(萘的甲醇溶液) 光谱扫描：有 时间波长程序：有 P230Ⅱ高效液相色谱仪 P230Ⅱ高压恒流泵 流量范围：0.001~9.999mL/min(设定步长0.001mL/min) 流量准确度：≤+0.3%(1.0mL/min， 8.5MPa，水，室温) 流量稳定性：≤0.1%(1.0mL/min， 8.5MPa，水，室温) GGe 最高工作压力：42.0MPa(0.001mL/min~5.000mL/min)20.0MPa(5.001mL/min~9.999 mL/min) 可设定上下限，可自动报警 显示压力误差：≤士3%或0.5MPa 二 压力脉动：1% UV230Ⅱ紫外-可见检测器 二 线性范围：≥1.5AU(5%) 波长范围：：1190nm~700nm 波长重复性：1nm 波长准确性：≤+1.0nm 谱带宽度：8nm 二 响应时间：0.0s~4.9s 基线噪声： ≤+1.0×10AU(空池、254nm、1.0s) 基结漂移：≤1.0×10(空池、254nm、稳定60min) 二 最小检测浓度： 4×10g/mL(萘的甲醇溶液) 二光谱扫描：有 时间波长程序：有 EC2006数据色谱处理工作站 EC2006软件基于 Windows98/2000/XP操作平台，采用了最新的软件设计技术(O-O技术)，32位完全独立的应用程序，硬件部分采用最新24位A/D芯片、16位单片机，通过 RS232、RS485 或 USB 数据通讯接口，可实现对高效液相色谱仪系统的实时回馈与控制。 24位数据采集存储模式 二 独创的分析自动化流程序设计 实现远程数据采集，本地处理 独特的积分事件和定量计算功能 AIA 标准数据输入输出格式(*.CDF) 谱图自动积分处理 用户自定义打印报告模板 二 计算机全面控制及实时状态回馈其他可选配件 LU230Ⅱ四低低压梯度单元 LU230Ⅱ四元低压梯度单元是专为单泵液相色谱系统升级为四元低压梯度系统而专门设计的。通过电磁阀控制流量，使用低压梯度单元您可以进行2~4种溶剂的混合和脱气(内置真空脱气机)，从而进行梯度液相色谱分析。 流量范围：0.01mL/min-9.99mL/min梯度组成比例范围：0.1%~100.0%，步长0.1% 二 梯度准确度：≤±3% 梯度曲线：线性、台阶、凹形和凸形曲线等 DAD230*二极管阵列检测器 与传统的紫外检测器不同，二极管阵列检测器的光学系统是由光源发出的光聚焦后首先通过检测池，然后由分光光栅进行分光，最后由光检测组件进行检测。 采用了光纤传导技术和全封闭光路结构来替代传统的DAD光学系统，无需任何机械装置调节和改变波长，极大地提高了波长的准确性和重复性；新型的电子和光学设计、氛灯和钨灯组合，使其在检测波长范围内具有很高的灵敏度和可靠性。 二 波长范围：199nm~618nm(512阵列)190nm~1020nm (1024阵列) 光源：气灯+钨灯 二 阵列数：512/1024 阵列分辨率：0.8nm 光谱分辨率： 1.2nm 波长准确性：+0.5nm 二 波长重复性： +0.1nm 二 响应时间：0.0s~9.9s 二 线性范围：≥1.5AU(5%) 基线噪声：≤±2.0×10AU 基线漂移：≤1×10AU/h RI-201H示差光光检测器 折射率范围宽、噪声小、运行稳定。 具有内部泄漏报警功能 基线噪声：2.5×10°RIU(响应时间：1.5s) 二 基线漂移：2×10RIU/h 沂光率范围：1.00~1.75 测量范围：0.25~512uRIU 零点调节：光学电自动归零 漂移调节范围：0~1×10RIU 漂移分辨能力：5×10RIU 二 响应时间：0.1，0.25，0.5，11.0， 1.5， 2，3，6秒 积分仪输出： 0~1V/FS(灵敏度：2mV/uRIU， 8mV/uRIU) 记录仪输出： 0-10mV/FS 检测池温控范围：30~55℃ 液体接触材质：SS316不锈钢、特氟隆、石英玻璃 ● Chromachem蒸发光散射检测器 通用型检测器 变量少于示差、紫外检测器，灵敏度更高 更低的蒸发温度利于检测半挥发性和热敏感性物质 适用于 HPLC梯度洗脱 基线稳定-对温度和流速变化不敏感 可灵敏检测弱发色团化合物 LIFD激光诱导荧光检测器 激光诱导荧光检测器(LIFD)是目前用于检测化学及生物样品的最灵敏检测器之一，广泛用于高效液相色谱(HPLC)、微柱液相色谱(Micro-LC)及毛细管电泳(CE)等分离领域。特别是在超痕量生物活性物质的单分子检测，测定生物样品中的超痕量活性物质和环境污染物等方面应用广泛。 相对荧光单位：0~1000RFU 动态线性范围：：≥10* 灵敏度：：>10mol FITC/L 基线噪声： <0.005RFU -基线漂移：≤0.2RFU/h 激发光波长：473nm 发射光中心波长：525(510~540)nm 激光类型：10mWDPSS激光473nm AS1201自动进样器 自动进样系统，标准模式下最多可以进120个不同的样品，它可以作为一个独立系统独自使用，也可以组成个由计算机控制的系统联合使用；温度控制功能对温度敏感的样品，可实现样品腔的冷却或加热过程；样品避光保存；具有抗交叉污染功能。 样品瓶数：两组60位2.0mL样品瓶 二 线性：≥0.999 样品残留：<0.01% 进行阀切换时间：<100ms -进样针定位精度：<0.3mm 进样针清洗方式：内径、外壁清洗(无次数限制清洗) -运动方式：X、Y、Z三维坐标式 二 重复进样次数：无限制 ppH范围：2~11 ZWII色谱柱恒温箱 智能化的 PID 自整定、高亮度数字双模显示、工作站程序控温及状态实时显示、超温报警、断电保护。 温控范围：室温+5℃~160℃ 二 恒温准确性：0.1℃ 恒温精度：-+0.1℃ 温度设定分辨率：0.1℃ 温度的显示：显示器的上行4位数字显示实际温度，下行4位数字显示设定温度 RO1201溶剂管理器 RO1201 溶剂管理器集多种功能于一体，它完美的集成了在线脱气机、溶剂瓶托盘及高性能液相色谱专用溶剂瓶。在进一步确保实验数据准确性、可靠性的同时，优化管路连接，方便您对溶剂的维护管理。 积木式模块化设计，维护方便，最多可以扩充至5元溶剂的管理 内置专业化生产的在线真空脱气机，配杜邦公司TeflonAF材质半透膜脱气通道，快速平衡系统，方便溶剂更换 二集成的溶剂托盘设计，优化管路连接 Schott DURAN 高性能玻璃溶剂瓶为标准流动相储液瓶配置 SinoChrom高效液相色谱柱 我司拥有20年的色谱柱生产经验，其产品国内销量约占同类产品销量的半数以上，并出口美国、印度、东盟、台湾等国家或地区，在国内外具有举足轻重的影响。本公司除生产SinoChrom品牌色谱柱外，还与世界上许多著名的色谱填料及色谱柱生产厂家有着长期的良好 合作关系，可以满足不同领域的广大色谱工作者对质优价廉的液相色谱柱的需要。 本公司还建立了各种设施都十分完善的应用实验室，由其中多名专业人士负责为用户解决色谱柱在实际使用过程中遇到的各种疑难问题，使用户消除了很多烦恼。几年来，经过我们不断的努力，在用户中树立了良好的服务形象。 大连依利特分析仪器有限公司 Www.eliteHPLC.com 公司地址：高新园区七贤岭学子街2-2号 公司电话：0411-84753333(总机)-转销售部 公司传真：0411-84732323 公司邮箱： info@eliteHPLC.com 济南联络处 地址：济南市历城区七里河路锦绣泉城小区8号楼1单元1603室 电话：0531-88908426 传真：0531-88908426 上海办事处 地址：徐汇区梅陇路130号华东理工大学实验四楼204室 电话：021-64233161 传真：021-64233161 长沙办事处 地址：长沙市开福福三一大道与车站北路交汇处，华府一航线 2313房间 电话：0731-85151735 传真：0731-85151735 南京联络处 地址：南京市白下区中华路8号银达雅居二单元706室 电话：025-52335896 传真：025-52335896 厦门联络处 地址：厦门市思明区东坪山路东坪三里83号903室 电话：0592-2573242 传真：0592-2573242 西安办事处 地址：西安市西稍门十字西南角柠檬宫舍11505室 电话：029-68549401、029-68549402 传真：029-84357542 北京办事处 地址：北京市朝阳区汤立路201号东亚奥北中心南区4号楼2单元2307室 电话：010-64127970 传真：010-64127970 大连依利特分析仪器有限公司Dalian EliteAnalytical Instruments Co.， LLtd.