HPLC-HESI/MS/MS、正负切换快速分离鉴定纺织品中的26种致癌、致敏染料

ApplicationNote： CM0037Part of Thermo Fisher Scientific HPLC-HESI/MS/MS、正负切换快速分离鉴定纺织品中的26种致癌、致敏染料 赵洁，刘婷?，王勇为” 1，上海检验检疫，工业品检测实验室； 2，赛默飞世尔科技公司，色谱质谱部 印染加工纺织品中致癌 (Allergenzing Dyes)、致敏染料(Carcinogenic Dyes)的检测，一直是出口的必检项目。目前，主要检测的致敏染料有20种，主要为分散染料；除可分解的致癌芳香胺的偶氮染料外，主要检测的致癌染料有9种；其中，分散蓝1和分散黄3即是致癌染料，也是致敏染料。 由于染料标准品，多数纯度无法法到90%以上，所以致癌、致敏染料的常用检测方法薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)和高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)不但耗时较长，专属性也较差；另外，长期以来，致敏染料和致癌染料使用相同的前处理方法，但检测却是分别检测，所以一个样品需分两次进样，检测时间较长。针对上述两点，本文开发了HPLC-ESI/MS/MS方法，通过正、负切换，一针进样同时检测26种致癌致敏染料，大大提高了方法的专属性，缩短了检测时间。本方法采用外标法，定量下限为0.1mg/L，标准曲线范围为0.1-2mg/L。 实验条件： 仪器与试剂 Surveyor HPLC 液相色谱仪系统，配有Surveyor 自动进样器和MS Pump。 TSQ Quantum Ultra 三重四极杆串联质谱仪(赛默飞世尔科技)，配有HESI Ⅱ源。26种致癌、致敏染料有证标准物质均购自德国Dr Ehrenstorfer 公司； 以甲醇为溶剂分别配制成1g/L标准储备液，并置于-20℃避光冷藏备用。除有特殊说明外，所用试剂至少为分析级，甲醇、乙腈为色谱纯。 以甲醇为溶剂，对储备液进行梯级稀释，配制如下两组标准工作液： (1)碱性红9、碱性紫14； (2)分散蓝1、分散蓝3、分散蓝7、分散蓝26、分散蓝35、分散蓝102、分散蓝106、分散蓝124、分散橙1、分散橙3、分散橙37/76、分散红1、分散红11、分散红17、分散 黄1、分散黄3、分散黄9、分散黄39、分散黄49、分散棕1、分散橙11、直接黑38和直接红28、酸性红26。 样品制备 取代表性样品剪成5mmx5mm的碎片，混匀。称取1.0g试样，精确至0.01g，置于提取器中。往提取器中准确加入10mL甲醇，旋紧盖子，将提取器置于70℃的超声波浴中萃取30 min， 冷却至室温。用0.45um 聚四氟乙烯薄膜过滤至样品瓶中，待测。 色谱柱： Hypersil Gold 100x2.1mm， 3pm；梯度洗脱和流速见表1，其中A：乙腈；B：0.02%乙酸、5mM乙酸铵水溶液；柱温：40℃；进样量：5pL。 表1.梯度洗脱和流速 时间(min) 0.5 11 13 13.1 15 A 20 20 80 80 20 20 B 80 80 20 20 80 80 TSQ Quantum质谱仪条件 Instrument Method采用EZ Method 界面，采用时间窗功能，进行正、负离子切换；：日电喷雾电离源(ESI) ，选择反应监控(SRM)扫描模式，喷雾电压：4200V(+)、2800V(-)；蒸发温度：100℃；离子传输管温度：340℃；氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气为40 arb， 辅助气为10 arb， 氩气用作碰撞气，碰撞压力为1.5mTorr， Cycle Time 为0.65s； 选择反应监测 (SRM)离子对见表2。 表2.选择反应监测(SRM)离子对 结果与讨论： 本方法中，26种致癌、致敏染料在纺织品中的定量下限为 0.1mg/L， 在0.1 mg /L-2 mg /L范围内成线性。图1为26种分散染料0.1mg/L的典型LC/MS/MS色谱图。 图1.26种致癌、致敏染料0.1mg /L的LC/MS/MS色谱图 RT： 0.00-15.00 SM： 3B 0.68 Acid Red26 NL： 2.25E4 100- 2.06 Base Peak m/z= 136.10-137.10 F：-c ESISRM 50- ms2 217.012[136.603-136.605， 150.454-150.456] MS 2009121407 0- 0.88 2.25 3.92 6.56 NL： 3.23E4 100- Disperse Yellow9 Base Peak m/z=225.50-226.50 F：-c ESI SRM 50- ms2 273.090 [226.044-226.046，242.100-242.102] MS 2009121407 7.56 0- 6.04 6.59 NL： 1.10E5 100- Disperse Yellow1 Base Peak m/z= 243.50-244.50 F：-c ESISRM 50- ms2 274.082 [226.063-226.065， 244.098-244.100] MS 2009121407 0- 6.947.56 4.25 NL： 1.86E4 100- Direct Red28 TIC F：-c ESI SRM ms2 325.069 50- [416.154-416.156] MS 2009121407 3.69 0- 4.69 5.64 100- Direct Blank38 NL： 1.77E3 Base Peak m/z= 356.50-357.50 F：-c ESI SRM 50- ms2 736.125 [356.999-357.001， 672.399-672.401] MS 2009121407 4.85 6.51 0 7.51 NL： 3.41E4 100- Disperse Orange11 6.25 6.33 Base Peak m/z=222.50-223.50 F： +c ESI SRM 50- 7.81 7.978.86 ms2 238.000 [164.999-165.001， 222.999-223.001] N ww MS 2009121407 0- 7.65 100 Disperse Orange3 NL： 1.21E5 Base Peak m/z= 121.50-122.50 F： +cESI SRM 50- ms2 243.127 [75.177-75.179， 122.132-122.134] 6.86 8.13 MS 2009121407 0- TT TTTTTTTT 0 2 4 6 8 10 12 14 Time (min) RT： 0.00-15.00SM： 3B NL： 1.02E6 100- Disperse Blue26 TIC F：+c ESI SRM ms2 299.157 9.81 10.59 8.45 7.46儿8.76 9.39 10.85 50- [284.119-284.121] MS 2009121407 NL： 1.57E6 Base Peak m/z=133.50-134.50F：+c ESI SRM 0- 100- Disperse Red1 50-二 1- 100- ms2 315.160[134.180-134.182，255.250-255.252] MS 2009121407 Disperse Orange1 NL： 2.11E5 Base Peak m/z=168.50-169.50 F： + c ESI SRM 10.62 11.03 7.37 13.1914.19 50- ms2 319.147 [168.152-168.154， 169.164-169.166] MS 2009121407 0- NL： 7.45E5 100- Disperse Blue106 Base Peak m/z= 177.50-178.50 F：+c ESI SRM 50- ms2 336.144[147.120-147.122， 178.234-178.236] 0- 6.44 7.56 MS 2009121407 100- 7.15 Disperse Red17 NL： 2.18E5 Base Peak m/z=163.50-164.50F：+c ESI SRM 50- ms2 345.134 [164.112-164.114， 177.142-177.144] MS 2009121407 0- 100- 6.80 7.29 8.05 4.83 Disperse Blue7 NL： 2.46E5 TIC F： + c ESI SRM ms2 359.172 50- [283.044-283.046] MS 2009121407 0- 4.33 5.17 6.55 NL： 5.86E4 100一 Disperse Blue102 TIC F： +C ESI SRM ms2 366.127 50- [208.156-208.158] MS 2009121407 0- 6.13 6.91 0 2 6 8 10 12 14 Time (min) Time (min) ( 参考文献 ) 本方法大大缩减了检测时间，比较染料检测的常用方法，有很好的专属性。由于酸性染料和碱性染料混合后会发生反应，所以，标准工作液需要分两组测定。由于在流动相的PH值条件下， Acid Red26、Direct Red28的多电荷峰响应高于其分子离子峰，故用其多电荷离子作为母离子进行测定。 EZ Method中时间窗的设定，大大提高了仪器的扫描效率，保证了在正、负切换条件下的扫描点数。