IPHASE/汇智和源人CYP450酶诱导mRNA水平检测试剂盒（SYBR法）研发成功

酶诱导是指细胞在底物影响下进行特定酶合成量增加的作用。药物代谢主要发生在肝脏和肠道。其中肝脏代谢主要由位于肝细胞滑面内质网的细胞色素P450（Cytochrome P450，CYP）催化，少部分由非CYP酶（如UGT酶）催化代谢。据统计，临床上超过90%的药物由CYP450酶代谢。 PART.01    CYP450酶诱导机理及试验方法现已证明CYP450酶表达受孕烷X受体 (PXR)、组成型雄烷受体 (CAR)、芳烃受体（AHR）等核受体调控。这3个核受体均为转录因子，当与配体结合激活后，核受体会从细胞质转入细胞核中。其中，PXR和AhR分别与细胞核内的视黄醛X受体（RXR）和转运蛋白（ARNT）形成异源二聚体，进而结合在相应靶基因上（如CYP酶），调节CYP酶的表达。AhR参与CYP1A2的诱导；PXR主要参与CYP3A4的诱导，其次是2C亚家族；CAR与PXR的诱导谱非常重叠，此外有研究表明CAR还可以诱导CYP2B6。因此，在药物早研期间，可只评估CYP1A2，CYP2B6 和 CYP3A4的诱导作用。 由于CYP酶诱导的试验是从“转录”、“翻译”、“蛋白质翻译后修饰”直至成为活性CYP酶蛋白，所以CYP酶试验系统必须是肝细胞而非其亚结构如肝微粒体或肝S9。随后在CYP450酶诱导试验时，通常需要结合酶活性和mRNA两个水平上的结果做结论。当仅做酶活性试验时，若药物同时存在酶抑制现象时，可能会掩盖诱导作用；而测量mRNA水平则能更真实地反应诱导源头上的效应，且更为敏感，直观地避免了酶活性检测存在的问题。 鉴于此，为满足客户精准地了解其早研药物的酶诱导作用，IPHASE技术人员成功研发人CYP450酶诱导表达检测试剂盒（SYBR法）！ PART.02    IPHASE产品IPHASE作为创新药体外研究生物试剂引领者，技术人员以SYBR染料法，采用ΔΔCT-定量PCR的方式检测CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4这三个CYP酶基因经奥美拉唑、苯巴比妥和利福平诱导后其mRNA水平的变化，发现其mRNA倍数变化均显著增加，满足药物相互作用指导原则，说明IPHASE人CYP450酶诱导mRNA水平检测试剂盒（SYBR法）能够满足客户在mRNA水平上进行酶诱导实验。 IPHASE人CYP450酶诱导mRNA水平检测试剂盒（SYBR法）提供给客户提供进行qPCR试验的扩增试剂，CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4这三个CYP酶基因以及一个内参基因GAPDH的特异性引物。经验证，IPHASE所提供的特异性引物扩增效率高，且熔解曲线无杂峰，满足客户的试验需求。 图1.CYP1A2引物扩增效率图注：R2=98.4%；Eff%=106.401%（R2越接近100%扩增效率越好；Eff扩增效率越接近90%~110%越好，下同） 图2.CYP2B6引物扩增效率图注：R2=98.5%；Eff%=95.791% 图3.CYP2B6熔解曲线图 图4.CYP3A4熔解曲线图 图5.内参基因GADPH标准曲线图 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科研工作者来电咨询，咨询热线400-127-6686。 发    文    章    得     奖    励凡使用本公司产品，在国内及国际刊物上发表论文（论文发表日起一年内），并注明产品属于汇智和源/IPHASE所有，即可申请奖励。根据发表刊物影响因子不同，给予不同金额奖品：非SCI论文及IF≤5分，500元礼品；5分＜IF≤8分 800元；8分＜IF≤10分 1000元；IF≥10分 2000元；注：礼品卡也可兑换同等金额产品购买抵用券；活动多多，礼品丰厚，快来参与吧！ 关    于    我    们汇智和源，致力于为创新药研发企业及生命科学研究机构提供高品质的生物试剂，IPHASE为公司核心品牌，品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。IPHASE/汇智和源人CYP450酶诱导mRNA水平检测试剂盒（SYBR法）研发成功 酶诱导是指细胞在底物影响下进行特定酶合成量增加的作用。药物代谢主要 发生在肝脏和肠道。其中肝脏代谢主要由位于肝细胞滑面内质网的细胞色素 P450（Cytochrome P450，CYP）催化，少部分由非 CYP酶（如 UGT酶）催化代 谢。据统计，临床上超过 90%的药物由 CYP450酶代谢。 一、CYP450酶诱导机理及试验方法 现已证明 CYP450酶表达受孕烷 X受体(PXR)、组成型雄烷受体(CAR)、芳烃受体（AHR）等核受体调控。这 3个核受体均为转录因子，当与配体结合激 活后，核受体会从细胞质转入细胞核中。其中，PXR和 AhR分别与细胞核内的视 黄醛 X受体（RXR）和转运蛋白（ARNT）形成异源二聚体，进而结合在相应靶基 因上（如 CYP酶），调节 CYP酶的表达。AhR参与 CYP1A2的诱导；PXR主要参 与 CYP3A4的诱导，其次是 2C亚家族；CAR与 PXR的诱导谱非常重叠，此外有 研究表明 CAR还可以诱导 CYP2B6。因此，在药物早研期间，可只评估 CYP1A2， CYP2B6和CYP3A4的诱导作用。 由于 CYP酶诱导的试验是从“转录”、“翻译”、“蛋白质翻译后修饰”直 至成为活性 CYP酶蛋白，所以 CYP酶试验系统必须是肝细胞而非其亚结构如肝 微粒体或肝 S9。随后在 CYP450酶诱导试验时，通常需要结合酶活性和mRNA两 个水平上的结果做结论。当仅做酶活性试验时，若药物同时存在酶抑制现象时，可能会掩盖诱导作用；而测量mRNA水平则能更真实地反应诱导源头上的效应，且更为敏感，直观地避免了酶活性检测存在的问题。 鉴于此，为满足客户精准地了解其早研药物的酶诱导作用，IPHASE技术人员 成功研发人 CYP450酶诱导表达检测试剂盒（SYBR法）！ 二、IPHASE产品 IPHASE作为创新药体外研究生物试剂引领者，技术人员以 SYBR染料法，采 用ΔΔCT-定量PCR的方式检测 CYP1A2、CYP2B6和 CYP3A4这三个CYP酶基因经 奥美拉唑、苯巴比妥和利福平诱导后其 mRNA水平的变化，发现其 mRNA倍数变 化均显著增加，满足药物相互作用指导原则，说明 IPHASE人 CYP450酶诱导mRNA 水平检测试剂盒（SYBR法）能够满足客户在mRNA水平上进行酶诱导实验。 IPHASE人 CYP450酶诱导mRNA水平检测试剂盒（SYBR法）提供给客户提 供进行qPCR试验的扩增试剂，CYP1A2、CYP2B6和 CYP3A4这三个CYP酶基因以 及一个内参基因 GAPDH的特异性引物。经验证，IPHASE所提供的特异性引物扩 增效率高，且熔解曲线无杂峰，满足客户的试验需求。 图 1.CYP1A2引物扩增效率图 注：R2=98.4%；Eff%=106.401% （R2越接近 100%扩增效率越好；Eff扩增效率越接近 90%~110%越好，下同） 图 2.CYP2B6引物扩增效率图 注：R2=98.5%；Eff%=95.791% 图 3.CYP2B6熔解曲线图 图 4.CYP3A4熔解曲线图 图 5.内参基因 GADPH标准曲线图 IPHASE/汇智和源凭借多年的研发经验，推出了多领域、多种类的高端科研 试剂，为药物早期研发提供筛选工具，为生命科学领域的探索提供新材料、新方 法和新手段，为食品、药品、化学品等的遗传毒性研究提供便捷产品，望广大科 研工作者来电咨询，咨询热线 400-127-6686。