Copure® | 猪肉中阿莫西林残留的测定（液相色谱-串联质谱法）

猪肉中阿莫西林残留的测定液相色谱-串联质谱法阿莫西林(Amoxicillin)，属于青霉素类β-内酰胺抗生素，为半合成的耐酸广谱青霉素类抗菌素。阿莫西林的不当或过量使用都会造成其在动物性食品中的残留，食用后会导致人体内白血球降低，影响内脏功能，发生脏器损害等。本方案采用0.2 %甲酸乙腈:水=80:20（V:V）溶液提取，Copure® HLB Lim净化，液相色谱-串联质谱分析，建立了对动物猪肉中阿莫西林药物残留量的测定方法，通过加标实验验证，回收率和精密度均能满足标准要求。1、 提取准确称取粉碎均匀的猪肉样品1.00 g于干净离心管中，加入5 mL 0.2 %甲酸乙腈:水=80:20（V:V）溶液，涡旋混匀后超声提取20 min，8000 r/min离心5 min，待净化。二、净化取2.5 mL上述上清液至Copure® HLB Lim柱，收集全部流出液，流出液氮吹近干后，用定溶液（475 mL水+25 mL乙腈+1.5 mL冰乙酸）定容至1 mL，过滤膜上机测试。三、基质曲线的制备称取7 个阴性1.00 g（精确至0.01 g）试样至50 mL离心管中，加入相应体积的阿莫西林使用液，样本中的阿莫西林浓度分别为1.0、2.0、4.0、10、20、30、40 μg/kg。按上述前处理方法进行提取净化，最后定容过滤膜上机测试。四、仪器条件4.1 色谱条件仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）色谱柱：CommaSil® C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7 μm)流动相：A：0.1%甲酸水  B：乙腈洗脱方式：梯度洗脱，见表1表1 梯度洗脱程序时间/minA（0.1%甲酸水）/%B（乙腈）/%0.0095.05.01.0095.05.02.0065.035.03.505.095.04.005.095.04.1095.05.06.0095.05.0流速：0.400 mL/ min柱温：35 ℃进样量：5 μL4.2 质谱条件离子源：HESI         电喷雾电压：3500 V鞘气压力：28 arb       辅气压力：5 arb离子传输管：380 ℃     辅气温度：420 ℃表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）种类保留时间/min母离子子离子阿莫西林2.69366.05114.0*、208.0五、实验结果5.1 线性范围表3  阿莫西林线性关系、相关系数化合物线性回归方程R2阿莫西林y=711.46x-146.750.99815.2 加标回收表4  阿莫西林加标回收率化合物10 μg/kg回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）阿莫西林1081071081080.54图1 添加水平为10 μg/kg时猪肉中阿莫西林提取离子图6、 订购信息货号描述包装COHLB360-LimCopure® HLB-lim净化柱，60 mg/3 mL50支/盒SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱BN24智能水浴氮吹仪1台/箱SF250-22-NL尼龙针式过滤器，直径25 m，孔径0.22 μm，有机系100个/盒SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒猪肉中阿莫西林残留的测定 液相色谱-串联质谱法 阿莫西林(Amoxicillin)， 属于青霉素类β-内酰胺抗生素，为半合成的耐酸广 谱青霉素类抗菌素。阿莫西林的不当或过量使用都会造成其在动物性食品中的残 留，食用后会导致人体内白血球降低，影响内脏功能，发生脏器损害等。 本方案采用0.2%甲酸乙腈：水=80：20(V：V)溶液提取， Copure@ HLB Lim 净化，液相色谱-串联质谱分析，建立了对动物猪肉中阿莫西林药物残留量的测 定方法，通过加标实验验证，回收率和精密度均能满足标准要求。 一、提取 准确称取粉碎均匀的猪肉样品 1.00g于干净离心管中，加入5 mL 0.2%甲酸 乙腈：水=80：20(V：V)溶液，涡旋混匀后超声提取 20 min， 8000 r/min 离心 5 min，待净化。 二、净化 取 2.5 mL 上述上清液至 CopureQ HLB Lim 柱，收集全部流出液，流出液氮 吹近干后，用定溶液(475 mL 水+25 mL 乙腈+1.5 mL冰乙酸)定容至1mL，过 滤膜上机测试。 三、基质曲线的制备 称取7个阴性1.00g(精确至0.01g) 试样至50mL离心管中，加入相应体 积的阿莫西林使用液，样本中的阿莫西林浓度分别为1.0、2.0、4.0、10、20、30、40 ug/kg。按上述前处理方法进行提取净化，最后定容过滤膜上机测试。 四、仪器条件 4.11色谱条件 仪器： UPLC-MS/MS (Thermo Fisher TSQ Endura) 色谱柱： CommaSil@ C18 (2.1 mmx100 mm， 1.7 um) 流动相 ：：A：0.1%甲酸水 B 3：：乙腈 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 表1梯度洗脱程序 时间/min A (0.1%甲酸水) B(乙腈)//% 0.00 95.0 5.0 1.00 95.0 5.0 2.00 65.0 35.0 3.50 5.0 95.0 4.00 5.0 95.0 4.10 95.0 5.0 6.00 95.0 5.0 流速：0.400mL/min 柱温：35℃ 进样量：5uL 4.2质谱条件 离子源： HESI电喷雾电压：3500V 鞘气压力：28arb辅气压力：5arb 辅气温度：420℃ 离子传输管：380℃ 表2组分名称、保留时间及特征离子 一 览表(*为定量离子) 种类 保留时间/min 母离子 子离子 阿莫西林 2.69 366.05 114.0*、208.0 五、实验结果 5.1线性范围 表3阿莫西林线性关系、相关系数 化合物 线性回归方程 R2 阿莫西林 y=711.46x-146.75 0.9981 5.2加标回收 表4 阿莫西林加标回收率 化合物 10 pg/kg 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%) 阿莫西林 108 107 108 108 0.54 图1添加水平为 10 ug/kg 时猪肉中阿莫西林提取离子图 六、订购信息 货号 描述 包装 COHLB360-Lim CopureQ HLB-lim 净化柱， 60 mg/3mL 50支/盒 SDC-3000-D biocomma@多管涡旋混匀仪 1台/箱 BN24 智能水浴氮吹仪 1台/箱 SF250-22-NL 尼龙针式过滤器，直径25m， 孔径0.22 um， 有机系 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色 PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm， 9-425 100个/盒