花生中黄曲霉毒素的测定 （Copure® 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱）

花生中黄曲霉毒素的测定（Copure® 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱）《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》收获后的花生在流通和储藏过程中，容易受到霉菌的污染而发生霉变。其中，黄曲霉毒素在霉变花生中常被检出。花生受到黄曲霉毒素B1（AFB1）污染后不仅会降低花生的营养和商业价值，更重要的是影响花生及其制品的可食性和安全性。免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。逗点生物结合自身产品优势，建立了免疫亲和-高效液相色谱串联质谱法测定花生中AFB1含量的方法，试样经提取后，经免疫亲和柱净化，经质谱分析，同位素内标法定量。经验证，加标回收率范围90-110%，RSD值小于5%，满足测试要求。样本前处理1.1提取花生经粉粹后，称取样本5.0 g(精确至0.01 g)于50 mL离心管(带盖)中，加入100 μL同位素内标工作液（10 ng/mL）后静。加入20 mL 乙腈水溶液（84+16），涡旋振荡提取20 min，8000 r/min离心5.0 min。取4.0 mL提取滤液，加入20 mL PBS溶液，混匀待净化。 1.2净化 将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上，将上述全部待净化稀释液过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱（货号：COAFMB103），流速控制在1~2滴/秒。然后依次加入5.0 mL PBS缓冲溶液和5.0 mL一级水淋洗小柱，弃去全部流出液，压干。用1.0 mL甲醇进行洗脱，关闭阀门浸泡30 s，然后洗脱至进样小瓶中，LC-MS/MS测试。1.3过程空白实验不称取试样，按上述步骤进行实验。仪器条件色谱柱：Commasil® T-C18(2.1 mm×100 mm,3 μm)流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液  B：甲醇（含0.1%甲酸）流速：0.3 mL/min   柱温：30℃   进样量：5 μL洗脱程序：梯度洗脱表1表1 梯度洗脱程序    时间/minA/%B/%0.090101.240602.110904.810905.090106.09010离子源：HESI     扫描方式：正离子模式（ESI+）鞘气压力：30 arb   辅气压力：8 arb    离子传输管：300 ℃    辅气温度：350 ℃表2 组分名称、及特征离子一览表（*为定量离子）名称母离子子离子离子模式黄曲霉毒素B1313.1241.1、285*ESI+13C17-AFB1330.1255、301*ESI+实验测试结果表3 花生中黄曲霉毒素B1加标回收实验结果检测项目加标浓度（μg/kg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）黄曲霉毒素B11.001081052.52104103图1 黄曲霉毒素B1校准点外标和同位素内标的定量离子提取色谱图（1.0 μg/L）图2 花生中黄曲霉毒素B1外标和同位素内标的定量离子提取色谱图（加标浓度1.00 μg/kg）订购信息货号描述包装COAFMB103Copure®黄曲霉毒素B1免疫亲和柱，3 mL20支/盒CS2110003C18Commasil® T-C18 2.1 mm*100 mm，3 μm1根/盒SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒花生中黄曲霉毒素的测定 (Copure 黄曲霉毒素B1免疫亲和柱) 《GB 5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》 收获后的花生在流通和储藏过程中，容易受到霉菌的污染而发生霉变。其中，黄曲霉毒 素在霉变花生中常被检出。花生受到黄曲霉毒素B (AFB1)污染后不仅会降低花生的营养 和商业价值，更重要的是影响花生及其制品的可食性和安全性。 免疫亲和法具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。逗点生物结合自身产品优势，建立了免疫亲和-高效液相色谱串联质谱法测定花生中 AFB1含量的方法，试样经提取后，经 免疫亲和柱净化，经质谱分析，同位素内标法定量。经验证，加标回收率范围90-110%， RSD 值小于5%，满足测试要求。 一、样本前处理 1.1提 取 花生经粉粹后，称取样本5.0g(精确至0.01g)于 50mL离心管(带盖)中，加入 100 uL同 位素内标工作液(10ng/mL)后静。加入20 mL 乙腈水溶液(84+16)，涡旋振荡提取20 min，8000 r/min 离心 5.0 min。取 4.0 mL提取滤液，加入20mL PBS溶液，混匀待净化。 1.2净化 将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上，将上述全部待净化稀释液过黄曲霉毒素B1免疫 亲和柱(货号： COAFMB103)， 流速控制在1~2滴/秒。然后依次加入 5.0 mL PBS 缓冲溶 液和 5.0 mL 一 级水淋洗小柱，弃去全部流出液，压干。用1.0 mL 甲醇进行洗脱，关闭阀门 浸泡30s，然后洗脱至进样小瓶中，LC-MS/MS测试。 1.3过程 空 白实验 不称取试样，按上述步骤进行实验。 二、仪器条件 色谱柱： Commasil T-C18(2.1 mm×100 mm，3 um) 流动相： A： 5 mmol/L 乙酸铵溶液 B：甲醇(含0.1%甲酸) 流速：0.3mL/min 柱温：30℃C 进样量：5pL 洗脱程序：梯度洗脱表1 表1梯 度 洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.0 90 10 1.2 40 60 2.1 10 90 4.8 10 90 5.0 90 10 6.0 90 10 离子源： HESI 扫描方式：正离子模式 (ESI +) 鞘气压力：30 arb 辅气压力：8arb 离子传输管：300℃ 辅气温度：350℃ 表2组分名称、及特征离子 一 览表(*为定 量 离子) 名称 母离子 子离子 离子模式 黄曲霉毒素 Bi 313.1 241.1、285* ESI+ 13C17-AFB1 330.1 255、301* ESI+ 三、实验测试结果 表3花生中黄曲霉 毒 素Bi加标回收实验结果 标浓度 (ug/kg> 回收率((%) 平均回收率((%) 黄曲霉毒素Bi 1.00 108 105 2.52 104 103 图1黄 曲 霉 毒素B1校准点外标和同位素内标的定 量 离子提取色谱图(1.0ug/L) 图2花生中黄曲霉 毒 素B1外标和同位素内标的定 量 离子提取色谱图(加标浓度1.00 ug/kg) 四、订购信息 货号 描述 包装 COAFMB103Copure@黄曲霉毒素B1 免疫亲和柱，3mL 20支/盒 CS2110003C18 Commasil@T-C18 2.1 mm*100 mm， 3 um 1根/盒 SDC-3000-D biocomma@多管涡旋混匀仪 1台/箱 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫， 9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm， 9-425 100个/盒