Copure® MCX | GB 31658.23-2022猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定

Copure® MCX柱硝基咪唑类抗菌药物（Nitroimidazoles）是一类人工合成的抗菌药物。常见的有甲硝唑、替硝唑等。硝基咪唑类对厌氧菌及原虫有独特的杀灭作用，与其他抗生素联合应用于临床的各个领域。食品安全监督抽检实施细则（2023年版）中新增了GB 31658.23-2022《猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定》方法。本方法采用Copure® MCX柱，测试了猪肉中的甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑，优化了相关测试步骤，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的测试方法，可供参考。一样本前处理1.1 样品提取1）称取 2g猪肉样品于50 mL塑料离心管中，加入0.100μg/mL混合内标工作液100μL，涡旋30s混匀，静置10min。加入乙酸乙酯15mL，振荡10min，9500r/min离心5min，吸取上层清液于另一个50mL离心管中。2）用15mL 乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，于40℃水浴氮气吹干 。1.2 净化1）残余物中加入0.1mol/L盐酸溶液5mL，涡旋1min充分溶解，加正己烷5mL,振摇1min，9500r/min离心5min，弃正己烷层，下层再加正己烷5mL重复除脂一次，弃正己烷层，下层水相备用。2）用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L盐酸溶液依次活化MCX混合型阳离子交换反相固相萃取柱；取全部备用液过柱，依次用3mL 0.1mol/L盐酸溶液、3mL甲醇淋洗，抽干；加5mL 5%氨化甲醇洗脱，抽干，收集洗脱液。3）将收集的洗脱液于40℃下氮吹至近干，加0.1%甲酸水溶液定容至0.5mL，涡旋30s溶解残渣，过0.22 μm微孔滤膜，上机测定。SDC-3000-D 多管旋涡混匀仪1.3 标准曲线的制备精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量，用0.1%甲酸水溶液稀释成浓度为0.500μg/L、1.00μg/L、2.00 μg/L、5.00 μg/L、10.0 μg/L、25.0 μg/L的系列标准工作液，内标为20.0μg/L，过0.22μm微孔滤膜，上机测定。样品瓶针式过滤柱二仪器条件仪器设备：液相色谱-串联四级杆质谱仪（Triple Quad 5500）色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7m 2.150mm Column流动相： A：0.1%甲酸水    B：乙腈流动相梯度：初始95%A，95%A（0 min~1.00 min），10%A（1.00 min~3.00min），10%A（3.00 min~4.20min），95%A（4.20 min~4.50min）， 95%A（4.50min~5.00min）流速：0.300 mL/min柱温：40℃进样体积：4.0 μL质谱条件：检测方式：多反应离子监测（MRM）表1 离子源控制条件表2 待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值注：*为定量离子。三实验结果表3 2.50μg/kg猪肉中硝基咪唑类药物加标回收实验结果图1  硝基咪唑类药物总离子流图 图2  硝基咪唑类药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (20.0μg/L) 图3 硝基咪唑类药物标准溶液特征离子质量色谱图 (2.00μg/L) 四订购信息逗点生物产品方案/GB 31658.23-2022 猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定 (Copure@ MCX) 硝基咪唑类抗菌药物 (Nitroimidazoles)是一类人工合成的抗菌药物。常见的有甲硝唑、替硝唑等。硝基咪唑类对厌氧菌及原虫有独特的杀灭作用，与其他抗生素联合应用于临床的各个领域。 食品安全监督抽检实施细则(2023年版)中新增了 GB 31658.23-2022 《猪肉中硝基咪唑类药物残留量的测定》方法。本方法采用 CopureMCX柱，测试了猪肉中的甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑，优化了相关测试步骤，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的测试方法，可供参考。 、样品前处理 1.1 样品提取 (1)称取2g猪肉样品于 50 mL塑料离心管中，加入0.100ug/mL 混合内标工作液100pL，涡旋 30s混匀，静置10min。加入乙酸乙酯 15mL，振荡 10min， 9500r/min 离心 5min， 吸取上层清液于另一个50mL 离心管中； (2)用15mL 乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，，于40℃水浴氮气吹干。 1.2 净化 (1)残余物中加入0.1mol/L 盐酸溶液 5mL，涡旋 1min 充分溶解，加正己烷 5mL， 振摇 1min， 9500r/min 离心 5min，弃正己烷层，下层再加正己烷 5mL 重复除脂一次，弃正己烷层，下层水相备用。 (2)用3mL甲醇、3mL 0.1mol/L 盐酸溶液依次活化 MCX 混合型阳离子交换反相固相萃取柱；取全部备用液过柱，依次用3mL 0.1mol/L 盐酸溶液、3mL甲醇淋洗，抽干；加5mL5%氨化甲醇洗脱，抽干，收集洗脱液； (3)将收集的洗脱液于40℃下氮吹至近干，加0.1%甲酸水溶液定容至0.5mL， 涡旋 30s溶解残渣，过 0.22 um微孔滤膜，上机测定。 1.3标准曲线的制备 精密量取混合标准工作液、混合内标工作液适量，用0.1%甲酸水溶液稀释成浓度为 0.500ug/L、1.00pg/L、2.00 ug/L、5.00 ug/L、10.0 ug/L、25.0 ug/L 的系列标准工作液，内标为20.0ug/L，过 0.22um微孔滤膜，上机测定。 二、仪器条件 仪器设备：液相色谱-串联四级杆质谱仪 (Triple Quad 5500) 色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18 1.7um 2.1×50mm Column 流动相： A： 0.1%甲酸水 B：乙腈 流动相梯度：初始95%A， 95%A (0 min~1.00 min)， 10%A (1.00 min~3.00min)，10%A (3.00 min~4.20min)， 95%A (4.20 min~4.50min)， 95%A (4.50min~5.00min) 流速：0.300mL/min 柱温：40℃ 进样体积：4.0uL 质谱条件： 检测方式：：多反应离子监测(MRM)； 表1离子源控制条件 电离方式 ESI+ Curtain Gas(CUR) 45.0Psi Collision Gas(CAD) 8Psi IonSpray Voltage(IS) 5000.0V Temperature(TEM) 500.0℃ Ion Source Gas 1(GS1) 55Psi Ion Source Gas 1(GS2) 55Psi 表2待测药物定性离子对、定量离子对、保留时间、去簇电压和碰撞能量参考值 化合物名称 母离子(m/z) 子离子 (m/z) 保留时间(min) DP (V) CE (V) 甲硝唑 172.1 128.2* 2.51 30 20 82.1 34 甲硝唑-D3 175.0 131.0 2.49 30 20 羟基甲硝唑 188.2 123.2* 2.38 60 19 126.2 34 羟基甲硝唑-D2 190.0 125.2 2.37 60 13 地美硝唑 142.0 96.0* 2.64 30 24 81.2 40 地美硝唑-D3 145.0 99.0 2.62 60 15 羟基地美硝唑 158.0 140.3* 2.53 60 16 55.2 25 羟基地美硝唑-D3 161.0 143.0 2.52 60 22 注：*为定量离子。 三、实验结果 表 3 2.50ug/kg 猪肉中硝基咪唑类药物加标回收实验结果 检测项目 回收率(%) 平均回收率(%) RSD (%) 1 2 3 甲硝唑 98.4 94.8 100 97.7 2.73 羟基甲硝唑 102 96.4 93.4 97.3 4.49 地美硝唑 97.2 93.4 100 96.9 3.42 羟基地美硝唑 112 98.6 103 105 6.53 图1 硝基咪唑类药物总离子流图 图2硝基咪唑类药物同位素内标标准溶液特征离子质量色谱图 (20.0ug/L) 172.100/128.200 Da 1.0e5 5.0e4 0.0e0L 羟基甲硝唑 188.200/123.200 Da 3e4 2e4c1e4 0e0 羟基地美硝唑 158.000/140.300 Da 4e43e4-2e4-cc1e4- 0e0 172.100/82.100 Da 5e4 4e4 3e4c2e4c1e4 0e0 羟基甲硝唑(定性) 188.200/126.200 Da 3e4- 2e4c1e4 0e0 142.000/81.200 Da 20000ec10000 羟基地美硝唑(定性) 158.000/55.200 Da 15000 10000y5000 地美硝唑 142.000/96.000 Da 5e4ncc 0e0 图3 硝基咪唑类药物标准溶液特征离子质量色谱图图(2.00ug/L) 四、订购信息 货号 描述 包装 COMCX360 CopureQMCX 固相萃取柱， 60 mg/3mL 50支/盒 SDC-3000-D biocomma@ 多管涡旋混匀仪 1台/箱 BN24 智能水浴氮吹，含可视化界面 1台/箱 SF130-22-PTFE-HL 针式过滤器， PTFE， 直径13mm， 孔径0.22um 100个/盒 SC2-1 2 mL 蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm， 9-425 100个/盒