食品微生物检验GB4789.3-2016大肠菌群计数及注意事项

什么是MPN法？MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。MPN值并不能表示实际菌落数。实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。灵敏度较高，适用于污染菌落较少的样品。大肠菌群MPN计数的检验操作操作注意事项建议用磷酸盐缓冲液作为稀释液因为磷酸盐缓冲能更好地纠正食品样本中pH变化，对细菌具有保护作用。图为：生理盐水均质袋 / 袋装即用型）200/250mL500mL20×32cm初发酵接种量超过1mL，则用双料LST肉汤。双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）适用于大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的测定检查培养基加入样品前应观察导管内是否有气泡，若有，应适当倾斜试管，让气体排出。结果观察某些食品样品可能会堵塞小导管底部，影响导管内气泡的观察，可将试管微微倾斜，用手指轻弹管壁，观察是否有一串小气泡沿管壁升起，若有，则判定产气。培养基原理解析月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）操作tips▼• 月桂基硫酸盐能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好。• 由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难。• 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别。• 大肠菌群和肠道致病菌。• 胰蛋白胨提供基本的营养成分。• LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性。• 发酵试验判定原则：产气为阳性。• 检测步骤减少（不必分离培养），检测时间缩短24h。• 接种量超过1mL，则应用双料LST肉汤。煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）操作tips▼• 胆盐与煌绿均能抑制革兰氏阳性菌生长。• 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类，有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。• 发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解。• 培养基配方当中含有胆盐，大肠菌群发酵乳糖所产的酸会与胆盐发生反应，形成胆酸沉淀。培养基可由原来的绿色变为黄色，如下如所示：大肠菌群最大可能数（MPN）报告确证的大肠菌群BGLB阳性管数，检索MPN表，报告每1g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。表▼:大肠菌群最可能数(MPN)检索表这个MPN检索表是ISO、FDA、AOACUSDA/FSIS、北欧等标准通用的•表里的数字是有小数点的。•数值不连续：通过MPN查到的结果全部是不连续的结果，这在日常检验和质量控制中将带来不便。如部分产品的限量值为lOOMPN。•GB/T 4789.3-2003 中MPN表有64个组合，而GB 4789.3-2016MPN表只有40个组合。当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122、123、232、233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点(如果污染程度不能判定，则多加一稀释度)，然后再遵循相关的规则进行查找，最终确定MPN值。实验想做好，利器不可少超多好物可选，为您实验保驾护航逗点生物提供食品中大肠菌群微生物检测配套产品及相关耗材，种类齐全、符合标准，如感兴趣，欢迎来询~