奶茶中合成着色剂检测方案(旋涡混合器)

奶茶中8种合成着色剂的含量测定（Copure®WAX） 合成着色剂可以改善食品色泽，刺激感官，增加食欲，在日常生活中应用范围日益广泛，是现代食品工业中装点食品的重要添加剂，但过量使用会对人体健康造成损害。奶茶，含有大量的蛋白、脂肪和糖分，在测定合成着色剂时，该成分容易使固相萃取柱堵塞，导致上柱流速慢，前处理耗时。本方案通过在提取液中加入硫酸锌溶液作为沉淀剂，可大幅度减少蛋白、脂肪和糖分等带来的不利影响。 以乙醇氨水溶液提取，混合弱阴离子交换柱净化，高效液相色谱法检测，成功测定了奶茶中柠檬黄、日落黄、新红、胭脂红、苋菜红、诱惑红、亮蓝和赤藓红这8种合成着色剂，本方案操作简单实用，灵敏度高，准确，可满足日常检测需求。 一、样品提取 称取2.0 g试样于50 mL离心管中，加入5 mL硫酸锌溶液（120 g/L），混匀后，乙醇氨水溶液25 mL，涡旋混合1 min，超声提取15 min，以8000 r/min离心5 min，取上清液于干净50 mL离心管中，再加入15 mL提取液重复提取1次，合并上清液，定容到50 mL（若浑浊再次离心），取10 mL上清液，在50℃下氮气浓缩至2 mL，再加入10 mL 5%甲醇水溶液，混匀后作为待净化液。 注：乙酸氨水溶液：乙醇700 mL，氨水4 mL，用水定容至1 L。 二、样品净化（Copure® WAX, 150 mg/6mL） 活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化； 上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液； 淋洗：依次用5 mL水和5 mL甲醇淋洗，抽干小柱； 洗脱：8 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入0.02mmol/L乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。 三、仪器条件 仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000 色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm) 流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液 B：甲醇 洗脱方式：梯度洗脱，见表1 流速：1.0 mL/min 柱温：30 ℃ 进样量：10 μL 检测器：紫外检测器 检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红测定波长为520 nm；亮蓝测定波长为630 nm。 表1 梯度洗脱程序 时间/min A/% B/% 0.01 90 10 12.0 65 35 19.0 55 45 22.5 50 50 23.0 45 55 24.0 35 65 34.0 35 65 35.0 90 10 42.0 90 10 实验结果 加标回收实验结果 表2 加标水平为5 mg/kg回收结果 目标物 回收率% 平均回收率% 1 2 柠檬黄 96.5 94.7 95.6 新红 97.4 101.3 99.4 苋菜红 94.1 95.3 94.7 胭脂红 101.6 98.7 100.2 日落黄 98.5 102.6 100.6 诱惑红 93.8 92.4 93.1 亮蓝 94.3 96.5 95.4 赤藓红 89.3 85.3 87.3 奶茶中着色剂色谱图 图1奶茶添加水平（5.0 mg/kg）中8种着色剂色谱图 订购信息 货号 描述 包装 COPWAX6150 biocomma® Copure®WAX ,150mg/6mL 30支/盒 SDC-3000-D biocomma® 多管涡旋混匀仪 1台/箱 BN24 biocomma® 智能水浴氮吹仪 1台/箱 SF130-22-PTFE PTFE针式过滤器，直径13 mm， 孔径0.22 μm，有机系 100个/盒 SC2-1 2 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425 100个/盒 合成着色剂可以改善食品色泽，刺激感官，增加食欲，在日常生活中应用范围日益广泛，是现代食品工业中装点食品的重要添加剂，但过量使用会对人体健康造成损害。奶茶，含有大量的蛋白、脂肪和糖分，在测定合成着色剂时，该成分容易使固相萃取柱堵塞，导致上柱流速慢，前处理耗时。本方案通过在提取液中加入硫酸锌溶液作为沉淀剂，可大幅度减少蛋白、脂肪和糖分等带来的不利影响。以乙醇氨水溶液提取，混合弱阴离子交换柱净化，高效液相色谱法检测，成功测定了奶茶中柠檬黄、日落黄、新红、胭脂红、苋菜红、诱惑红、亮蓝和赤藓红这8种合成着色剂。本方案操作简单实用，灵敏度高，准确，可满足日常检测需求。一样品提取称取2.0 g试样于50 mL离心管中，加入5 mL硫酸锌溶液（120 g/L），混匀后，乙醇氨水溶液25 mL，涡旋混合1 min，超声提取15 min，以8000 r/min离心5 min。取上清液于干净50 mL离心管中，再加入15 mL提取液重复提取1次，合并上清液，定容到50 mL（若浑浊再次离心），取10 mL上清液，在50℃下氮气浓缩至2 mL，再加入10 mL 5%甲醇水溶液，混匀后作为待净化液。注：乙酸氨水溶液：乙醇700 mL，氨水4 mL，用水定容至1 L。biocomma® Copure® WAX ,150mg/6mL二样品净化Copure® WAX, 150 mg/6mL活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液淋洗：依次用5 mL水和5 mL甲醇淋洗，抽干小柱洗脱：8 mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45 ℃氮吹仪浓缩至0.3 mL左右，加入0.02mmol/L乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机三仪器条件仪器：液相色谱仪，ThermoFisher U3000色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液  B：甲醇洗脱方式：梯度洗脱，见表1流速：1.0 mL/min      柱温：30 ℃     进样量：10 μL检测器：紫外检测器  检测器波长范围：400~800 nm，柠檬黄测定波长为415 nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、赤藓红测定波长为520 nm；亮蓝测定波长为630 nm表1 梯度洗脱程序四实验结果【加标回收实验结果】表2 加标水平为5 mg/kg回收结果【奶茶中着色剂色谱图】图1奶茶添加水平（5.0 mg/kg）中8种着色剂色谱图五订购信息